張 瑞，吳 欣，秦永亮，李旖旎，李雅靜，李永軍

（河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院檢驗科，石家莊 050000）

0 引言

乙型肝炎、艾滋病、梅毒和丙型肝炎均為血液傳播性疾病，其檢測結果在手術、輸血等引起的醫(yī)源性感染以及傳染性疾病中具有重要作用。由于病毒檢測存在“窗口期”，所以為了區(qū)分感染途徑、避免醫(yī)院內(nèi)感染、防止醫(yī)療糾紛及醫(yī)務人員職業(yè)暴露，對患者進行輸血及手術前相關感染性標志物進行檢測十分必要[1]。目前，國內(nèi)有多家實驗室使用西門子ADVIAcentaur XP全自動化學發(fā)光免疫分析儀檢測乙肝表面抗原（HBsAg）、人類免疫缺陷病毒抗體（Anti-HIV）、梅毒螺旋體抗體（Anti-TP）及丙型肝炎病毒抗體（Anti-HCV）感染性血清標志物，但尚未見對該儀器進行感染性血清標志物的相關性能評價報道。為了保證實驗室檢驗結果的準確性，本研究按照CNAS-CL02《醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則》、CNAS-CL02-A004《醫(yī)學實驗室質(zhì)量和能力認可準則在臨床免疫學定性檢驗領域的應用說明》中免疫領域的相關要求，對西門子ADVIA Centaur XP全自動化學發(fā)光免疫分析儀檢測上述4種感染性標志物的精密度、臨界值附近精密度、最低檢出限、方法學間比較、分析測量范圍等進行驗證及評價[2-3]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

（1）質(zhì)控品：采用高、低2個濃度水平，2～8℃保存。（2）常規(guī)樣本：來源于本院就診患者以及健康體檢者，共留取新鮮血清標本370例，其中包括Cutoff附近精密度驗證8例、方法學比較360例，分析測量范圍2例，無溶血、黃疸、脂血，于-20℃保存。（3）定值標準品：來源于北京康徹斯坦定值標準品，包括HBsAg（批號 201703002）、Anti-HIV（批號 201611005）、Anti-TP（批號 201701001）和 Anti-HCV（批號 2017 01001）。

1.2 儀器與試劑

西門子ADVIA Centaur XP全自動化學發(fā)光免疫分析儀。西門子ADVIA Centaur XP全自動化學發(fā)光免疫分析儀原裝配套試劑：HBsAg試劑（批號953 27190）及陰性質(zhì)控品（批號040932697）、陽性質(zhì)控品（批號 040932697）；Anti-HIV 試劑（批號 38011213）及陰性質(zhì)控品（批號0322971）、陽性質(zhì)控品（批號0322972、0322973、032 2971）；Anti-TP 試劑（批號 01 698033）及陰性質(zhì)控品（批號599681957）、陽性質(zhì)控品（批號599681957）；Anti-HCV試劑（批號98552269）及陰性質(zhì)控品（批號001592727）、陽性質(zhì)控品（批號001592 727）。校準品均為原裝配套校準品。

1.3 方法

1.3.1 精密度

根據(jù)CLSI EP15-A2[4]文件，采用高、低2個濃度的質(zhì)控品，每天分析一個批次，每個濃度重復檢測4次，連續(xù)檢測5 d（每批間隔24 h）。收集實驗數(shù)據(jù)，計算批內(nèi)精密度與批間精密度，即批內(nèi)變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）和批間 CV。判斷標準：批內(nèi)CV＜10%、批間CV＜15%則為驗證通過。

1.3.2 臨界值附近精密度驗證

備足量且濃度位于臨界值±20%濃度范圍內(nèi)的血清標本，每份標本重復檢測20次，計算陰性率及陽性率。判斷標準：臨界值+20%濃度的標本檢測結果陽性率≥95%、臨界值-20%濃度的標本檢測結果陰性率≥95%則驗證通過。

1.3.3 最低檢出限

最低檢出限的檢測可確定檢測方法的臨界值濃度，一般試劑盒說明書已給出檢測方法的臨界值濃度，但實驗室需建立自己的實際臨界值。將定值標準品做一系列倍比稀釋，稀釋比例為 1∶2、1∶4、1∶8、1∶16，每份稀釋后的標準品均進行5次重復檢測。以5次重復檢測中4次以上陽性的稀釋標準品濃度作為檢出限上限，以5次重復檢測中4次以上陰性的稀釋標準品濃度作為檢出限的下限。判斷標準：達到或超過實際說明書聲明的檢測下限為驗證合格。

