管毓向 安艷蘇

（1 云南省曲靖市婦幼保健院 云南 曲靖 655000）

（2 云南省曲靖市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心 云南 曲靖 655000）

黃石結(jié)腸炎散（以下簡稱“本品”）系云南省曲靖市婦幼保健院與我市國立中醫(yī)醫(yī)院聯(lián)合研制的純中藥制劑，由川黃連，石榴皮等7味中藥組成。具有清熱燥濕、理氣止痛、收斂止泄之功效。臨床用于治療各類結(jié)腸炎取得滿意療效?，F(xiàn)將其制法、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、臨床應(yīng)用報道如下：

1.實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

美國安捷倫1260型高效液相色譜儀（包括G1311C系列四元泵，G1314FVWD檢測器，G1316A柱溫箱，G1329B自動進(jìn)樣器）；KQ-300UDB型雙頻數(shù)控超聲清洗器（昆山）；METTLE MS205DU電子天平（上海）。

1.2 材料

硅膠G（山東XX化工有限公司，批號：180425），硅膠GF25（4山東XX化工有限公司，批號：180406）。

1.3 對照品、對照藥材及試劑

鹽酸小檗堿對照品（批號：110713-201212，中國食品藥品檢定研究院）；防風(fēng)對照藥材（批號：947-201209，中國食品藥品檢定研究院）；乙腈為色譜純；水為重蒸餾水，其余試劑為分析純。

1.4 樣品

“本品”樣品由我市國立中醫(yī)醫(yī)院生產(chǎn)（批號：20180701，20180902，20181210，20190102，20190218），固腸止瀉丸（藥店購買，西安XX公司）。

2.處方及制法

2.1 處方

川黃連30g，延胡索（醋炙）30g，木香30g，防風(fēng)10g，石榴皮10g，罌粟殼（蜜炙）10g，椿根皮10g。

2.2 制法

取川黃連、石榴皮等七味中藥材進(jìn)行凈制，延胡索、罌粟殼按規(guī)定方法進(jìn)行炮制，然后加工成細(xì)粉，分裝，每袋6g。

3.質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

3.1 性狀

本品應(yīng)為深黃色至棕黃色的粉末，味苦、澀，具木香特有氣味。

3.2 鑒別

鑒別：（1）取“本品”4g，置具塞錐形瓶中，加丙酮20ml，振搖15分鐘，濾過，濾液水浴蒸干，殘?jiān)右掖?ml使溶解，作為“本品”溶液。另取防風(fēng)對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。照TLC[1]實(shí)驗(yàn)，取“本品”溶液和對照藥材溶液，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，點(diǎn)樣量各5μl，展開劑為氯仿-甲醇（8:2），展開，置254nm紫外光下檢視?！氨酒贰鄙V中，在與防風(fēng)色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。（鑒別防風(fēng)的存在）

（2）取“本品”0.2g，置具塞錐形瓶中，加純化水30ml，超聲處理20分鐘，過濾，濾液用氨試液調(diào)節(jié)pH值約9.5，加氯仿20ml，振搖提取，提取物加鹽酸-乙醇（1:100）溶液2ml使溶解，作為“本品”溶液。另取鹽酸小檗堿對照品5mg，加甲醇25ml使溶解，作為對照品溶液。照TLC[1]實(shí)驗(yàn)，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，點(diǎn)樣量各5μl，展開劑為正丁醇-冰醋酸-純化水（10:2:2），展開，置365nm紫外光下檢視?！氨酒贰鄙V中，在與鹽酸小檗堿色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。（鑒別川黃連的存在）

3.3 檢查

“本品”應(yīng)符合中國藥典2015年版四部0115[2]之規(guī)定。

3.4 含量測定

采用HPLC[3]測定。

3.4.1 色譜條件 色譜柱：美國安捷倫C18色譜反相柱（4.6mm×200mm，3μm）；流動相：乙腈-0.03mol/LKH2PO3溶液（55:45）；流速：1.0ml/min；檢測波長：265nm。

3.4.2 對照品溶液的制備 取鹽酸小檗堿對照品適量，用水制成含鹽酸小檗堿8μg/ml的溶液，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，即得。

圖1 高效液相色譜圖（A-鹽酸小檗堿對照品、B-樣品、C-陰性樣品）

3.4.3 “本品”溶液的制備 取“本品”細(xì)粉約0.2g，置200ml燒杯中，加煮沸的純化水適量，攪拌使鹽酸小檗堿溶解，放冷，轉(zhuǎn)移至200ml容量瓶中，加純化水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，即得。

