余司文， 武強， 王艷華， 賀樂奇， 沈芳

(復(fù)旦大學(xué)附屬上海市第五人民醫(yī)院 檢驗科， 上海 200240)

隨著生活水平的提高及生活習(xí)慣的改變，高熱量食物攝入增加、人口老齡化加劇及運動量減少，2型糖尿病(非胰島素依賴型糖尿病，type 2 diabetes mellitus，T2DM)已成為繼心血管病、腫瘤后第3大流行非傳染疾病[1-3]。目前研究顯示，2型糖尿病的發(fā)病機制不僅與家族遺傳、生活方式、內(nèi)分泌干擾物、腸道菌群等因素有關(guān)，還可能與血小板異常有關(guān)[4-5]，但此方面研究較少。本研究擬通過檢測T2DM患者血小板計數(shù)(blood platelet count，PLT)、血小板平均體積(mean platelet volume，MPV)、血小板壓積(thrombocytocri，PCT)、血小板分布寬度(platelet distribution width，PDW)、血小板聚集功能(platelet aggregation tes，PAgT)、血小板表面相關(guān)膜糖蛋白(CD41b、CD61和CD62P)及線粒體膜電位(Δψm)的變化，探討血小板異常對T2DM患者的臨床意義及與T2DM發(fā)病機制的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年5月-2018年5月收治的符合中國2型糖尿病防治指南(2013 年版)糖尿病診斷及分型標(biāo)準(zhǔn)[6]的T2DM住院患者75例(男性45例，女性30例)，平均52.3歲；選取同期健康體檢人群50例作為對照組，無高血壓、糖尿病、心、肝、腎及血液等疾病(男性20例，女性30例)，平均45.6歲。所有參與者均簽署知情同意書。

1.2 檢測指標(biāo)

所有被檢測人員(T2DM患者和對照組)在受檢前2周內(nèi)均不能服用對血小板功能有影響的藥物，保持正常飲食和生活規(guī)律，避免劇烈運動，空腹8 h[7]后于第2天清晨空腹抽取肘靜脈血 2 mL、15%乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝，用日本Sysmex XN9000全自動血球分析儀檢測PLT、MPV、PCT及PDW；(2)肘靜脈血1.8 mL、3.2%枸櫞酸鈉抗凝，用Model 700型全血血小板聚集儀(Chrono-log公司)檢測PAgT；(3)肘靜脈血1.8 mL、3.2%枸櫞酸鈉抗凝，用FACSCalibur型流式細(xì)胞儀(美國BD公司)檢測CD41b、CD61、CD62P和Δψm的熒光陽性百分率。所有檢測指標(biāo)均要求4 h內(nèi)完成檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 PLT、MPV、PCT、PDW和PAgT

與對照組比較，T2DM組被檢者PLT計數(shù)降低，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；PDW及MPV 顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05) ; 兩組被檢者PCT比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05) ; 與對照組比較，T2DM組患者的PAgT升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組被檢者 PLT、MPV、PCT、PDW及PAgT比較Tab.1 The PLT, MPV, PCT, PDW and PAgT of the two groups

2.2 Δψm和CD62P、CD41b和CD61

與對照組比較，T2DM組的CD62P、CD41b表達(dá)水平均升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);Δψm的含量降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);CD61的表達(dá)水平升高但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2，圖1、2。

表2 兩組被檢者 CD41b、CD61、CD62P和Δψm比較Tab.2 Comparison of CD41b, CD61, CD62P and Δψm between the two groups

