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1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué),內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110；2.北京中醫(yī)藥大學(xué),北京 100029

抑郁癥(Major Depressive Disorder，MDD)是一種患病率、復(fù)發(fā)率、自殺率較高的慢性精神障礙疾病，帶來嚴(yán)重社會(huì)經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)，已成為世界范圍內(nèi)最有負(fù)擔(dān)的疾病，其致殘率超過缺血性心腦血管疾病，將成為全世界第二大致殘疾病[1-2]。目前，盡管研發(fā)有很多抗抑郁藥，但仍存在療效不佳或反應(yīng)差異、長期服用出現(xiàn)毒副作用以及停藥后復(fù)發(fā)等不令患者滿意的問題[3-4]。民族醫(yī)藥其獨(dú)特的診療方法及藥物，在治療疑難雜病方面發(fā)揮著一定作用，日益受到抑郁癥研究者的關(guān)注。蒙醫(yī)驗(yàn)方肉蔻-5味丸是蒙醫(yī)臨床上常用于治療“赫依”病、心煩失眠、心神不安、心跳、心悸、胸悶氣喘、心絞痛等心血管疾病及抑郁、焦慮等病癥[5-6]，并療效顯著。本藥方出自于蒙醫(yī)經(jīng)典著作《蒙醫(yī)成方集》，在《蒙醫(yī)百科全書·蒙醫(yī)學(xué)》和《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·蒙藥分冊(cè)》均有記載，由肉豆蔻、廣棗、蓽茇、土木香、木香等5種天然藥物組成。前期研究已發(fā)現(xiàn)其能夠改善慢性抑郁模型大鼠抑郁狀態(tài)[7-8]。研究以蒙醫(yī)驗(yàn)方肉蔻-5味丸為受試藥，利用慢性輕度不可預(yù)知性應(yīng)激(Chronic unpredictable mild stress，CUMS)結(jié)合孤養(yǎng)方法，建立CUMS大鼠模型，并給藥干預(yù)后觀察其對(duì)CUMS大鼠血清白細(xì)胞介素1(interleukin，IL-1)和白細(xì)胞介素6(interleukin，IL-6)含量的影響，從而探討其抗抑郁作用途徑。

1 材料

1.1 動(dòng)物 清潔級(jí)SD雄性大白鼠，體質(zhì)量為180～220 g，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公提供，許可證號(hào)：SCXK(京)20140004。

1.2 受試藥及試劑 肉蔻-5味丸(批號(hào)：Z15020881，內(nèi)蒙古自治區(qū)庫倫蒙藥廠)；鹽酸氟西汀膠囊(批號(hào)：H20073985，山西仟源制藥股份有限公司)；水合氯醛(批號(hào)：20130401，天津市福晨化學(xué)試劑廠)；IL-1(批號(hào)：CSB-E08055r)、IL-6(批號(hào)：CSB-E04640r)等ELISA試劑盒均由武漢華美生物工程有限公司提供。

1.3 儀器 MULTISKAN MK3酶聯(lián)免疫吸附儀(美國Thermo公司)；ST16R高速低溫離心機(jī)(美國Thermo公司)；BSA124SCW電子天秤(德國Sartorius科學(xué)儀器有限公司)；DHG9145電熱鼓風(fēng)干燥箱(中國上海一恒科學(xué)儀器有限公司)；5 mL真空采血管、采血針、手術(shù)刀、鑷子等器材。

2 方法

2.1 分組及給藥 將60只大鼠一周適應(yīng)性飼養(yǎng)之后按體質(zhì)量隨機(jī)分為正常組、模型組、西藥組、蒙藥肉蔻-5味丸低、中、高劑量組等6組，每組10只。應(yīng)激同時(shí)對(duì)各組大鼠進(jìn)行ig給藥，除正常組和模型組給予等量生理鹽水外，西藥組給予鹽酸氟西汀3.6 mg/kg，蒙藥低、中、高劑量組給予0.2、0.4、0.8 g/kg不同劑量的肉蔻-5味丸。每日固定時(shí)間給藥1次，給藥體積為1 mL/100 g，連續(xù)刺激21天，同時(shí)給藥干預(yù)。

2.2 復(fù)制模型方法[9-10]采取CUMS和孤養(yǎng)兩種經(jīng)典造模方法的配合使用，建立抑郁癥動(dòng)物模型。將正常組5只為一籠群養(yǎng)，不給予任何外界刺激，并自由飲水?dāng)z食。其余各組大鼠孤養(yǎng)，并每天給予不同刺激，且接受刺激盡量反差較大確保不可預(yù)知目的，應(yīng)激源包括24 h禁食禁水， 5 min游泳4 ℃冷水， 5 min放置45 ℃熱環(huán)境，1 min夾尾，15 min高速水平震蕩，24 h潮濕墊料，12 h晝夜顛倒等7種。各組大鼠每天接受隨機(jī)安排的一種刺激，對(duì)一組大鼠不能連續(xù)接受同種刺激，且同種刺激最多使用3次。

