胡玉霞

(浙江經(jīng)貿(mào)職業(yè)技術(shù)學(xué)院，浙江 杭州 310018)

食品中存在易氧化的油脂、脂溶性維生素、磷脂和胡蘿卜素等物質(zhì)[1]，在貯存過(guò)程中易導(dǎo)致食品感官發(fā)生變化。油脂中的不飽和脂肪酸被水解、氧化，導(dǎo)致油脂的酸價(jià)、過(guò)氧化值升高，破壞營(yíng)養(yǎng)，產(chǎn)生異味，對(duì)人體健康有影響，嚴(yán)重時(shí)還會(huì)引起食物中毒[2]?？寡趸瘎┠茏柚够蜓泳徲椭淖詣?dòng)氧化，防止食品貯藏過(guò)程中的褐變、褪色和營(yíng)養(yǎng)損失[3]，提高食品穩(wěn)定性，延長(zhǎng)貯存期。正確使用抗氧化劑，不僅可以給生產(chǎn)者、消費(fèi)者帶來(lái)良好的經(jīng)濟(jì)效益，而且能提高食品安全，防止食品安全事故發(fā)生。

特丁基對(duì)苯二酚(TBHQ)、丁基羥基茴香醚(BHA)、2,6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)是常用的油脂類抗氧化劑，限量標(biāo)準(zhǔn)已有規(guī)定[4]。已有研究發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)期大量使用抗氧化劑有致癌作用[5-6]，快速檢測(cè)食品中抗氧化劑的含量，具有重要的意義。目前，我國(guó)檢測(cè)油脂類抗氧化劑常采用乙腈-正己烷液液萃取，C18固相萃取柱凈化的方法[6]，該方法前處理復(fù)雜、毒性大、成本高，不利于批量樣品的檢測(cè)分析。質(zhì)譜法雖靈敏度高、檢出限低，但設(shè)備昂貴，難以推廣普及。本研究基于現(xiàn)有檢測(cè)方法，采用甲醇作為提取溶劑，重復(fù)提取后，直接過(guò)膜上機(jī)檢測(cè)。與標(biāo)準(zhǔn)方法相比，該方法簡(jiǎn)單快捷、定量準(zhǔn)確，檢測(cè)成本低，適于批量檢測(cè)，對(duì)提高檢測(cè)分析的效率和靈敏度具有重要意義。

1 材料與方法

1.1 試劑與材料

TBHQ、BHA、BHT標(biāo)準(zhǔn)品(TMstandard，含量≥99%，擴(kuò)展不確定度0.5%)，北京壇墨質(zhì)檢；0.22 μm有機(jī)濾膜，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；甲酸、甲醇均為色譜純；餅干、食用油樣品采集于超市。

1.2 儀器與設(shè)備

超純水凈化器，美國(guó)Millipore公司；戴安p680液相色譜儀，二極管陣列檢測(cè)器，德國(guó)AUPOS公司；旋渦震蕩器，合肥艾本森科學(xué)儀器有限公司；電子天平，瑞士Mettler-Toledo公司。

1.3 色譜條件

色譜柱：Eclipse C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：A為0.5%甲酸水，B為甲醇；流動(dòng)相梯度洗脫程序?yàn)椋?～5 min，50% A；5～15 min，50%～20% A；15～20 min，20% A；20～25 min，20%～10% A；25～27 min，10%～50% A；27～30 min，50% A。流速1.0 mL·min-1，進(jìn)樣量 10.0 μL，柱溫35 ℃，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm。

1.4 樣品前處理

準(zhǔn)確稱量0.2～2.0 g樣品(精確到0.01 g)，加入甲醇5 mL，旋渦震蕩2 min，5 000 r·min-1離心5 min，取上清液，重復(fù)提取3次，合并提取液，55 ℃氮?dú)獯抵两桑状级ㄈ葜?.0 mL，過(guò)膜上機(jī)分析。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

準(zhǔn)確稱取BHA、BHT、TBHQ各0.05 g(精確至0.000 01 g)，用乙腈定容到50 mL，混勻，制成標(biāo)準(zhǔn)溶液儲(chǔ)備液(1 mg·mL-1)。將標(biāo)準(zhǔn)溶液儲(chǔ)備液用甲醇稀釋至2、5、10、20、50 μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)工作液，HPLC-DAD檢測(cè)。以濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2 結(jié)果與分析

2.1 線性范圍

以峰面積對(duì)應(yīng)于各標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的質(zhì)量濃度(μg·mL-1)進(jìn)行線性回歸，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系(表1)。

表1 方法的線性范圍

2.2 準(zhǔn)確度、精密度及檢出限

選擇餅干作為樣品，檢測(cè)其中BHA、BHT、TBHQ含量。結(jié)果表明，餅干中未檢出BHA、BHT，TBHQ含量為14.52 mg·kg-1，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)2.60%。以餅干為空白樣品基質(zhì)，進(jìn)行低、中、高3個(gè)濃度水平的添加實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行回收測(cè)定，平均測(cè)定6次，結(jié)果見表2。

表2 方法的精密度和回收率(n=10)

由表2可見，抗氧化劑回收率90.4%～101.1%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差0.32%～2.46%，能夠較好地滿足GB/T 27404—2008《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》的要求。以樣品中目標(biāo)物響應(yīng)和基線噪音比計(jì)算本方法的檢出限，TBHQ、BHA、BHT的檢出限分別為0.6、0.2、0.6 mg·kg-1。

2.3 實(shí)際樣品含量的檢測(cè)

在上述試驗(yàn)條件下，分別對(duì)市場(chǎng)上購(gòu)買的食用油(未檢出BHA、BHT，TBHQ含量為24.20 mg·kg-1)和糕點(diǎn)(未檢出BHA、BHT，TBHQ含量為8.90 mg·kg-1)進(jìn)行加標(biāo)回收測(cè)定(每個(gè)樣品3個(gè)重復(fù))，測(cè)定結(jié)果見表3。加標(biāo)檢測(cè)結(jié)果表明，回收率97.0%～103.0%，RSD為0.95%～2.34%，可以滿足日常檢驗(yàn)需求。

表3 實(shí)際樣品的加標(biāo)回收檢測(cè)

3 小結(jié)

本實(shí)驗(yàn)建立了用甲醇作為提取溶劑的高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)器(HPLC-DAD)測(cè)定食品中TBHQ、BHA、BHT 3種抗氧化劑殘留的方法，相比現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中液液萃取-過(guò)柱凈化的液相色譜分析技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了簡(jiǎn)化前處理操作、提高樣品提取效率、減少有機(jī)溶劑的使用和降低檢測(cè)成本等目的。精密度、準(zhǔn)確度和檢出限結(jié)果表明，該方法滿足檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)要求，對(duì)政府部門或第三方檢測(cè)公司開展相關(guān)產(chǎn)品的檢驗(yàn)檢測(cè)有重要的參考意義。