萬(wàn) 芳 楊萬(wàn)哲熙 朱宏飛 趙述艷 王 勇 劉宏為

(1.武漢市衛(wèi)生計(jì)生信息中心 武漢 430010；2.武漢市外國(guó)語(yǔ)學(xué)校2017級(jí)IB3班 武漢 430020；3.湖北省中醫(yī)院 武漢 430074；4.湖北省中醫(yī)藥研究院 武漢 430074；5.武漢大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心 武漢 430070；6.湖北省天門(mén)市第一人民醫(yī)院 天門(mén) 431700)

心跳驟停(Cardiac arrest，CA)是嚴(yán)重危害現(xiàn)代人健康與生存的急危重癥之一[1]。回顧性研究發(fā)現(xiàn)，初始CPCR成功后72h內(nèi)死亡的主要原因依次為頑固性低血壓、心功能衰竭及頻發(fā)頑固室顫等，僅有不到5%的初始CPCR成功病人能夠最終相對(duì)正常存活到出院[2～4]。自主循環(huán)恢復(fù)后心肌功能不全(Postresuscitation myocardial dysfunction，PMD)是CA后低存活率的原因之一[5～7]。CA后心肌損傷作為一種特殊的全心缺血再灌注損傷，目前對(duì)于其發(fā)生機(jī)制尚未完全明確，鑒于其引起的CA后低存活率在臨床CPCR中的重要性，我們擬觀察傳統(tǒng)中藥名方獨(dú)參湯的有效成分-人參皂苷Rg1(Ginsenoside Rg1)對(duì)心跳驟停后小鼠心肌細(xì)胞正五聚蛋白3(Pentraxin-3,PTX3)表達(dá)的影響,并探討其可能的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

成年雄性C57BL/6小鼠由武漢華聯(lián)科實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究院提供。

1.2獨(dú)參湯制備及人參皂苷Rg1有效成分測(cè)定

獨(dú)參湯來(lái)源《醫(yī)方類(lèi)聚》卷一五○引《勞證十藥神書(shū)》，測(cè)定人參皂苷Rg1有效成分達(dá)標(biāo)后備用。

1.3造模方案

用70μL(4℃)KCl (0.5M)靜脈推注，同時(shí)關(guān)閉呼吸機(jī)來(lái)誘導(dǎo)小鼠心跳驟停。

1.4小鼠分組及處理

所有小鼠先隨機(jī)分成兩組(n=40)分別予以獨(dú)參湯1mL(含人參皂苷Rg1有效成分1mg)或者同容量生理鹽水灌胃，每天1次，連續(xù)7d。末次灌胃4h后再?gòu)拿拷M隨機(jī)選擇30只小鼠 (共60只)進(jìn)行心肺復(fù)蘇全心缺血再灌注損傷造模。剩余小鼠分別命名為空白對(duì)照組(n=10)、人參對(duì)照組(n=10)；而造模成功的小鼠則分別命名為模型組和人參干預(yù)組。

1.5觀察指標(biāo)

(1)常規(guī)病理切片檢查小鼠心肌組織病理學(xué)改變；

(2)ELISA法檢測(cè)小鼠外周血及心肌組織中IL-17A、CK、cTnT、TNF-α、IL-6和IL-1β濃度；

(3)RT-PCR分析小鼠心肌組織中IL-17A、IL-6、IL-1β和PTX3 mRNA的表達(dá)；

(4)Western blot檢測(cè)小鼠心肌組織中IL-17A、IL-1β和PTX3的表達(dá)。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用單因素方差分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1各組小鼠心肌組織病理學(xué)改變結(jié)果(HE染色)

空白對(duì)照組

人參對(duì)照組

人參干預(yù)組

模型組

2.2各組小鼠外周血中IL-17A、CK、cTnT、TNF-α、IL-6和IL-1β濃度結(jié)果(表1)

2.3各組小鼠心肌組織中IL-17A、CK、cTnT、TNF-α、IL-6和IL-1β濃度結(jié)果(表2)

2.4各組小鼠心肌組織中IL-17A、IL-6、IL-1β和PTX3 mRNA的表達(dá)結(jié)果(表3)

2.5各組小鼠心肌組織中IL-17A、IL-6、IL-1β和PTX3的表達(dá)結(jié)果(表4)

表1 各組小鼠外周血中IL-17A、CK、cTnT、TNF-α、IL-6和IL-1β濃度比較

IL-17A(pg/mL)CK(IU/L)cTnT(zg/L)TNF-α(pg/mL)IL-6(pg/mL)IL-1β(pg/mL)空白對(duì)照組67.11±5.3240.27±4.1811.45±3.6036.32±2.9418.94±2.779.77±3.76人參對(duì)照組55.63±4.8328.35±3.088.27±1.3627.26±2.1712.17±1.857.16±2.07人參干預(yù)組159.17±16.35*#109.51±12.19*#75.41±9.82*#52.63±6.81*#37.21±3.58*#52.61±7.83*#模型組372.45±28.01*182.75±21.14*137.62±19.35*93.52±11.49*89.66±5.15*114.59±15.13*