3.4.4 陰性樣品溶液的制備 取去川黃連的“本品”處方，按“本品”制法制備陰性樣品，按“3.4.3”項(xiàng)下制備待測定溶液，即得。

3.4.5 測定方法 按上述色譜條件，進(jìn)樣量10μl，以峰面積按外標(biāo)法計算，即得。

3.4.6 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)與專屬性考察 在篩選的色譜條件下，取“3.4.4”項(xiàng)下溶液、“3.4.2”項(xiàng)下溶液與“本品”溶液各10μl進(jìn)樣，記錄色譜圖，陰性樣品溶液在與鹽酸小檗堿對照品峰處未見色譜峰出現(xiàn)，說明該方法專屬性良好。高效液相色譜圖見圖1。

3.4.7 線性關(guān)系考察 精密吸取“3.4.2”項(xiàng)下的溶液5μl，10μl，15μl，20μl，25μl，分別測定色譜峰面積。以鹽酸小檗堿進(jìn)樣量（W，μg）為橫坐標(biāo)、峰面積（A）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，回歸方程為A=1.37×103W+37.44，r=0.9996。鹽酸小檗堿濃度在0.04～0.2mg·ml-1之間線性關(guān)系良好。結(jié)果見表1。

3.4.8 進(jìn)樣精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取“3.4.2”項(xiàng)下的溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，其峰面積的RSD為0.72%（n=6），說明進(jìn)樣精密度良好。

3.4.9 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取“本品”，研成細(xì)粉，取約0.2g，共5份，精密稱定，按“3.4.12”項(xiàng)下的方法測定，其結(jié)果的RSD為0.94%，說明重復(fù)性良好。

3.4.10 樣品溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取樣品溶液，考察其穩(wěn)定性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明樣品溶液在制備后8h內(nèi)測定穩(wěn)定，能滿足測定需要。

表1 鹽酸小檗堿線性關(guān)系考察結(jié)果

3.4.11 回收率實(shí)驗(yàn) 取“本品”按“3.4.3”項(xiàng)下制備樣品溶液，按“3.4.5”項(xiàng)下方法測定鹽酸小檗堿含量為7.98mg·g-1（批號201860701），約0.1g，精密稱定，精密加入鹽酸小檗堿對照品溶液（50μg·mL-1）2ml，按“3.4.2與3.4.3”項(xiàng)下的方法分別制備對照品溶液與樣品溶液，按“3.4.5”項(xiàng)下方法測定，計算，平均回收率為100.21%，RSD=0.49%（n=5）。結(jié)果見表2。

表2 加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.4.12 本品中鹽酸小檗堿的含量測定 取5個批號的“本品”，按“3.4.3”項(xiàng)下制備樣品溶液，按“3.4.5”項(xiàng)下制備對照品溶液，進(jìn)樣量各10μl，以峰面積按外標(biāo)法定量，結(jié)果見表3.

表3 樣品測定結(jié)果（n=3）

4.臨床應(yīng)用

選取臨床上確診的結(jié)腸炎患者298例，隨機(jī)分為治療組、對照組，其中治療組200例，用“本品”作治療，對照組98例，用固腸止瀉丸作對照治療。

4.1 給藥方法治療組“本品”劑量每次6克，每日2次，飯后口服。對照組固腸止瀉丸劑量每次4克，每日3次，口服。

4.2 療效標(biāo)準(zhǔn)用藥一周大便次數(shù)明顯減少、腹痛、腹瀉及其它伴隨癥狀及體征消失或明顯減輕為有效，以上癥狀無明顯改善或加重為無效。

4.3 結(jié)果見表4。治療組總有效率為97.5%，對照組總有效率90.8%，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)檢驗(yàn)，χ2=5.17，療效治療組優(yōu)于對照組，差異有顯著性（P＜0.05）。

表4 黃石結(jié)腸炎散治療組與固腸止瀉丸對照組療效比較

5.結(jié)論

“本品”合理運(yùn)用中醫(yī)標(biāo)本兼治、治標(biāo)固本、固腸止瀉之理論，具有清熱燥濕、理氣止痛、收斂止泄之功效。臨床用于治療各種結(jié)腸炎（包括慢性非特異性結(jié)腸炎、過敏性結(jié)腸炎、息肉性結(jié)腸炎）。“本品”制法簡單，質(zhì)量容易控制、療效肯定，在結(jié)腸炎治療中效果滿意。