劉春花， 游景瑞， 陳梅倫若， 李勇軍， 曹闖， 蘭燕宇， 劉亭**

(1.貴州醫(yī)科大學 民族藥與中藥開發(fā)應用教育部工程研究中心&省部共建藥用植物功效與利用國家重點實驗室， 貴州 貴陽 550004； 2.貴州醫(yī)科大學 貴州省藥物制劑重點實驗室， 貴州 貴陽 550004； 3.貴州醫(yī)科大學 藥學院， 貴州 貴陽 550025)

毛葉木姜子(LitseamollisHemsl.)和紅葉木姜子(LitsearubescensLec.)均是樟科木姜子屬多年生木本植物，是落葉灌木或落葉小喬木，生于山坡灌叢中或常綠闊葉林緣或次生闊葉林中，產(chǎn)于廣東、廣西、湖南、湖北、四川、貴州、云南、西藏等地[1]，尤其在貴州省資源豐富，民間常將其果實藥食兩用，均作為木姜子入藥[2]。毛葉木姜子俗稱山蒼子、香桂子、畢澄茄、木香子[3]，紅葉木姜子又名辣姜子、野春桂、雞油果[4]，二者為同屬植物，果實均有溫中行氣止痛、燥濕健脾消食、解毒消腫的功效[5]，主治胃寒腹痛、暑濕吐瀉、食滯飽脹、痛經(jīng)、疝痛、瘧疾及瘡瘍腫痛等，還能作為調(diào)料廣泛食用[6-7]。毛葉木姜子和紅葉木姜子的果實均可入藥，現(xiàn)代藥理學研究發(fā)現(xiàn)同科屬木姜子植物果實中含有豐富的揮發(fā)油類成分，具有顯著的抗菌、抗炎和抗氧化等重要的藥用價值[8-12]，但其形態(tài)相似，難以區(qū)分。因此，本文通過對毛葉木姜子和紅葉木姜子果實的性狀特征和內(nèi)部顯微特征進行研究，旨在為兩種中藥的鑒別提供科學依據(jù)。

1 實驗與方法

1.1 藥物、主要試劑與儀器

毛葉木姜子和紅葉木姜子藥材均采集于貴州省，經(jīng)貴州醫(yī)科大學中藥、民族藥標本館龍慶德副教授鑒定為樟科植物毛葉木姜子(批號MY20170901，MY20171102，MY20171103，MY20180804，MY20180905，MY20181006)和紅葉木姜子(批號HY20171001，HY20171002，HY20180903，HY20180904，HY201801105，HY20181106)的果實，植物樣本存放于貴州醫(yī)科大學貴州省藥物制劑重點實驗室。水合氯醛(批號20160705)，和丙三醇(批號2014015)購自國藥集團化學試劑有限公司，蒸餾水實驗室自制。奧林巴斯CX41簡易偏光顯微鏡購自奧林巴斯公司，明美MC-50顯微成像系統(tǒng)購自廣州明美光電技術(shù)有限公司，WP-ΜP-II-20實驗室超純水機購自四川沃特爾水處理設(shè)備有限公司，Pro'skit PD-153游標卡尺購自上海寶工工具有限公司。

1.2 方法

1.2.1性狀鑒別 采用游標卡尺對毛葉和紅葉木姜子果實的大小進行測量并取平均值，3批樣品，每批30個重復；采用看、摸、聞、嘗等直觀的方法對樣品進行形狀、色澤、表面、質(zhì)地、斷面和氣味的鑒定。

1.2.2顯微鑒別 利用泡沫作為加持物夾住果實進行徒手切片，切取薄片，選擇薄片置于載玻片上，滴加甘油醋酸試液或者加水合氯醛試液加熱透化，再滴加稀甘油，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察其內(nèi)部結(jié)構(gòu)；挑取少許粉末(過4號篩)置載玻片上，滴加蒸餾水、水合氯醛試液或稀甘油試液等(必要時，加熱透化)，蓋上蓋玻片，置顯微鏡下觀察、測量和拍照。

2 結(jié)果

2.1 植物的性狀特征

毛葉木姜子和紅葉木姜子原植物在樹皮上斑點、小枝顏色、葉上下面色有無柔毛、花梗上柔毛顏色等方面存在差異，可以作為鑒別的依據(jù)，見表1。

表1 毛葉木姜子和紅葉木姜子不同部位植物性狀比較Tab.1 Comparison of the botany character between the L. mollis and L. rubescens