1.3.4 方法學間比較

分別選取臨床診斷符合實驗要求的HBsAg、Anti-TP、Anti-HCV陽性血清標本及陰性血清標本各50例；由于HIV陽性標本較少，選取Anti-HIV陽性標本10例、陰性標本50例，分別使用酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA法）及化學發(fā)光微粒子免疫分析法（CMIA法）進行檢測，所得結果進行Kappa一致性檢驗并計算Kappa值，判斷2種檢測方法結果的一致性。Kappa值分級：0～0.20表示極低的一致性，0.21～0.40表示一般的一致性，0.41～0.60 表示中等的一致性，0.61～0.80 表示高度的一致性，0.81～1表示幾乎完全一致。

1.3.5 分析測量范圍

標本未經(jīng)任何處理（稀釋、濃縮或其他處理），由檢測系統(tǒng)直接得到的檢測范圍即為分析測量范圍。以試劑廠家提供的理論線性范圍收集分析測量范圍上限的臨床標本，低值標本可使用稀釋液稀釋后得到，按照一定比例混合（5L、4L+H、3L+2H、2L+3H、L+4H、5H），每個稀釋度重復測定3次，計算均值，記錄結果。以X表示各樣本的理論預期值，以Y表示各樣本的實測值，計算Y=aX+b和相關系數(shù)R2。線性范圍判斷標準：R2＞0.95，回歸方程斜率在 0.97～1.03 范圍內(nèi)。

2 結果

2.1 精密度驗證結果

對 HBsAg、Anti-HCV、Anti-TP、Anti-HIV 4 個指標2個不同濃度質(zhì)控品進行測定，其批內(nèi)及批間精密度結果見表1。

表1 批內(nèi)及批間精密度驗證結果%

由表1可看出，各指標批內(nèi)精密度均＜10%、批間精密度均＜15%，4項指標精密度結果均在允許范圍內(nèi)，有較好的一致性與穩(wěn)定性。

2.2 臨界值附近精密度驗證結果

除HBsAg項目高于臨界值20%的樣本符合率為95%外，其他均為100%，符合判斷標準，驗證通過。詳見表2。

表2 臨界值附近精密度驗證結果

2.3 最低檢出限

血清標志物 HBsAg、Anti-HIV、Anti-TP、Anti-HCV的最低檢出限分別是0.06 IU/ml、4.00 NCU/ml、0.50 NCU/ml、1.00 NCU/ml，均在廠家提供的范圍內(nèi)，驗證通過。

2.4 方法學間比較

表3為CMIA法和ELISA法方法學比較結果。可以得出，CMIA法和ELISA法檢測HBsAg具體比對結果為：陽性符合率100%，陰性符合率100%，總符合率100%，Kappa值=1，一致程度95%，可信區(qū)間[96.3%，100%]。CMIA法和ELISA法檢測Anti-HIV具體比對結果為：陽性符合率90%，陰性符合率100%，總符合率98.3%，Kappa值=0.93，一致程度95%，可信區(qū)間[91.14%，99.71%]。CMIA法和ELISA法檢測Anti-TP具體比對結果為：陽性符合率94%，陰性符合率98%，總符合率96%，Kappa值=0.94，一致程度95%，可信區(qū)間[90.16%，98.43%]。CMIA法和ELISA法檢測Anti-HCV具體比對結果為：陽性符合率94%，陰性符合率98%，總符合率96%，Kappa值=0.94，一致程度95%，可信區(qū)間[90.16%，98.43%]。

表3 CMIA法和ELISA法方法學比較結果例

Kappa值范圍為0.8～1說明兩者幾乎完全一致，本研究Kappa值范圍為0.93～1，總符合率均>95%，因此從方法學上證實了ELISA法和CMIA法兩者檢測結果有高度的一致性。

