何磊 ，陳軍 ，陳麗莉 ，李雪飛 ，王皓 ，牛艷東 ，于淑萍 ，秦樹存 ，李保強(qiáng) ，段昕所

（1.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，河北承德067000 2.泰山醫(yī)學(xué)院，山東泰安271000）

銀屑病是一種常見的慢性炎癥性皮膚病，目前認(rèn)為是一種多系統(tǒng)性疾病[1]。銀屑病影響著患者的心理健康，可以出現(xiàn)各種神經(jīng)和精神癥狀，如焦慮等[2]。最新的研究表明有超過7%的患者存在焦慮[3]。雖然銀屑病本身與心血管疾病死亡相關(guān)，但患銀屑病的抑郁癥患者有更高的患病風(fēng)險(xiǎn)[4]。因此，本研究擬使用曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)以及洞板實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)銀屑病小鼠模型焦慮的行為學(xué)改變，從而探討銀屑病對(duì)心理健康的影響。

1 材料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康SPF級(jí)雄性C57BL/6J小鼠，20 只，10 個(gè)月齡，體質(zhì)量約 18～25 g，（北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（京）2016-0006）。實(shí)驗(yàn)期間喂養(yǎng)于泰山醫(yī)學(xué)院動(dòng)脈粥樣硬化研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。動(dòng)物飼養(yǎng)于標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物房：12 h晝夜交替，室溫（24±2）℃，空氣濕度（50±10）%，除造模及必要的斷水?dāng)嗍惩猓∈缶勺杂蛇M(jìn)水進(jìn)食。實(shí)驗(yàn)前動(dòng)物先適應(yīng)性飼養(yǎng)1周。本實(shí)驗(yàn)遵循實(shí)驗(yàn)動(dòng)物3R原則。

1.1.2 主要試劑與儀器 5%咪喹莫特（四川明欣藥業(yè)有限公司），凡士林（河北蘭煉飛天石化），小鼠水迷宮實(shí)時(shí)測(cè)試系統(tǒng)（TopScan美國(guó)CSI）。

1.2 方法

1.2.1 銀屑病小鼠模型制備 參考van der Fits[5]銀屑病樣動(dòng)物模型制備方法。將小鼠通過腹腔注射4%水合氯醛（0.1 mL/kg）進(jìn)行麻醉，并將其背部約2 cm×2 cm毛發(fā)剃除。C57BL/6J小鼠20只按體質(zhì)量分成2組：正常對(duì)照組10只，外用凡士林；銀屑病模型組10只，背部脫毛后給予5%咪喹莫特62.5mg/次，1次/d外涂，為期1周。

1.2.2 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)[6]長(zhǎng)寬高分別為50 cm×50 cm×40 cm的曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)箱，將實(shí)驗(yàn)箱內(nèi)部呈藍(lán)色，將箱底正方形平均分為16小格，沿箱壁的12方格記為外周格，中心4小格為中央格。箱體正上方連接視頻記錄系統(tǒng)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物初始被放在外側(cè)邊緣格，記錄實(shí)驗(yàn)5 min之內(nèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物對(duì)各區(qū)域的探索表現(xiàn)。

1.2.3 洞板實(shí)驗(yàn)[7]長(zhǎng)寬高分別為40 cm×40 cm×35 cm的洞板實(shí)驗(yàn)箱，底板有16個(gè)直徑為3 cm，厚1 cm的等大圓孔。實(shí)驗(yàn)小鼠放入箱內(nèi)，記錄實(shí)驗(yàn)10 min之內(nèi)小鼠的探洞次數(shù)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)結(jié)果均采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均選用t檢驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果均以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

銀屑病對(duì)小鼠焦慮樣行為的影響：曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，銀屑病模型組小鼠其探索潛伏期較正常對(duì)照組延長(zhǎng)，但沒有達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，見圖1B），總路程較正常對(duì)照組縮短（P＜0.001，見圖 1C），平均速度較對(duì)照組明顯下降（P＜0.01，見圖1D），中央?yún)^(qū)域停留時(shí)間縮短（P＜0.01，見圖 1E），中央?yún)^(qū)域探索次數(shù)較對(duì)照組降低（P＜0.001，見圖1F）。提示銀屑病小鼠存在焦慮樣表現(xiàn)。

洞板實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：銀屑病模型組小鼠探索潛伏期較正常對(duì)照組延長(zhǎng)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見圖2B，然而其探洞次數(shù)明顯降低（P＜0.001），見圖2C。提示銀屑病小鼠存在焦慮樣表現(xiàn)。

圖1 曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中銀屑病對(duì)小鼠的影響

3 討論

銀屑病與心理疾病相關(guān)。國(guó)內(nèi)外研究表明，銀屑病患者有較高的焦慮患病率，我國(guó)約有10.6%的銀屑病患者存在焦慮癥狀[8]。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)以及洞板實(shí)驗(yàn)是用于評(píng)價(jià)動(dòng)物在新異環(huán)境中自主行為、探究行為與緊張度的一種方法，被應(yīng)用于動(dòng)物焦慮行為學(xué)的評(píng)估。本研究為國(guó)內(nèi)外首次采用曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)以及洞板實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)銀屑病對(duì)小鼠行為學(xué)的影響。本實(shí)驗(yàn)研究表明，銀屑病模型小鼠探索潛伏期較正常對(duì)照組延長(zhǎng)。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)中，銀屑病模型組總路程、平均速度、中央?yún)^(qū)域停留時(shí)間、中央?yún)^(qū)域探索次數(shù)較對(duì)照組減少，洞板實(shí)驗(yàn)中，銀屑病小鼠模型組探洞次數(shù)較正常對(duì)照組減少。表明銀屑病小鼠存在焦慮樣行為表現(xiàn)，也從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的角度再次證實(shí)了，銀屑病對(duì)心理的影響。綜上所述，銀屑病小鼠存在焦慮樣行為表現(xiàn)。提示臨床需進(jìn)一步觀察銀屑病患者心理狀態(tài)，同時(shí)為進(jìn)一步探討銀屑病伴隨心理疾病的研究提供了新的思路。

圖2 洞板實(shí)驗(yàn)中銀屑病對(duì)小鼠的影響