2.3 體質(zhì)量變化 每日給藥時(shí)觀察大鼠的一般狀態(tài)，并稱量大鼠體質(zhì)量，記錄統(tǒng)計(jì)造模前和造模后第14天、第21天之間的差異變化。

2.4 糖水消耗測(cè)試(sucrose preference test，SPT) 測(cè)試前對(duì)各組大白鼠適應(yīng)性飲用1%蔗糖水48 h，盡量避免產(chǎn)生其對(duì)新事物的恐懼感，以及避免飲水位置的偏愛，每日要調(diào)換一次飲水瓶的位置。測(cè)試時(shí)，先將大白鼠禁水4 h后給予等體積或重量A和B兩瓶水(A瓶水為自來水，B瓶水為1%蔗糖水)，分別計(jì)算大白鼠在飲用1 h期間的糖水?dāng)z取量和自來水?dāng)z取量(糖水偏好% =[A/(A+B)]×100%)。

2.5 檢測(cè)指標(biāo) SPT 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后10%水合氯醛(體積為0.3 mL/100 g)麻醉大鼠，縱向切開腹部，用5 mL真空采血管從腹主動(dòng)脈取血，待凝血后轉(zhuǎn)速為每分鐘3500 r離心15 min。取上清液移置于血清杯后24 ℃冰箱保存待測(cè)。按照IL-1和IL-6試劑盒的操作說明進(jìn)行檢測(cè)含量。

3 結(jié)果

3.1 體質(zhì)量變化 受刺激前各組大鼠平均體質(zhì)量無明顯差異，給予刺激后模型組大鼠體質(zhì)量增長明顯緩慢，第14天、第21天平均體質(zhì)量顯著低于正常組(P<0.01)。第14天蒙藥中劑量組平均體質(zhì)量顯著高于模型組(P<0.05)；第21天西藥組和蒙藥中、低劑量組平均體質(zhì)量顯著高于模型組(P<0.05，P<0.01)。如表1所示。

組別劑量/g/kg體質(zhì)量變化/g第0天 第14天 第21天 正常組-195.9±6.0298.3±7.0352.2±8.0模型組-194.4±7.0257.1±17.0??289.3±13.0??西藥組0.0036196.6±6.0263.9±9.0304.4±8.0△△0.8196.9±10.0266.6±16.0300.3±14.0蒙藥組0.4197.5±9.0275.9±9.0△△303.1±3.0△0.2196.5±11.0264.9±14.0305.4±3.0△

注：與正常組比較，*P<0.05,**P<0.01；與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01。

3.2 1%蔗糖水消耗量的影響 與正常組比較，模型組1%蔗糖水的平均消耗量較低(P<0.05)。與模型組比較，西藥組和蒙藥高劑量組大白鼠1%蔗糖水的平均消耗量顯著高(P<0.05)。見表2。

組別動(dòng)物數(shù)量/只劑量/g/kg糖水消耗量/mL正常組10-18.4±7.1模型組10-12.5±5.1?西藥組10 0.003617.3±4.6△100.816.6±3.3△蒙藥組100.413.3±5.6100.215.9±4.1

注：與正常組比較，*P<0.05,**P<0.01；與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01。

3.3 血清IL-1和IL-6含量的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)模型組血清IL-1和IL-6含量顯著高于正常組(P<0.05或0.01)。西藥組、蒙藥高、中劑量組血清IL-1含量及蒙藥高劑量組血清IL-6含量顯著低于模型組(P<0.05)，蒙藥低劑量組血清IL-1和蒙藥中、低劑量組血清IL-6含量有降低趨勢(shì)，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

組別劑量/g/kgIL-1含量/pg/μLIL-6含量/pg/μL正常組-168.47±63.609.24±4.25模型組- 403.47±70.47??35.76±13.22??西藥組0.0036 208.37±43.43△△15.81±7.49△△0.8 260.26±47.36△22.01±10.30△蒙藥組0.4326.44±74.14△23.67±14.250.2356.59±82.1826.02±11.14

