耿寶軍 邱良武 李軍

(1山西工程技術(shù)學(xué)院,山西 陽泉 045000；2昆明醫(yī)科大學(xué))

運(yùn)動療法是為了緩解癥狀或改善功能，根據(jù)傷病的特點進(jìn)行全身或局部的運(yùn)動以達(dá)到治療目的的方法。運(yùn)動療法是康復(fù)治療的重要措施之一，是當(dāng)前慢性病預(yù)防、治療與康復(fù)的常見方法〔1〕。而音樂療法能通過其特定的旋律、節(jié)奏和聲音等因素影響人的心理活動，并對身體疾病產(chǎn)生積極影響，可以實現(xiàn)身心同治的效果〔2〕。國外康復(fù)醫(yī)院非常重視應(yīng)用運(yùn)動療法和藝術(shù)療法等非醫(yī)藥手段進(jìn)行康復(fù)，如美國和澳大利亞社區(qū)康復(fù)醫(yī)院設(shè)運(yùn)動區(qū)、涂鴉區(qū)和廚藝區(qū)，澳大利亞最大的腫瘤醫(yī)院有園藝康復(fù)區(qū)和音樂康復(fù)區(qū)〔3，4〕?？梢姺轻t(yī)藥康復(fù)是應(yīng)對當(dāng)前慢性病高發(fā)的有效手段和發(fā)展趨勢。本研究擬對比觀察音樂療法與運(yùn)動療法對老年小鼠海馬細(xì)胞凋亡的影響。

1 材料與方法

1.1實驗材料 昆明種雄性老年小鼠32只(No.53004100000621)，10月齡，體重37～43 g，由昆明醫(yī)科大學(xué)實驗動物學(xué)部提供。飼料由昆明醫(yī)科大學(xué)實驗動物學(xué)部提供，飲用水為自來水。中國古典器樂曲來自中國長城音像出版社出版發(fā)行的盒式磁帶，重新翻錄CD，播放順序為古箏演奏的《思鄉(xiāng)曲》《春江花月夜》《鄱湖美》和《瀏陽河》，笛子演奏的《牧民新歌》、揚(yáng)琴演奏的《山丹丹花開紅艷艷》及古箏演奏的《漁舟唱晚》。

1.2動物分組與實驗 小鼠隨機(jī)分為對照組(A組)、大強(qiáng)度運(yùn)動組(B組)、中等強(qiáng)度運(yùn)動組(C組)和音樂組(D組)各8只。各組在18～24℃的常溫下飼養(yǎng)和實驗。A組自然環(huán)境喂養(yǎng)，不施加任何處理因素。B組和C組在長52 cm、寬37 cm、高22 cm的水箱里進(jìn)行有氧游泳運(yùn)動，實驗水深18 cm，水溫22℃；每周5次，連續(xù)8 w。B組每次60 min，C組每次40 min。D組聽音樂，電腦播放，每次30 min，每周5次，連續(xù)8 w。

1.3B淋巴細(xì)胞瘤(Bcl)-2、Bcl-2相關(guān)X蛋白(Bax)基因蛋白的檢測 各組斷頭取材(B組剩下6只)。切取小鼠左側(cè)腦組織，置于新配制的4%多聚甲醛溶液中固定，用免疫組化第二代聚合酶兩步法(PV)檢測Bax、Bcl-2的表達(dá)。

1.4Tunnel免疫組化染色及圖片分析 冰凍切片機(jī)連續(xù)切片，切片厚15 μm，每只每個區(qū)域連續(xù)取2張切片，放在-20℃冰箱冰凍。之后將冰凍切片拿出放置到室溫，等待水汽揮干后使用組畫筆圍繞組織畫圈，使用0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)漂洗切片3次，每次5 min。使用0.1%檸檬酸鈉溶液+0.1%tritonX-100溶液覆蓋組織(一個腦片約50 μl)，放到37℃恒溫箱，30 min封閉。將封閉液吸掉，在切片上加入Tunnel試劑(MILIPORE公司)37℃恒溫箱孵育1 h(避光的濕盒)。試劑配置按照藍(lán)∶紅=1∶9的比例進(jìn)行配置。0.01 mol/L PBS漂洗3次，每次5 min，加入4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)溶液封片，倒扣，4℃保存。

1.5統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行方差分析和LSD-t檢驗，采用Image-ProPlus6.0圖像分析軟件進(jìn)行凋亡細(xì)胞計數(shù)。

2 結(jié) 果

2.1音樂和運(yùn)動療法對海馬神經(jīng)元Bax、Bcl-2表達(dá)的影響 與A組比較，C組和D組海馬神經(jīng)元Bcl-2 表達(dá)顯著升高(P<0.05，P<0.01)，D組Bax表達(dá)顯著降低(P<0.05)。與B組比較，C組和D組海馬神經(jīng)元Bcl-2表達(dá)顯著升高(P<0.05，P<0.01)，D組Bax表達(dá)顯著降低(P<0.05)。見表1。

表1 各組海馬神經(jīng)元Bax、Bcl-2表達(dá)

與A組比較：1)P<0.05，2)P<0.01；與B組比較：3)P<0.05，4)P<0.01

2.2Tunnel免疫組化染色結(jié)果 A組和B組海馬神經(jīng)組織有較多的細(xì)胞呈陽性，提示有較多細(xì)胞凋亡；C組陽性細(xì)胞較少，D組陽性細(xì)胞最少。見圖1。