注：*與空白對(duì)照組、人參對(duì)照組相比，P<0.05；#與模型組相比，P<0.05。

表2 各組小鼠心肌組織中IL-17A、CK、cTnT、TNF-α、IL-6和IL-1β濃度比較

IL-17A(pg/mL)CK(IU/L)cTnT(zg/L)TNF-α(pg/mL)IL-6(pg/mL)IL-1β(pg/mL)空白對(duì)照組78.62±5.8338.53±3.8714.78±4.9349.85±4.2721.26±4.0510.66±3.85人參對(duì)照組60.27±5.0922.49±2.7612.57±3.0637.59±3.9018.51±3.969.23±2.97人參干預(yù)組177.51±18.16*#91.84±10.52*#69.72±9.11*#113.97±9.14*#77.54±9.81*#51.04±7.15*#模型組397.81±30.22*165.09±18.47*128.95±17.68*198.85±21.72*122.87±11.49*101.84±12.47*

注：*與空白對(duì)照組、人參對(duì)照組相比，P<0.05；#與模型組相比，P<0.05。

表3 各組小鼠心肌組織中IL-17A、IL-6、IL-1β和PTX3 mRNA表達(dá)的比較(arb. unit)

IL-17AIL-6IL-1βPTX3空白對(duì)照組0.07±0.030.05±0.020.04±0.020.79±0.19人參對(duì)照組0.05±0.020.04±0.010.04±0.010.86±0.21人參干預(yù)組0.51±0.15*#0.75±0.17*#0.63±0.16*#0.44±0.13*#模型組 0.95±0.21* 0.94±0.22* 0.97±0.29* 0.14±0.07*

注：*與空白對(duì)照組、人參對(duì)照組相比，#P<0.05；與模型組相比，P<0.05。

表4 各組小鼠心肌組織中IL-17A、IL-6、IL-1β和PTX3蛋白表達(dá)的比較(arb. unit)

IL-17AIL-6IL-1βPTX3空白對(duì)照組0.06±0.020.05±0.020.04±0.020.87±0.21人參對(duì)照組0.04±0.010.04±0.020.03±0.010.92±0.22人參干預(yù)組0.35±0.13*#0.49±0.14*#0.52±0.15*#0.49±0.15*#模型組 0.86±0.20* 0.91±0.21* 0.95±0.27* 0.17±0.09*

注：*與空白對(duì)照組、人參對(duì)照組相比，P<0.05；#與模型組相比，P<0.05。

3 討論

引起心肌缺血再灌注損傷的因素很多,近年來(lái)研究表明各種炎癥調(diào)節(jié)因子以及炎癥反應(yīng)在心肌缺血再灌注損傷中起著越來(lái)越重要的作用[2,3,8]。PTX3已被證實(shí)參與多種心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展[9～10]，被認(rèn)為是脈管系統(tǒng)的 CRP[11～13]。Salio[14]等發(fā)現(xiàn)在急性心肌梗死的小鼠中PTX3增高具有一定的心血管保護(hù)作用，可以減少血管再通后無(wú)復(fù)流現(xiàn)象及梗死心肌范圍。目前對(duì)PTX3在心肌頓抑(Myocardial stunning)或者復(fù)蘇后心功能不全(Postresuscitation myocardial dysfunction，PMD)中的抗炎癥作用研究還處于空白，本研究觀察了傳統(tǒng)中藥名方獨(dú)參湯的有效成分-人參皂苷Rg1對(duì)心肺復(fù)蘇全心缺血再灌注損傷后小鼠心肌細(xì)胞正五聚蛋白3表達(dá)的影響：與空白對(duì)照組和人參對(duì)照組比較，模型組和人參干預(yù)組小鼠外周血中IL-17A、cTnT、CK、TNF-α、IL-6和IL-1β濃度均顯著升高，PTX3濃度顯著降低； 心肌細(xì)胞IL-17A mRNA表達(dá)和蛋白含量均顯著升高，PTX3 mRNA表達(dá)和蛋白含量均顯著降低；與模型組比較，人參干預(yù)組小鼠外周血中IL-17A、cTnT、CK、TNF-α、IL-6和IL-1β濃度均顯著降低，心肌細(xì)胞PTX3 mRNA表達(dá)和蛋白含量均顯著升高。本研究結(jié)果說(shuō)明，人參皂苷Rg1具有對(duì)抗心跳驟停后心肌缺血再灌注損傷的作用,其機(jī)制可能與PTX3限制形成IL-17A的T細(xì)胞的擴(kuò)增并降低IL-17A的表達(dá)有關(guān)。