2.2 果實的性狀特征

比較發(fā)現(xiàn)，二者的性狀特征整體相似，在顏色、大小、表面皺紋和質(zhì)地等方面存在差異，可以作為鑒別的依據(jù)。見圖1、表2。

毛葉木姜子 紅葉木姜子圖1 毛葉木姜子果實和紅葉木姜子果實的外觀性狀對比Fig.1 Comparison of appearance and characters between the fruits of L. mollis and L. rubescens

鑒別內(nèi)容毛葉木姜子紅葉木姜子大小直徑4～8 mm直徑4～6 mm表面特征外表面黑棕色至黑褐色,具淺網(wǎng)狀皺紋外表面觀深棕色至褐黑色,具深網(wǎng)狀皺紋外、中果皮特征黑褐色,質(zhì)地緊實,不易剝落黑褐色,質(zhì)地疏松,易剝落內(nèi)果皮特征表面黑棕色,質(zhì)地堅硬而脆,有光澤表面褐黑色,質(zhì)地脆,無光澤子葉特征淡黃色黃色

2.3 果實的橫切面顯微特征

毛葉木姜子橫切面特征結(jié)構(gòu)顯示，外果皮為單列扁平形細胞；中果皮薄壁細胞十余列，呈類圓形或類方形，淺棕色，大量的草酸鈣方晶散在；內(nèi)果皮為單列壁厚細胞，棕色，排列成柵欄狀；種皮細胞單層；子葉細胞為類方形、類圓形薄壁細胞，含油滴和糊粉粒，見圖2A。紅葉木姜子橫切面特征結(jié)構(gòu)顯示，外果皮為單列細胞扁平形細胞，有的內(nèi)含棕紅色物質(zhì)；中果皮薄壁細胞十余列，呈類圓形或類方形，棕紅色，油細胞豐富，靠近外果皮側(cè)顏色較深，靠近內(nèi)果皮側(cè)含有長柱形的細胞環(huán)帶，排列成柵狀；內(nèi)果皮為單列壁厚細胞，棕褐色，排列成柵欄狀；種皮細胞單層；子葉細胞為類方形、類圓形薄壁細胞，含豐富的棕黃色油滴，見圖2B。

注：A為毛葉木姜子，B為紅葉木姜子；(1)外果皮，(2)中果皮，(3)草酸鈣方晶，(4)內(nèi)果皮柵狀細胞，(5)種皮，(6)子葉，(7)油細胞，(8)中果皮柵狀細胞層。圖2 毛葉木姜子和紅葉木姜子橫切面顯微特征(10×10) Fig.2 Microscopic features of transverse section of L. mollis and L. rubescens fruits

2.4 粉末的顯微特征比較

毛葉木姜子粉末深棕色，外果皮細胞呈多角形，棕色，壁??；中果皮細胞呈類圓形或類方形，棕色，壁較厚；內(nèi)果皮細胞表面觀扁平形或不規(guī)則形狀，細胞之間界限不清晰，壁極厚，胞腔小，層紋不明顯，有的可見孔溝，有的可見大量的草酸鈣方晶；內(nèi)果皮細胞斷面觀排列成柵欄狀，長230～360 μm，有的胞腔內(nèi)含草酸鈣方晶；種皮細胞呈不規(guī)則多角形或類方形，壁網(wǎng)狀增厚，表面密布網(wǎng)狀紋理；草酸鈣方晶散在，直徑為5～16 μm；子葉細胞含油滴和糊粉粒，但是在全藥材粉碎的樣品中不易觀察到完整的特征，可能由于該組織容易粉碎而被破壞，見圖3A。紅葉木姜子粉末棕褐色，外果皮細胞呈多角形，壁薄，有的內(nèi)含棕紅色物質(zhì)；中果皮細胞呈類圓形或類方形，棕色，壁稍厚；內(nèi)果皮細胞呈不規(guī)則形狀，垂周壁波狀彎曲，壁極厚，層紋明顯，胞腔??；內(nèi)果皮柵狀細胞長柱形，長190～224 μm，壁厚，有的包腔內(nèi)含草酸鈣方晶；種皮細胞呈不規(guī)則多角形或類方形，壁網(wǎng)狀增厚，表面密布網(wǎng)狀紋理；草酸鈣方晶單個散在，直徑為10～25 μm；子葉細胞含脂肪油滴及糊粉粒，油細胞含棕黃色分泌物，但是在全藥材粉碎的樣品中也不易觀察到完整的特征，可能由于該組織容易粉碎而被破壞，見圖3B。

