張志強 江洪波 梁雪蘭

摘?要：目的：研究不同等級麥冬化學(xué)成分是否有差異。方法：通過測試不同等級麥冬提取物的氫核磁共振譜，并通過比較氫譜對比，比較不同等級麥冬差異。結(jié)果：不同等級麥冬的氫核磁共振譜整體差異不大，不能直接區(qū)分，但通過分段積分比較可以看出不同等級麥冬之間存在化學(xué)成分差異。結(jié)論：利用氫核磁共振分段積分比較法，可以客觀區(qū)分不同等級麥冬之間的差異，也可以為其它所含成分相似但比例不同的藥材分析提供參考。

關(guān)鍵詞：氫核磁共振;麥冬;等級

中藥材在商品上有等級劃分，比如根據(jù)不同產(chǎn)地，質(zhì)量，大小等因素進行諸如“一等、二等、三等”等的等級劃分，或者采用“統(tǒng)貨”來表示藥材的商品規(guī)格。但是中藥飲片在藥店或者醫(yī)院卻不分等級而進行出售或者處方用藥，因此二者有一定的矛盾。這就給中藥的臨床應(yīng)用及中藥的科學(xué)研究帶來疑惑。

不同等級藥材之間到底有多大的差異？氫核磁共振圖譜可以客觀的反映中藥材中的幾乎所有有機化合物的種類和相對含量，從而區(qū)別出不同等級中藥材之間的差異，明確等級之間的差異。

麥冬為百合科沿階草屬植物麥冬Ophiopogon japonicus Ker-Gawl.的干燥塊根，藥性甘、微苦、微寒，歸胃、肺心經(jīng)，具有養(yǎng)陰生津、潤肺清心之功效。自古以來為常用中藥，臨床上應(yīng)用廣泛，保護心肌缺血和心肌梗塞;免疫調(diào)節(jié)作用;抗衰老作用;降低血糖作用;抗腫瘤作用;抗血栓及血液流變學(xué)改變及其它方面的作用。[1]麥冬的化學(xué)成分主要有甾體皂苷、高異黃酮、多糖、氨基酸、揮發(fā)油等。現(xiàn)代研究表明天然高異黃酮類成分具有良好的抗炎、抗應(yīng)激、抗組胺、鎮(zhèn)咳、心血管保護功能和磷酸化抑制劑等作用。[2]

本研究課題以中藥麥冬為研究對象，利用氫核磁共振技術(shù)探究不同等級麥冬之間的化學(xué)差異。進而推廣應(yīng)用之其它中藥材的等級區(qū)分。

對于不同等級藥材的區(qū)分，大多是根據(jù)外觀、氣味等，對利用化學(xué)成分的區(qū)分僅僅是在某單一成分或一類成分的區(qū)分。氫核磁共振譜可以較為全面的反映藥材的化學(xué)成分和種類，故利用此方法進行整體分析。

1 儀器、試藥與軟件

1.1 儀器

Sartorius BS 224s電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）SENCOR-201旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器儀;W201D恒溫水浴鍋（上海申順生物科技有限公司）;Bruker AV II-600核磁共振儀。

1.2 藥物、試劑與軟件

選取四川綿陽三臺花園鎮(zhèn)、桐君閣大藥房麥冬樣品。對不同來源樣品按重量進行分類，并按傳統(tǒng)麥冬規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)進行分級：

一等麥冬：干貨。呈紡錘形半透明體。表面淡白色，木質(zhì)心細(xì)軟。味微甜，嚼之少粘性。每50克190粒以內(nèi)，無須根、烏花、油粒、雜質(zhì)、霉變。

二等麥冬：干貨。呈紡錘形半透明體。表面淡白色。斷面淡白色。木質(zhì)心細(xì)軟。味微甜，嚼之少粘性。每50克300粒以內(nèi)。無須根、烏花、油粒、雜質(zhì)、霉變。

三等麥冬：干貨。呈紡錘形半透明體。表面淡白色。斷面淡白色。木質(zhì)心細(xì)軟。味微甜，嚼之少粘性。每50克300粒以外，最小不低于麥粒大。間有烏花、油粒不超過10%，無須根、雜質(zhì)、霉變。）。具體麥冬來源如右表所示：

DMSO-d6（ARMAR chemicals）;甲醇（分析純）。麥冬對照品購于中國藥品生物制品檢定所。數(shù)據(jù)分析軟件：Excel;Mestre-C;SIMCA-P 11.0。

2 方法與結(jié)果

2.1 總特征物的提取方法

本試驗的對象是麥冬的整體成分，選取甲醇作為試驗提取溶劑。提取方式為：將麥冬粉碎，取10g，加入甲醇（每次50ml），50℃水浴溫浸提取三次，每次1h;合并濾液，減壓濃縮至無液體，再真空干燥30分鐘。稱重，計算收率。后將提取物用50ml水分散、溶解，用乙酸乙酯萃取三次，每次50ml，合并乙酸乙酯萃取液，回收溶劑得乙酸乙酯萃取物。萃余相回收溶劑，得到水溶性成分。分別稱取乙酸乙酯萃取物和水溶性成分0005g提取物，用0.5ml DMSO-d6溶解，制得供1H-NMR譜測定樣品溶液。

