（海南省第三人民醫(yī)院 泌尿外科，海南 三亞 572000）

前列腺癌是男性生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤，在歐美等一些發(fā)達(dá)國(guó)家，前列腺癌在男性惡性腫瘤的發(fā)病率僅次于肺癌[1]。我國(guó)前列腺癌的發(fā)病率和病死率相對(duì)較低，但由于生活習(xí)慣的改變、診療技術(shù)的革新及人口老齡化等因素，我國(guó)前列腺癌的發(fā)病率逐年上升，嚴(yán)重威脅我國(guó)男性健康[2-3]。目前，前列腺癌的治療方法還是常規(guī)手術(shù)切除再輔助放化療等，然而，5%的前列腺癌患者在診斷時(shí)仍然存在轉(zhuǎn)移性病變。為使晚期前列腺癌患者獲得滿意的治療效果，迫切需要找到一種更有效治療前列腺癌的新指標(biāo)[4]。MicroRNA（miRNA）是長(zhǎng)度約為22核苷酸的非編碼RNA，在細(xì)胞增殖分化和凋亡等生物過(guò)程中發(fā)揮重要作用[5]。通過(guò)Oncomine數(shù)據(jù)庫(kù)整合前列腺癌組織（對(duì)比于正常前列腺組織）表達(dá)譜分析發(fā)現(xiàn)microRNA-802（miR-802）在前列腺癌中升高，提示miR-802可能在前列腺癌中起關(guān)鍵作用。RAB23是Hedgehog（Hh）信號(hào)通路的負(fù)調(diào)控因子，與肝癌、肺癌、胃癌等多種腫瘤密切相關(guān)，而目前RAB23與前列腺癌關(guān)系研究相對(duì)較少，其在前列腺癌中的作用尚未清楚[6-8]。因此，本研究通過(guò)探討前列腺癌組織中miR-802和RAB23表達(dá)水平及RAB23與病理參數(shù)的關(guān)系，為前列腺癌的預(yù)后及治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2013年1月—2016年12月在海南省第三人民醫(yī)院泌尿外科手術(shù)切除的前列腺癌標(biāo)本60例。年齡（68.74±6.82）歲，并選取其相對(duì)應(yīng)癌旁組織（距腫瘤邊緣＞5 cm）作為對(duì)照。術(shù)后立即將標(biāo)本置于液氮中保存。納入標(biāo)準(zhǔn)：①初次治療，臨床和病理資料保存完好；②無(wú)其他類型的腫瘤且無(wú)轉(zhuǎn)移；③術(shù)前未接受放化療及雄激素剝奪治療；④所有標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)證實(shí)。收集患者年齡、血清前列腺特異抗原（prostate specific antigen,PSA）水平、Gleason 評(píng)分、病理分期及手術(shù)切緣陽(yáng)性等情況。生化復(fù)發(fā)：前列腺癌術(shù)后連續(xù)2次PSA監(jiān)測(cè)水平均超過(guò)0.2 μg/L。

1.2 免疫組織化學(xué)檢測(cè)miR-802和RAB23的表達(dá)

取前列腺癌組織及癌旁組織病理石蠟塊進(jìn)行切片，厚度為3 μm，經(jīng)烤片、脫蠟、脫水后進(jìn)行抗原修復(fù)，滴入過(guò)氧化氫阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化氫酶活性，分別加入兔多克隆miR-802抗體和兔多克隆RAB23抗體（美國(guó) Santa Cruz公司）（稀釋比 1∶ 100），4℃過(guò)夜，加入辣根過(guò)氧化物酶HRP標(biāo)記親和純化山羊抗兔二抗（IgG）（武漢艾美捷科技有限公司），室溫30 min，DAB顯色，蘇木精復(fù)染，酒精脫水，二甲苯透明，封片。采用雙盲法進(jìn)行結(jié)果判定，隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野（×400）確定陽(yáng)性染色細(xì)胞的數(shù)量和所占的比例。染色強(qiáng)度（I）評(píng)分：無(wú)色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；同時(shí)計(jì)數(shù)陽(yáng)性細(xì)胞百分率（P）；＞50%為3分，＜25%～50%為2分，＜5%～25%為1分，陽(yáng)性細(xì)胞≤5%為0分；組織學(xué)評(píng)分H=I×P，0～1分為陰性表達(dá)，≥2分為陽(yáng)性表達(dá)。

1.3 隨訪

在手術(shù)結(jié)束后對(duì)患者采用復(fù)診或電話方式進(jìn)行隨訪。隨訪截至2017年12月31日，隨訪5～53個(gè)月，平均25.81個(gè)月，無(wú)失訪者。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料采用例（%）表示，不同組織中miR-802和RAB23的表達(dá)差異采用配對(duì)χ2檢驗(yàn)，miR-802和RAB23的表達(dá)情況與前列腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行判斷；生存期采用中位數(shù)和四分位數(shù)M（P25，P75）表示，采用非參數(shù)檢驗(yàn)；miR-802和RAB23的表達(dá)情況與前列癌患者預(yù)后采用Kaplan-Meier生存曲線分析，行Log-Rank檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-802和RAB23在前列腺癌組織及癌旁組織中的表達(dá)

miR-802和RAB23在前列腺癌組織中的陽(yáng)性率高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