注：A為毛葉木姜子，B為紅葉木姜子；(1)外果皮細胞，(2)中果皮細胞，(3)內(nèi)果皮細胞(表面觀)，(4)內(nèi)果皮柵狀細胞(斷面觀)，(5)種皮細胞，(6)草酸鈣方晶。圖3 毛葉木姜子粉末和紅葉木姜子粉末顯微特征(×40) Fig.3 Microscopic features of powder of L. mollis and L. rubescens fruits

3 討論

毛葉木姜子和紅葉木姜子雖然在原植物性狀上有明顯區(qū)別，但因其藥用部位為果實，難以見到原植物，因此研究毛葉和紅葉木姜子果實的形狀特征和顯微特征具有很重要的意義。然而，毛葉木姜子和紅葉木姜子果實外觀形狀非常相似，難以區(qū)分，經(jīng)常存在來源混淆的情況，所以本文主要對毛葉木姜子和紅葉木姜子的果實鑒別進行研究。中藥鑒定是中藥應用和研究的基本工作，其中性狀鑒定是傳統(tǒng)鑒定方法中的重要手段，是我國中醫(yī)工作者長期經(jīng)驗積累的總結(jié)，該鑒定方法簡單、快速、易行，意義重大[13-14]，因此采用該方法對毛葉和紅葉木姜子進行性狀鑒定。毛葉木姜子和紅葉木姜子性狀和顯微特征都非常相似，但其大小、顏色、表面網(wǎng)狀皺紋深淺、果皮質(zhì)地和胚乳的顏色等方面存在差異，如毛葉木姜子的果實比紅葉木姜子稍大，顏色偏淺，外表面網(wǎng)狀皺紋較淺，外、中果皮質(zhì)地結(jié)實，不易與內(nèi)果皮剝離，內(nèi)果皮顏色較淺，胚乳顏色也偏淺，紅葉木姜子的特征與此相反，均可作為鑒別毛葉木姜子和紅葉木姜子的依據(jù)。中藥顯微鑒定是利用顯微技術(shù)確定中藥品種和質(zhì)量的一種鑒定方法，是目前中藥材鑒別的主要方法之一[15]。中藥顯微制片技術(shù)是中藥顯微鑒定的最重要環(huán)節(jié)之一[16-17]。本研究對橫切面制片方法進行了摸索和優(yōu)化，考察了用不同加持物(如胡蘿卜、馬鈴薯和泡沫等)夾住果實進行徒手切片，也考察了是否軟化果實而進行切片的方法，最終利用泡沫作為加持物成功切制了切片，并制備了橫切面的臨時裝片。由于紅葉木姜子外、中果皮質(zhì)地較疏松，切片時容易與內(nèi)果皮脫落，因此在操作時需勤加練習，才能切取較薄的切片。經(jīng)橫切面顯微鑒別研究發(fā)現(xiàn)，毛葉木姜子和紅葉木姜子的內(nèi)部構(gòu)造整體結(jié)構(gòu)相近，但中果皮薄壁細胞中草酸鈣方晶，內(nèi)果皮的結(jié)構(gòu)，油細胞顏色等存在差異，可以作為鑒別依據(jù)。通過粉末的顯微鑒別發(fā)現(xiàn)，紅葉木姜子外果皮含有紅棕色物質(zhì)；毛葉木姜子中果皮細胞和內(nèi)果皮周圍可見大量的草酸鈣方晶，內(nèi)果皮細胞之間界限不清晰，層紋不明顯，有的可見孔溝，而紅葉木姜子中果皮未見草酸鈣方晶，內(nèi)果皮細胞垂周壁波狀彎曲，層紋明顯，可見含草酸鈣方晶；毛葉木姜子內(nèi)果皮柵狀細胞比紅葉木姜子內(nèi)果皮細胞長；紅葉木姜子油細胞含有黃色或棕黃色分泌物，毛葉木姜子中油狀物顏色較淺。以上這些顯微特征均可作為鑒別參考 。

綜上所述，毛葉木姜子和紅葉木姜子果實的外觀形狀特征和顯微鑒別特征能為藥用木姜子的分類和鑒別提供參考依據(jù)。