胡曉薇 朱衛(wèi)中 周慧敏 趙恩慧 葉明建 李金美

浙江省麗水市人民醫(yī)院(323000)

安全套是實(shí)施安全節(jié)育的主要工具，也是人類輔助生殖技術(shù)(ART)不可或缺的輔助用品。為了解目前市場(chǎng)主流安全套的精子生物毒性，本研究進(jìn)行了精子生物毒性分析。

1 材料與方法

1.1 儀器

西班牙SCA精子分析儀用于精子活力測(cè)定。

1.2 精液

收集男科實(shí)驗(yàn)室當(dāng)天完成精液分析且結(jié)果正常的精液20份，用含10%HAS的緩沖輸卵管液培養(yǎng)液(SAGE產(chǎn)品，批號(hào)18200068)稀釋混合精液，配制成精子濃度50×106/ml的精子應(yīng)用液。取精前簽署“剩余精液用于科研的知情同意書(shū)”。

1.3 安全套

從當(dāng)?shù)匕踩鬃畲笈l(fā)商處獲取市場(chǎng)銷量最大的10個(gè)品牌共20個(gè)型號(hào)的安全套各2個(gè)包裝。另取本院生殖中心常規(guī)陰道B超檢查用金香安全套(無(wú)油)、取卵用的橡膠B超探頭隔離護(hù)套(無(wú)油)和專用于ART的MaleFree SCD-Ⅰ型精液采集器(無(wú)油)各2只，所有安全套均在使用有效期內(nèi)。23種安全套的品牌、型號(hào)、生產(chǎn)廠家與批次見(jiàn)表1。

表1 16個(gè)品牌23種安全套的型號(hào)、生產(chǎn)廠家與批次

1.4 方法

1.4.1樣本制備取各型號(hào)安全套1個(gè)，編號(hào)。 打開(kāi)外包裝，將安全套外展至5～6cm。 用加樣器吸取混勻的精子應(yīng)用液1.0ml加入到安全套球囊部，將安全套平放在震蕩器托盤上并平壓，使精液與安全套內(nèi)表面充分接觸，低速震蕩3min，然后用加樣器將精液轉(zhuǎn)移至另一個(gè)帶蓋小試管。

1.4.2油滴觀察取小試管內(nèi)精子應(yīng)用液10μl于載玻片上覆蓋玻片，高倍鏡鏡檢5個(gè)視野油滴數(shù)量。滿視野油滴為“++++”,>1/2視野為“+++”， 1/2～1/4視野為“++”，10～20個(gè)油滴/視野為“+”，1～9個(gè)油滴/視野為“少量”，5個(gè)視野中油滴時(shí)有時(shí)無(wú)為“偶見(jiàn)”。至60min再次觀察油滴數(shù)量。

1.4.3精子活力檢測(cè)至第4min，分別取試管底部精子應(yīng)用液各10μl至兩塊Makler計(jì)數(shù)板，至第5min依次在精液分析儀上檢測(cè)精子活力，記錄前向運(yùn)動(dòng)精子(PR)、非前向運(yùn)動(dòng)精子(NP)及不動(dòng)精子(IM)的比率(%)。取二次結(jié)果平均值。至60min，重復(fù)精子活力檢測(cè)。

1.4.4正常精液對(duì)照在開(kāi)始1.4.3步驟前，直接檢測(cè)精子應(yīng)用液的精子活力，作為正常精液對(duì)照。

1.4.5檢測(cè)條件所用耗材均為精子存活試驗(yàn)合格的胚胎實(shí)驗(yàn)室一次性用品，實(shí)驗(yàn)溫度24～26℃。

1.5 結(jié)果計(jì)算與判斷

精子存活指數(shù)=各型號(hào)安全套的活動(dòng)精子(PR+NP)比率/正常精液對(duì)照的活動(dòng)精子(PR+NP)比率。精子存活指數(shù)<0.80為有生物毒性[1]。

2 結(jié)果

2.1 安全套接觸正常精液5min后精子活力

23種安全套中有18種的精子存活指數(shù)<0.80，其中有7種精子存活指數(shù)<0.50，表明在5min后有> 50%的精子被殺滅存在生物毒性。有5種安全套的精子存活指數(shù)>0.80，其生物毒性相對(duì)較弱，分別是市場(chǎng)上流通的愛(ài)超(活力)、杰士邦(爽滑倍潤(rùn))、比翼鳥(niǎo)安全套和生殖中心用于陰道B超檢查的金香安全套(無(wú)油)、MaleFree SCD-Ⅰ型精液采集器(無(wú)油)。取卵用的橡膠B超探頭隔離護(hù)套(無(wú)油)的精子存活指數(shù)僅0.13，具有較強(qiáng)的殺精效果。