3 討論

T2DM患者最具有特異性的并發(fā)癥是微血管病變，這增加了缺血性心血管事件的風(fēng)險[8]，因此及早發(fā)現(xiàn)、及時處理血管性病變，對延緩其并發(fā)癥進程及改善預(yù)后顯得尤為重要。目前，T2DM微血管病變在常規(guī)體檢中難以發(fā)現(xiàn)，大部分患者都得不到及時、有效的處理[9]。因此，臨床上對T2DM微血管病變的早期篩查，已成為一項迫在眉睫的難題。本研究結(jié)果表示，T2DM患者外周血中血小板Δψm降低(P<0.05)，PLT數(shù)量降低，PAgT、PDW、MPV水平升高(P<0.05)。有學(xué)者研究表明，血小板要避免不被激活、黏附、聚集，本身就要具有一定的能量，線粒體是血小板產(chǎn)生能量的最主要場所，而血小板線粒體膜電位的高低反映血小板能量儲備力的大小[10]。有不少學(xué)者發(fā)現(xiàn)T2DM患者血小板MPV、PDW均大于對照組[8]，PLT數(shù)量下降[11]；Kroemer還發(fā)現(xiàn)血小板Δψm表達(dá)降低是細(xì)胞早期凋亡的重要反映指標(biāo)[12]，MPV、PDW 的增高不僅與糖尿病密切相關(guān)，還是其微血管病變的一個高危因素[13]，PAgT含量越高，血小板更易發(fā)生黏附和聚集，血栓形成的可能性越大[14]。因此，本研究有理由認(rèn)為，T2DM 患者可能長期處于內(nèi)分泌紊亂的狀態(tài)，導(dǎo)致血小板自身能量消耗(PLT減少)，血小板提早凋亡(Δψm減低)，刺激機體骨髓本身生產(chǎn)大血小板代償(MPV和PDW升高)，血小板聚集功能加強(PAgT升高)，更易粘附，使血管形成微血栓。眾所周知，血小板表面相關(guān)膜糖蛋白由質(zhì)膜糖蛋白(GPⅡb-Ⅲa、GPⅠa-Ⅱa 和GPⅠb-Ⅸ-Ⅴ等)和顆粒膜糖蛋白(CD62P和CD63)組成，參與血小板粘附、聚集和活化等一系列的反應(yīng)，在血栓性疾病的發(fā)生與發(fā)展中起著重要作用[15]。其中CD62P是僅表達(dá)于靜息血小板a顆粒膜表面的一種蛋白[16]，正常情況下不表達(dá)或低水平表達(dá)[17]，而CD41b、CD61是以活性狀態(tài)存在于未被激活的血小板上，并不與黏附蛋白結(jié)合[18]。本研究結(jié)果顯示，T2DM組CD41b和CD62P表達(dá)水平均高于與正常對照組(P<0.05)，但CD61表達(dá)量與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，可以認(rèn)為T2DM患者機體受到高糖刺激，血小板a顆粒內(nèi)的Weibel-palade小體迅速與細(xì)胞膜融合，使CD62P在短時間內(nèi)高表達(dá)，促使血小板活化[19]，誘導(dǎo)血小板內(nèi)質(zhì)膜釋放增加及GPⅡb/Ⅲa (CD41b、CD61)復(fù)合物表達(dá)增加[20]。GPⅡb/Ⅲa 復(fù)合物表達(dá)增加介導(dǎo)血小板大量粘附在內(nèi)皮細(xì)胞上，改變CD41b/CD61立體構(gòu)型，促使GPIIb/IIIa與黏附蛋白結(jié)合，從而誘導(dǎo)血小板粘附、聚集和釋放等活化功能增強，形成血栓[21]，但其具體機制有待于進一步研究。另外，本研究血小板參數(shù)均采用檢測者的外周血，方便采集且檢測時間較短，大大減少體外人為因素對血小板的激活，可以快速、準(zhǔn)確地得到檢測結(jié)果，因此建議臨床上可以將PLT計數(shù)、MPV、PDW、PAgT、Δψm、CD41b及CD62P等指標(biāo)作為評估T2DM患者血管并發(fā)癥風(fēng)險的早期指標(biāo)，同時還可以對其病程進行及時的監(jiān)控。

圖1 兩組被檢者ΔψmFig.1 Δψm in the two groups

注：A、B為CD62P，C、D為CD41b，E、F為CD61；A、C及E為對照組，B、D及F為T2DM組。圖2 兩組被檢者CD62P、CD41P及CD61Fig.2 ΔCD41b, CD61 and CD62P of the 2 groups

綜上所述，本研究結(jié)果表明血小板參數(shù)、血小板表面相關(guān)膜糖蛋白、線粒體膜電位表達(dá)異?？赡軈⑴c了T2DM 的發(fā)生發(fā)展，但其具體機制有待于深入研究。同時，可將此類檢測指標(biāo)作為T2DM血管并發(fā)癥風(fēng)險的早期指標(biāo)，值得在臨床上進一步推廣應(yīng)用。