2.2 miR-802和RAB23表達(dá)與前列腺癌患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系

miR-802和RAB23表達(dá)與年齡和術(shù)前PSA不相關(guān)；與Gleason評(píng)分相關(guān)，評(píng)分越高，表達(dá)率越低；與病理分期相關(guān)，表達(dá)高則病理分期早（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表1 miR-802和RAB23在癌旁組織及前列腺癌組織中的表達(dá)比較 [n =60，例（%）]

2.3 miR-802和RAB23表達(dá)與前列腺癌患者預(yù)后的關(guān)系

miR-802和RAB23表達(dá)陰性組3年生存率及生存期與miR-802和RAB23表達(dá)陽(yáng)性組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），miR-802和 RAB23表達(dá)陰性組較miR-802和RAB23表達(dá)陽(yáng)性組高。見(jiàn)表3和圖1。

表2 前列腺癌患者臨床病理參數(shù)與miR-802和RAB23表達(dá)的關(guān)系 例（%）

表3 miR-802和RAB23表達(dá)與前列腺癌患者預(yù)后的關(guān)系

圖1 miR-802和RAB23表達(dá)陽(yáng)性、陰性組Kaplan-Meier生存曲線

3 討論

據(jù)統(tǒng)計(jì)，2016年美國(guó)180 890例新發(fā)前列腺癌病例，并有26 120例前列腺癌患者死亡，同時(shí)，我國(guó)前列腺癌病死人數(shù)約占全球前列腺癌死亡人數(shù)的5%[9-10]。目前關(guān)于前列腺癌惡性程度有效的評(píng)估指標(biāo)仍缺乏，同時(shí)“腫瘤即是一種基因病”理論已經(jīng)得到廣泛認(rèn)可。因此，尋找一種或幾種前列腺癌標(biāo)志物可以指導(dǎo)臨床診斷和治療尤為重要。

miRNA最早在1993年被發(fā)現(xiàn)，廣泛存在于真核生物細(xì)胞內(nèi)，具有高度的組織特異性和保守性，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)上千種miRNA，占人類基因數(shù)量的1%～3%，卻調(diào)控超過(guò)30%的基因表達(dá)，約有50%腫瘤的變異區(qū)域內(nèi)可檢測(cè)到miRNA基因，且其結(jié)果具有可重復(fù)性，提示miRNA可能與腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[11-13]。同時(shí)每個(gè)靶基因又受大量miRNA調(diào)控，選擇與靶基因相關(guān)性最高的miRNA進(jìn)行干預(yù)，是一種新的分子靶向治療方法[14]。通過(guò)靶基因的數(shù)據(jù)庫(kù)（Targetscan和Pic Tar）對(duì)RAB23的靶miRNA進(jìn)行預(yù)測(cè)，發(fā)現(xiàn)有20個(gè)miRNA與RAB23結(jié)合，如hsa-miR-425、hsamiR-142-3p、miR-196b、miRNA-802等。再通過(guò)熱力學(xué)穩(wěn)定性和序列保守性評(píng)分，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，miRNA-802作為RAB23的首選靶miRNA作進(jìn)一步研究。關(guān)于miRNA-802的研究最早是在肝組織中，當(dāng)肝組織受損時(shí)，miRNA-802的表達(dá)升高，且其升高程度與肝組織受損程度呈正相關(guān)[15]。基因干擾是引起特定基因達(dá)到沉默作用的技術(shù)，被《Science》譽(yù)為2002年度生物科技重大突破項(xiàng)目的第一位[16]。通過(guò)基因干擾技術(shù)，阻斷miRNA-802的表達(dá)，為抑制RAB23活性提供了可能[17]。

RAB23是RAB家族的重要成員，位于染色體6pl1-6p12，參與了調(diào)控細(xì)胞膜及囊泡的物質(zhì)運(yùn)輸，從而影響細(xì)胞增殖和遷移[18]。RAB家族成員中有幾個(gè)可以是惡性腫瘤的驅(qū)動(dòng)因素，RAB23與癌癥關(guān)系最為突出，且研究較為清楚。RAB23主要有持續(xù)激活型RAB23、持續(xù)抑制型RAB23和野生型RAB23。通過(guò)轉(zhuǎn)染，用顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)，持續(xù)激活型RAB23和野生型RAB23主要表達(dá)于細(xì)胞內(nèi)，而持續(xù)抑制型RAB23主要表達(dá)于胞漿，通過(guò)對(duì)Hh信號(hào)通路的負(fù)調(diào)控作用，將信息傳遞到細(xì)胞內(nèi)[19]。研究發(fā)現(xiàn)，RAB23在肝癌、胃癌、乳腺癌及前列腺癌等組織中高表達(dá)，且與腫瘤大小呈正相關(guān)，說(shuō)明RAB23促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移[20]。本研究結(jié)果顯示，miR-802和RAB23在前列腺癌組織中的陽(yáng)性率高于癌旁組織；miR-802和RAB23表達(dá)與Gleason評(píng)分相關(guān)，評(píng)分越高，表達(dá)率越低；miR-802和RAB23表達(dá)與病理分期相關(guān)，表達(dá)高則病理分期早；miR-802和RAB23表達(dá)陰性組3年生存率及生存期均高于miR-802和RAB23表達(dá)陽(yáng)性組。

綜上所述，miR-802和RAB23 mRNA在前列腺癌組織中的表達(dá)陽(yáng)性率高于癌旁組織，陰性表達(dá)能獲得較好的預(yù)后。本研究推斷miR-802和RAB23在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用，有望成為前列腺癌早期診斷、預(yù)后判斷及個(gè)體化治療的新型分子標(biāo)志物。