2.2 1H-NMR圖譜的測定條件

1H-NMR的測定條件：恒溫在296K，以DMSO-d6作為內(nèi)鎖，掃描128次，采樣時間域為64 k，譜寬為12335.526 Hz，采樣時間為2.66 s，脈沖間隔D1為3.00 s，采用標(biāo)準(zhǔn)的預(yù)飽和脈沖序列（zgpr）壓制水峰信號，采用CPMG脈沖序列抑制大分子信號。

2.3 1H-NMR圖譜的轉(zhuǎn)換

將測定獲得的各樣品1H-NMR自由衰減（FID）信號，導(dǎo)入MestRe-C軟件，分別進行傅立葉（FT）轉(zhuǎn)換、象限調(diào)整、基線校正及以TMS峰作內(nèi)標(biāo)調(diào)整化學(xué)位移值，即獲得各樣品相應(yīng)的1H-NMR圖譜，可供指紋圖譜分析。將1H-NMR圖譜去掉DMSO-d6溶劑峰，按0.05化學(xué)位移值單位進行分段、積分、調(diào)整相位，即得到每個樣本的各化學(xué)位移值段與相對應(yīng)的信號峰面積積分值。本試驗有18個樣本，即構(gòu)成18×196數(shù)據(jù)矩陣，供模式識別分析。

2.4 麥冬的1H-NMR數(shù)據(jù)的分析及結(jié)果

A，B，C三個系列的不同等級麥冬的乙酸乙酯萃取部分和水溶性部分的1H-NMR圖譜在0-10信號出峰位置均顯示出高度的一致性，幾乎沒有差別，說明不同等級的麥冬的脂溶性和水溶性成分所含的主要成分一致。不同等級間的麥冬只有積分值的微小差異，從圖譜上無法區(qū)分出來。

2.5 不同等級麥冬分段積分值比較

A系列樣品有較好的區(qū)分度，而且不同等級之間存在的差異比較確定，故用A系列樣品為樣本進行不同等級麥冬氫譜分段積分值比較。

2.5.1 脂溶性部分

對A系列樣品的氫譜用軟件處理，從10-1每隔1個單位進行自動積分，排除溶劑段2-3。并對積分?jǐn)?shù)值進行相對比處理，便于比較各個樣品之間的相互比值。不同樣品在A1和A2積分相對值非常接近，這和主成分分析結(jié)果非常一致。三等麥冬A5及麥冬須根A6的1-4的積分值在整個積分值的比例非常大，比一二等級比例更大，說明低等級的樣品所含脂溶性成分的比例相對較大。

2.5.2 水溶性部分

不同樣品在A1，A2和A3在δ3-4積分值占整個積分值的比例顯著高于A4，A5，A6。說明單粒較重的一，二等級麥冬δ3-5的信號顯著高于三等麥冬及麥冬須根，按資料分析，這段區(qū)間信號應(yīng)該來自于糖信號，故推斷高等級的麥冬所含的糖顯著高于低等級的麥冬。

3 討論

（1）對三個系列不同等級的麥冬進行脂溶性部分和水溶性部分的氫核磁共振譜的測定，通過直接分析氫譜發(fā)現(xiàn)，不同等級麥冬之間的氫譜非常相似，直接觀察出峰位置幾乎一摸一樣。說明不同等級的麥冬所含的主要成分是一致的。

（2）但還是發(fā)現(xiàn)不同等級麥冬相同位置的峰的相對高度有所差異。說明不同等級的麥冬所含主要成分之間的比例是有所差異的，說明不同等級的麥冬之間所含主要成分的比例是有差異的。

（3）通過對不同等級麥冬氫譜在各個區(qū)間的積分值比較，一二等的麥冬水溶性部分的氫譜在δ3-5區(qū)間的積分值比例顯著高于三等級和須根的比例，這一區(qū)間是糖的信號區(qū)間，故等級較高的麥冬含有更多的糖類。而脂溶性成分氫譜在δ1-4區(qū)間，低等級麥冬積分值比例顯著高于高等級麥冬，這與以上分析一致。故等級越高的麥冬，即單粒越重的麥冬，所含糖的比例越高。等級越低的麥冬所含脂溶性成分的比例越高。所以不同等級的麥冬主要化學(xué)成分種類沒有顯著差異，主要差異體現(xiàn)在所含糖類和脂溶性成分整體的比例差異。在應(yīng)用是應(yīng)該有所差異，故臨床應(yīng)用時，不同等級麥冬所含的脂溶性成分是有差異的，同等用量的不同等級的麥冬，所含的水溶性成分和脂溶性成分是不一樣的，應(yīng)加以考慮。不同等級的麥冬所含的化學(xué)成分比例有所差異，在臨床用藥時應(yīng)加以考慮，因等級不同的麥冬，在同等重量的情況下，有效成分含量一定有差異，而且等級差別越大，有效成分含量差異也越大。現(xiàn)還無法具體區(qū)分含量差異究竟有多大，還進一步研究。現(xiàn)在存在的用藥問題是：高等級的藥材均進入了藥店展示銷售，而低等級的產(chǎn)品均進入藥廠制成中成藥，臨床療效就無法確定。故對于不同等級的藥品有效成分的含量差異的研究應(yīng)進一步深入，真正保證藥材的療效。

參考文獻：

[1]蔣鳳榮，張旭，范俊，等.麥冬藥理作用研究進展[J].中醫(yī)藥學(xué)刊，2006，24（2）：236-237.

[2]江洪波，黃靜，郭明娟，等.天然高異黃酮研究進展[J].藥學(xué)學(xué)報，2007，42（2）：118-126.