2.2 安全套接觸正常精液60min后精子活力

23種安全套的存活指數(shù)均<0.80，表明對(duì)精子有生物毒性。其中2種無(wú)油安全套的存活指數(shù)相對(duì)降幅較小，分別為0.79和0.79；其余21種安全套的存活指數(shù)均≤0.50，表明60min后有≥50%的精子被殺滅。

2.3 油滴觀察

23種安全套除了3種無(wú)油安全套外，5min內(nèi)均見(jiàn)到+～+++不等油滴，60min后油滴明顯減少， >50%油滴消失。

2.4 不同品牌安全套差異

品牌相同而型號(hào)不同的含油安全套檢測(cè)結(jié)果相近，如6種杜蕾斯、2種亞馬遜和2種激情地帶安全套。而品牌相同的金香(無(wú)油)和金香(含油)安全套則結(jié)果差異明顯。 16個(gè)品牌23種型號(hào)安全套的生物毒性結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 16個(gè)品牌23種型號(hào)安全套的生物毒性

*精子存活指數(shù) ≥0.80**精子存活指數(shù)≤0.50△說(shuō)明書(shū)標(biāo)明潤(rùn)滑劑成分為硅油▲說(shuō)明書(shū)注明“未添加殺精劑” R:前向運(yùn)動(dòng)精子；NP:非前向運(yùn)動(dòng)精子;IM:不動(dòng)精子

3 討論

市場(chǎng)上的安全套采用天然乳膠為基質(zhì)材料,添加防老劑、促進(jìn)劑、硫化劑等橡膠助劑,增強(qiáng)安全套的物理化學(xué)性能，但對(duì)精子具有生物毒性[2-6]。根據(jù)添加潤(rùn)滑劑的不同, 安全套可分為硅油型和水溶性兩大類，有的安全套在潤(rùn)滑劑中加入殺精劑與安全套的膠膜構(gòu)成雙重屏障[2，7-8]。

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB7544-2009對(duì)安全套添加潤(rùn)滑劑沒(méi)有強(qiáng)制要求[9]，但生產(chǎn)廠家為增加安全套的潤(rùn)滑度，一般在安全套的內(nèi)外膜添加了硅油或其它水溶性潤(rùn)滑劑[5]。本次實(shí)驗(yàn)的市場(chǎng)主流的13個(gè)品牌20種安全套全部添加了潤(rùn)滑劑(有油)，其中有17種安全套的外包裝上注明潤(rùn)滑劑中不含殺精劑，但所有安全套在與精液接觸5min后精子存活指數(shù)均<0.80，提示安全套皆有精子生物毒性。那么這些精子生物毒性是來(lái)自安全套的乳膠薄膜，還是與添加的潤(rùn)滑劑有關(guān)。

硅油為無(wú)色、無(wú)味和透明的油狀液體，不溶水，廣泛應(yīng)用于醫(yī)療及日化用品[10-12]。本文結(jié)果顯示硅油及其它潤(rùn)滑劑微溶于精液，其油滴隨著時(shí)間延長(zhǎng)逐漸減少或消失。然而無(wú)油的金香安全套和MaleFree SCD-Ⅰ型精液采集器的精子存活指數(shù)明顯好于其它有油的安全套，似乎佐證硅油或其它潤(rùn)滑劑存在精子生物毒性。我們認(rèn)為硅油或潤(rùn)滑劑本身沒(méi)有毒性，而是膠乳基質(zhì)、添加劑以及生產(chǎn)過(guò)程中產(chǎn)生的有害物質(zhì)具有脂溶性，溶解于安全套的硅油或潤(rùn)滑劑中，從而表現(xiàn)出較明顯的殺精作用。而無(wú)油的安全套與精液接觸的時(shí)間短暫，其毒性尚未徹底釋放，故表現(xiàn)不出明顯的殺精能力。但無(wú)油的橡膠B超探頭隔離護(hù)套卻表現(xiàn)出很強(qiáng)的殺精效果，可能是產(chǎn)品材質(zhì)或質(zhì)量問(wèn)題所致。

余美等[13]報(bào)道,安全套作為陰道B超探頭的隔膜，可將安全套表面具有殺精功能的潤(rùn)滑液殘留在女性陰道內(nèi)，起到了抑制或殺死精子作用，從而影響卵泡監(jiān)測(cè)婦女的正常受孕。本文結(jié)果也提示市場(chǎng)流通普通和生殖中心專用的安全套均具有精子生物毒性，若使用了較強(qiáng)精子生物毒性的安全套,會(huì)產(chǎn)生諸多副作用。

綜上所述，用于ART相關(guān)檢查或治療所需的安全套，應(yīng)該選擇未添加殺精劑和無(wú)油的產(chǎn)品，在精子存活實(shí)驗(yàn)進(jìn)行篩查，選用低精子生物毒性的安全套。