圖1 各組海馬組織Tunnel免疫組化染色結(jié)果(×200)

2.3各組海馬凋亡細(xì)胞數(shù) 與A組〔(84.72±7.16)個/HP〕比較，C組〔(63.00±4.22)個/HP〕和D組〔(42.46±2.15)個/HP〕海馬凋亡細(xì)胞數(shù)顯著減少(P<0.05，P<0.01)。與B組〔(76.31±4.39)個/HP〕比較，C組和D組海馬凋亡細(xì)胞的平均個數(shù)顯著減少(P<0.05，P<0.01)。與C組比較，D組海馬凋亡細(xì)胞數(shù)顯著減少(P<0.05)。

3 討 論

細(xì)胞凋亡涉及一系列基因的激活、表達(dá)及調(diào)控等作用，與被動的細(xì)胞壞死不同，細(xì)胞凋亡在某些情況下，是更好地適應(yīng)生存環(huán)境而主動采取的一種死亡過程。細(xì)胞凋亡途徑可分為細(xì)胞外凋亡途徑和細(xì)胞內(nèi)凋亡途徑，內(nèi)途徑主要是由Bcl-2、Bax調(diào)節(jié)線粒體外膜的通透性，引起細(xì)胞色素C釋放，使半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(Casepase)-3激活〔5〕。Bcl-2是功能最為明確的細(xì)胞凋亡拮抗基因，具有延長細(xì)胞生命期限、增加細(xì)胞對多種凋亡刺激因素的抗性〔6〕。Bax與Bcl-2作用相反。本研究表明大強(qiáng)度運(yùn)動療法對減少老年小鼠海馬細(xì)胞凋亡沒有幫助，中等強(qiáng)度運(yùn)動療法和音樂療法對減少老年小鼠海馬細(xì)胞凋亡有幫助，音樂療法比運(yùn)動療法效果更好。曹陽等〔7〕通過大鼠實驗研究指出，力竭運(yùn)動后Bcl-2陽性神經(jīng)元數(shù)目有所增加但不明顯，Bax表達(dá)增長明顯且與Bcl-2相比占優(yōu)勢，可能抑制了Bcl-2的保護(hù)作用，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。而李翰等〔8〕的研究則認(rèn)為，單獨(dú)有氧運(yùn)動緩解細(xì)胞凋亡有一定的作用，但是不明顯。提示老年人在進(jìn)行體育鍛煉的時候一定要因人而異，科學(xué)地把握好運(yùn)動強(qiáng)度，才能收到良好的效果。

海馬結(jié)構(gòu)與學(xué)習(xí)、記憶、食物尋找和空間導(dǎo)向有關(guān)，其杏仁體和隔區(qū)容易對外界刺激產(chǎn)生反應(yīng)。Chaudhury等〔9〕研究指出音樂暴露使幼雞腦內(nèi)的兩個聽覺細(xì)胞核神經(jīng)元數(shù)目增多、神經(jīng)元體積增大。Bailey等〔10〕發(fā)現(xiàn)通過音樂干預(yù)對幼年斑胸草雀海馬組織中早基因Zenk和c-Fos的表達(dá)有積極影響，其表達(dá)腦區(qū)與鳥類鳴唱時神經(jīng)元活動區(qū)域及活動強(qiáng)度一致。音樂可以通過大腦邊緣系統(tǒng)調(diào)節(jié)軀體及自主神經(jīng)的大腦皮質(zhì)功能，促進(jìn)身心健康。李靖等〔11〕研究報道在音樂環(huán)境中休息30 min后，急性有氧運(yùn)動性疲勞大鼠下丘腦及紋狀體去甲腎上腺素(NE)含量及NE與5-羥色胺(HT)比值均維持較高水平，兩腦區(qū)處于應(yīng)激性興奮狀態(tài)，可以暫時緩解中樞的疲勞性抑制，該研究一定程度上證實了這個學(xué)說。研究指出，音樂治療能顯著提高抑郁癥小鼠腦內(nèi)5-HT和NE含量，提示音樂可能通過增加中樞神經(jīng)系統(tǒng)中5-HT釋放，增加下丘腦NE濃度，達(dá)到調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)遞質(zhì)的目的，從而發(fā)揮防治抑郁的作用〔11，12〕。研究還表明，運(yùn)動改善腦卒中、脊髓損傷等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病所致的運(yùn)動和認(rèn)知損害，可能與運(yùn)動通過抑制海馬神經(jīng)元凋亡、減少腦損傷后的海馬氧化應(yīng)激損害有關(guān)〔13〕。

當(dāng)前，慢性病的非藥物防治與康復(fù)作用日益受到重視。音樂療法和運(yùn)動療法以其獨(dú)特的作用方式成為神經(jīng)科學(xué)研究的一個重要切入點，在老年護(hù)理中應(yīng)用音樂運(yùn)動療法也取得較好的成果〔14〕。特別是最新研究認(rèn)為音樂運(yùn)動療法是治療癡呆特別是阿爾茨海默病的一種很有前景的干預(yù)措施，必須盡早開始，應(yīng)該考慮將音樂運(yùn)動療法與其他認(rèn)知刺激相結(jié)合，如藝術(shù)、體育鍛煉等〔15〕。因此音樂療法和運(yùn)動療法值得一些神經(jīng)退行性疾病患者去嘗試，但是老年人要因地制宜，因人而異，科學(xué)地鍛煉。