李建云

（勐臘縣畜牧獸醫(yī)站，云南勐臘 666300）

旋毛蟲病是由毛首形科的旋毛蟲引起的人畜共患的一種重要寄生蟲病，豬、犬、 貓、鼠類、狐貍、狼、貂、野豬等均能感染。人類感染旋毛蟲病主要是由于食用了含有旋毛蟲的腌制與燒烤不當?shù)?、生的或未煮熟的豬肉而受到感染，此外，切過生肉的菜板、案板由于生熟不分，污染食品也會造成感染。

1 樣品采集

樣品采集是旋毛蟲檢驗的第一關(guān)，樣品的采集部位不同，將直接影響檢查的效果，因此我們采集肉樣必須選擇旋毛蟲寄生較多的肌肉。主要是從胴體兩側(cè)的橫膈膜肌腳采集，左右各采一小塊，其重量不少于30 g，將它記為一份肉樣，與肉尸編成相同號碼后，送屠宰檢驗室檢查。如果是檢驗部分胴體，就從肋間肌、腰肌、咬肌等處采樣。

2 樣品目檢

目檢是旋毛蟲檢驗的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，通過目檢可及早發(fā)現(xiàn)樣品中有無寄生蟲鈣化點，以便有針對性的進行鏡檢，提高旋毛蟲病的檢出率。此方法是將樣品表面的肌膜撕去后，對光查看肌纖維表面有無半透明稍隆起的乳白色或灰白色針尖大小的點，凡發(fā)現(xiàn)上述小點，說明樣品中有機化或鈣化的寄生蟲，有經(jīng)驗的檢疫員在沒有檢疫設備的情況下檢查豬肉中有無旋毛蟲，只要取塊膈肌在充足的陽光下看肌纖維是否平滑清晰，有無針尖大小小白點，就能做出初步判斷。

3 壓片制作

3.1 選擇載玻片

一般要根據(jù)所使用的顯微鏡類型來選擇，如果使用PX—200屏顯式肉檢儀，載玻片最好選長17 cm，寬5 cm，厚0.3 cm，透明度好的玻璃，如果玻片太薄，壓片時容易被壓碎，太厚會影響透光性。

3.2 剪樣

肉樣經(jīng)過目檢后，用左手大拇指和中指握住肉樣兩端，食指頂住肉樣內(nèi)側(cè)，使肌纖維繃直，在充足光線下，右手持剪刀順肌纖維方向，隨機剪取米粒大小肉樣，如果在目檢過程中發(fā)現(xiàn)有小白點，就必須一一剪下，每份肉樣剪24粒。剪樣時要注意左右兩側(cè)的膈肌都要剪，剪樣的點也要盡量分散，肉粒的大小薄厚要相對均勻，不要將脂肪、筋膜、血凝塊等剪進壓片中，否則會影響壓片的清晰度，進而影響檢查的效果。

3.3 擺樣

將剪下的肉粒均勻的擺放在載玻片的中間位置，排列成兩排，每排放12粒，每粒肉樣之間要保持適當?shù)木嚯x，以壓片時兩塊肉粒不粘連在一起為準。

3.4 制作樣片

取一塊大小相同的玻片，四角對齊蓋在肉粒上，向下用力壓載玻片，把肉粒壓成厚度均勻的薄片即可，注意壓片時不能讓玻片隨意移動，以免造成肉樣重疊、排列不齊等，會影響鏡檢觀察的效果。

4 鏡檢及判定

將制好的壓片，放在屏顯式肉檢儀下，從壓片的一端向另一端逐個視野來回進行檢視，要確保每個視野都檢查到，不得有漏檢的情況發(fā)生。在實際工作中，往往會發(fā)現(xiàn)不同發(fā)育階段的旋毛蟲，其形狀特征有所不同，檢驗時要注意鑒別，具體特征如下。

4.1 沒有形成包囊的幼蟲

在顯微鏡下觀察看到肌纖維之間有直桿狀或逐漸蜷曲的蟲體，但有時因壓片壓得太緊，也會出現(xiàn)蟲體被擠壓在肌漿中的情況。

4.2 已形成包囊的旋毛蟲

在顯微鏡下觀察到肌纖維之間有發(fā)光透明的圓形或橢圓形包囊，包囊位于相鄰肌細胞所形成的梭形肌腔內(nèi)，分內(nèi)外兩層，主要由均質(zhì)透明的蛋白質(zhì)和結(jié)締組織組成，囊中央是蜷曲成螺狀的蟲體，在肉品檢驗中已形成包囊的旋毛蟲較多見。

4.3 已鈣化的旋毛蟲

在顯微鏡下觀察呈現(xiàn)包囊內(nèi)可見數(shù)量不等、濃淡不均的黑色鈣化物，包囊周圍有大量結(jié)締組織增生。此外，在鏡檢中有時也能見到由蟲體開始鈣化逐漸擴展到包囊的鈣化過程，這多數(shù)是由于蟲體死亡后而引起的鈣化。

4.4 發(fā)生機化的旋毛蟲

蟲體未形成包囊以前，包圍蟲體的肉芽組織逐漸增厚、變大，形成紡錘形、橢圓形或圓形的肉芽腫，在檢疫工作中常被檢驗人員稱之為“大包囊”或“云霧包”，被包圍的蟲體結(jié)構(gòu)完整或破碎，乃至完全消失。

4.5 透明及脫鈣處理

鈣化或機化的蟲體由于透明度較差，需要作透明和脫鈣處理，才能看清包囊內(nèi)部的結(jié)構(gòu)。

1）當蟲體發(fā)生機化。有結(jié)締組織結(jié)節(jié)和肉芽腫時，先用甘油作透明處理后再進行觀察。此法是將壓玻片打開平放在桌面上，滴加數(shù)滴50%甘油于肉片上，數(shù)分鐘后，肉片變得透明時，再覆蓋壓玻片，鏡檢觀察有無破碎的蟲體。

2）當蟲體發(fā)生鈣化。有石灰凝塊時，先用鹽酸作脫鈣處理后再進行觀察。此法是打開壓玻片并置于桌面上，向肉片反復滴加10%鹽酸溶液，待石灰溶解后，再覆蓋壓玻片，鏡檢觀察有無蟲體殘骸。

5 病害肉處理

病害肉要認真按《中華人民共和國動物防疫法》《動物檢疫管理辦法》和《病害動物和病害動物產(chǎn)品生物安全處理規(guī)程》進行處理。凡是在24個肉粒標本內(nèi)，發(fā)現(xiàn)一個或數(shù)個旋毛蟲包囊或鈣化的蟲體，經(jīng)復檢核實后，整個肉尸及內(nèi)臟全部作焚燒處理。

此外，旋毛蟲病的檢驗方法還有集樣消化法、液相基因芯片檢測、ELISA檢測、免疫熒光技術(shù)等。但壓片鏡檢法一直是我們基層檢疫員最常用的檢驗方法，只要檢疫員在日常的檢疫工作中認真按檢疫程序嚴格把關(guān)，不斷總結(jié)經(jīng)驗，就能確保肉品的衛(wèi)生質(zhì)量安全。