2.5 分析測量范圍驗證結果

HBsAg線性回歸方程為Y=1.022 7X-1.541 7，R2=0.998 2，R2＞0.95 且斜率在 0.97～1.03 范圍內(nèi)，表明該項目在此范圍內(nèi)有較好的相關性。研究表明，在乙型肝炎感染不同階段HBsAg水平與HBV DNA水平有一定相關性，在慢性HBV感染自然史中HBsAg水平及其動態(tài)變化對HBsAg清除有較好的預測作用，HBsAg水平監(jiān)測對干擾素、核苷（酸）類似物治療療效有一定評估價值[5]。因此，本研究對HBsAg測量范圍進行分析，滿足臨床接受范圍。

3 討論

臨床定性免疫檢驗結果準確可比是醫(yī)療衛(wèi)生工作的基本需要，對檢測系統(tǒng)進行主要性能評價，是檢驗質(zhì)量的重要保證，其分析性能能夠滿足臨床要求是醫(yī)學實驗室認可和檢驗結果互認的根本保證[6]。臨床定性免疫檢驗重要常規(guī)檢驗項目的分析質(zhì)量控制指標主要包括精密度、準確度、分析敏感性（即最低檢出下限）、對轉(zhuǎn)化血清盤的檢測能力、分析特異性（交叉反應）和干擾因素等[7]。ADVIA Centaur XP全自動化學發(fā)光免疫分析儀采用吖啶酯將化學發(fā)光技術和磁性微粒子分離技術相結合的原理進行測定，與ELISA技術相比，具有靈敏度高、特異性強、快速、穩(wěn)定等優(yōu)點。本研究中選取精密度、臨界值附近精密度、最低檢出限、方法學間比較、分析測量范圍等指標進行性能驗證以判斷其是否能滿足臨床需求。

檢測系統(tǒng)最主要的性能指標是準確度和精密度[8]。精密度是指規(guī)定條件下獲得的相互獨立的測量結果之間的一致程度，它是反映儀器整體性能的首要指標，也是進行其他方法學驗證試驗的前提[9]。本研究中選取2個有顯著差異濃度的質(zhì)控品（與廠家精密度評價時所用樣本一致），所檢測的精密度結果滿足臨床需求。

臨界值可作為判斷特定疾病、狀態(tài)或被測量存在或不存在的界限的數(shù)值或量值。臨界值附近精密度驗證主要是驗證在檢測臨界點濃度樣本時臨界值的有效性。此研究過程中，臨界值附近精密度驗證通過判斷標準，也在一定程度上將本研究中臨界值作為半定量檢測的有效截點。

最低檢出限是指可檢測出的最低被測量濃度，是監(jiān)測檢測系統(tǒng)的性能指標，評價其所能測定的最低濃度，以確保檢測質(zhì)量[10]。檢出限代表檢測設備的分析靈敏度，而分析靈敏度又能反映檢測系統(tǒng)或方法分辨微小分析物濃度差異的能力[11]。用于診斷感染的抗原和抗體的定性免疫測定，在不影響測定特異性的情況下，最低檢出限越低越好。本研究 HBsAg、Anti-HIV、Anti-TP、Anti-HCV 的最低檢出限均在廠家提供的范圍內(nèi)。

評價不同儀器、不同檢測系統(tǒng)間結果的可接受性是實驗室管理中實現(xiàn)質(zhì)量目標的重要依據(jù)。本研究應用Kappa一致性檢驗對ELISA法和CMIA法檢測進行數(shù)據(jù)分析，從方法學角度比較具有較高的一致性。

分析測量范圍的建立有助于獲得準確可靠的檢驗結果[12]。主要的評價方法為EP6-A法，在日常檢測過程中，標本的真實濃度只有在分析測量范圍內(nèi)才能保證其可靠性，否則會引起結果的假性增高或偏低。本研究HBsAg項目R2值在允許范圍內(nèi)且能滿足臨床需求。

綜上所述，對 HBsAg、Anti-HIV、Anti-TP、Anti-HCV 4項進行精密度、臨界值附近精密度、最低檢出限、方法學比較結果及分析測量范圍的驗證和評估均滿足要求，因此ADVIA Centaur XP全自動化學發(fā)光免疫分析儀 HBsAg、Anti-HIV、Anti-TP、Anti-HCV 4項可運用于臨床，對臨床檢驗工作的質(zhì)量保證、結果解釋、滿足醫(yī)學實驗室標準ISO 15189的認可要求及不同實驗室間結果互認具有重要意義。