傅真

（上海市楊浦區(qū)疾病預(yù)防控制中心檢驗(yàn)科 上海 200090）

研究發(fā)現(xiàn)，微生物檢驗(yàn)質(zhì)量受到多種因素的影響，培養(yǎng)基質(zhì)量好壞、保存得當(dāng)、配置科學(xué)與否，與微生物檢驗(yàn)質(zhì)量存在密切關(guān)聯(lián)[1]。在開展食品微生物檢驗(yàn)過程中，需要對培養(yǎng)基質(zhì)量控制問題進(jìn)行關(guān)注，采取必要措施進(jìn)行完善。從而保證微生物檢驗(yàn)質(zhì)量。本研究主要目的在于充分炎癥脫水培養(yǎng)基配制、貯存后開展食品微生物檢驗(yàn)，是否滿足質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)而使整個檢驗(yàn)過程受控。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選擇廣州瑞智公司提供的超凈工作臺（SW-CJ-2FD），上海博訊實(shí)業(yè)提供的立式壓力蒸汽滅菌器（YXQ-LS-50SII）及電熱恒溫培養(yǎng)箱（BPX-272）；平板計數(shù)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基由廣東環(huán)凱微公司提供，廣東光華公司提供甘油（分析純）。5種菌種由廣東環(huán)凱微公司提供，見表1。

表1 培養(yǎng)基接種的5種菌種具體情況

1.2 方法

（1）菌液制備：銅綠假單胞菌、大腸埃希氏菌、糞腸球菌、乙型副傷寒沙門氏菌、金黃色葡萄球5種菌種復(fù)蘇后，采用傳代培養(yǎng)方法進(jìn)行相應(yīng)處理。然后采用第3代菌液，1ml生理鹽水制成菌液，菌落數(shù)控制在50～100CFU，制備完成后，注意菌液需在2h內(nèi)使用，避免性狀發(fā)生改變而影響檢驗(yàn)結(jié)果。

（2）培養(yǎng)基貯存：隨機(jī)抽取平板計數(shù)營養(yǎng)瓊脂2瓶，嚴(yán)格按照操作說明書中相關(guān)規(guī)范，對培養(yǎng)基進(jìn)行配制，并在1×105Pa高壓狀態(tài)下行滅菌處理，時間控制15min；滅菌完成后，將平板計數(shù)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基貯存在溫度為4℃的冰箱內(nèi)。

（3）適用性檢查：對平板計數(shù)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的適用性進(jìn)行檢查，貯存后第7d、第14d和第21d，取出滅菌處理后的培養(yǎng)基，結(jié)合《中國藥典》（2015年版）[2]中相關(guān)規(guī)定，測定培養(yǎng)基適用性。在此過程中，采用新配制培養(yǎng)基作為參照對象，做好對比。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2.結(jié)果

2.1 培養(yǎng)基適用性檢查結(jié)果分析

接種銅綠假單胞菌、大腸埃希氏菌、糞腸球菌、乙型副傷寒沙門氏菌、金黃色葡萄球的平板計數(shù)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，貯存后不同時間段（7d、14d、21d）未出現(xiàn)明顯變化，適用性良好，見表2。

表2 平板計數(shù)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基對不同菌種適用性檢查結(jié)果（%）

2.2 培養(yǎng)基pH值檢查結(jié)果分析

兩次試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，樣本1和樣本2平板計數(shù)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基pH值未出現(xiàn)明顯變化，無論是配置當(dāng)天，還是貯存第7d、貯存第14d、貯存第21d，培養(yǎng)基pH均保持相對穩(wěn)定，見表3。

表3 兩個樣品平板計數(shù)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基pH值檢查結(jié)果對比

3.討論

培養(yǎng)基質(zhì)量控制的重要性體現(xiàn)在其能夠?yàn)槲⑸锓敝场⒋x提供營養(yǎng)支持，進(jìn)而滿足微生物提供檢驗(yàn)基礎(chǔ)環(huán)境[3-4]。在開展微生物檢驗(yàn)時，保證微生物具有良好存活狀態(tài)，能夠?yàn)槲⑸镄誀顧z測與分析提供參考指標(biāo)，進(jìn)而準(zhǔn)確識別微生物種類，為食品微生物檢驗(yàn)提供更多科學(xué)依據(jù)，提高檢驗(yàn)準(zhǔn)確性[5]。相關(guān)文獻(xiàn)[6]報道認(rèn)為，測定微生物檢驗(yàn)培養(yǎng)基性能，合理貯存，能夠突出細(xì)菌的特征，因此在選擇培養(yǎng)基時，應(yīng)滿足已知陽性、陰性菌接種要求，且具備一定的生化反應(yīng)能力。本次實(shí)驗(yàn)抽取食品微生物脫水培養(yǎng)基為平板計數(shù)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，對其進(jìn)行獨(dú)立試驗(yàn)，通過配制、滅菌、貯存后，結(jié)合藥典中相關(guān)規(guī)定，對培養(yǎng)基適用性進(jìn)行檢查，驗(yàn)證貯存7d、14d、21d平板計數(shù)營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的適用性，結(jié)果顯示，在相同環(huán)境下，滅菌后的脫水培養(yǎng)基接種銅綠假單胞菌、大腸埃希氏菌、糞腸球菌、乙型副傷寒沙門氏菌、金黃色葡萄球，貯存21d后，適用性均符合藥典中相關(guān)要求。上述研究結(jié)果與文獻(xiàn)[7-8]報道內(nèi)容基本一致，且本研究2次試驗(yàn)樣本pH值之間無明顯差異（P＞0.05）。本次實(shí)驗(yàn)所得結(jié)果至少可以說明2個問題，其一，在相同環(huán)境下，脫水培養(yǎng)基配制、貯存受控，即使貯存3周之久，亦能夠保證培養(yǎng)基每次使用符合檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)。其二，采購脫水培養(yǎng)基后，僅需對同1批號培養(yǎng)基的適用性進(jìn)行檢查，無需全部驗(yàn)證，同時可預(yù)先配制一定培養(yǎng)基，滿足大量食品微生物檢驗(yàn)操作要求，提高工作質(zhì)量，降低風(fēng)險。

綜上所述，對食品微生物檢驗(yàn)中培養(yǎng)基質(zhì)控問題加以關(guān)注，嚴(yán)格執(zhí)行相關(guān)操作標(biāo)準(zhǔn)，可保證檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性。