注：與正常組比較，*P<0.05,**P<0.01；與模型組比較，△P<0.05，△△P<0.01。

4 討論

抑郁癥的發(fā)病機(jī)制十分復(fù)雜，迄今未明確，尚處于假說階段。上世紀(jì)末提出“細(xì)胞因子”學(xué)說的發(fā)病機(jī)制，認(rèn)為機(jī)體的炎癥反應(yīng)可能是引發(fā)抑郁癥的重要途徑之一。細(xì)胞因子是免疫細(xì)胞分泌的生物活性蛋白，除了參與調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的應(yīng)答外，還參與調(diào)節(jié)神經(jīng)化學(xué)和神經(jīng)內(nèi)分泌過程。抑郁癥的發(fā)生可能與機(jī)體釋放炎性細(xì)胞因子時(shí)外周免疫被激活，進(jìn)而引起神經(jīng)內(nèi)分泌及免疫系統(tǒng)功能紊亂，即免疫被激活導(dǎo)致細(xì)胞因子IL-1、IL-6、IFN-r、TNF-a和GF等因子的分泌增多。因此，炎癥細(xì)胞因子IL-1、IL-6等可通過下丘腦和海馬的刺激增加而使HPA軸活性增加，并糖皮質(zhì)激素長期增高可使巨噬細(xì)胞上糖皮質(zhì)激素受體敏感性減弱，使巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的炎癥細(xì)胞因子增加[11]。這些炎性因子調(diào)節(jié)促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素(CRH)，而CRH增多使HPA軸活性增高，也是抑郁癥發(fā)病機(jī)制中HPA軸亢進(jìn)的誘導(dǎo)因素之一[12]。研究提示，慢性應(yīng)激可通過激活免疫細(xì)胞因子來影響神經(jīng)內(nèi)分泌、單胺遞質(zhì)系統(tǒng)、突觸可塑性及相應(yīng)腦區(qū)代謝，從而引起抑郁行為改變。另外，腫瘤或肝炎等多種以慢性炎癥反應(yīng)為特征的疾病多伴有抑郁，而給予細(xì)胞因子治療后可緩解抑郁癥狀，提示抑郁癥發(fā)生與炎癥細(xì)胞因子密切相關(guān)[13]。抑郁癥發(fā)生機(jī)制研究中細(xì)胞因子扮演著重要角色，可能激活HPA軸導(dǎo)致抑郁癥的另一條途徑。研究證實(shí)，慢性不可預(yù)見性應(yīng)激導(dǎo)致大鼠對(duì)糖水偏好度降低，消耗量減少，故將糖水消耗試驗(yàn)可作為評(píng)價(jià)抑郁模型標(biāo)準(zhǔn)[14]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，慢性應(yīng)激抑郁癥大鼠的體質(zhì)量增長緩慢，1%糖水消耗百分比顯著低于正常組，說明造模成功。模型組大鼠血清IL-1、IL-6含量明顯高于正常組，而鹽酸氟西汀和肉蔻-5味丸干預(yù)組大鼠血清IL-1、IL-6含量出現(xiàn)不同程度降低。其中肉蔻-5味丸高、中劑量組大白鼠血清IL-1、IL-6含量顯著降低(P<0.05)，低劑量組大白鼠血清IL-1、IL-6含量無差異，但均呈現(xiàn)降低趨勢(shì)。另外，前期研究結(jié)果提示，肉蔻-5味丸能夠下調(diào)慢性抑郁癥大白鼠血清ACTH和CORT含量，有效抑制HPA軸的亢進(jìn)[8]。由此可見，肉蔻-5味丸可能通過抑制外界應(yīng)激所致細(xì)胞因子含量增加，進(jìn)而抑制HPA軸亢進(jìn)這一途徑來發(fā)揮抗抑郁效應(yīng)。

傳統(tǒng)蒙醫(yī)學(xué)中無抑郁癥病名，但其誘發(fā)因素及臨床癥狀特征分析，與人體 “巴達(dá)干”和“赫依”密切相關(guān)，病位在心臟。蒙醫(yī)學(xué)認(rèn)為，胸部屬于“巴達(dá)干”區(qū)，心位于胸腔之中，故而心居于“巴達(dá)干”的總位，心又是“赫依”的竄行之道，因此，心與“赫依”和“巴達(dá)干”有著密切關(guān)系。位于心的“赫依”及“巴達(dá)干”主要與人的精神狀態(tài)、意志、思維及反應(yīng)、意識(shí)等生理活動(dòng)有關(guān)，故蒙醫(yī)古籍文獻(xiàn)中記載，當(dāng)心“赫依”功能紊亂會(huì)產(chǎn)生神志不清，睡眠減少，頭暈，嘆氣等表現(xiàn)，臨床上可出現(xiàn)記憶力減退，思維遲鈍等抑郁癥狀，當(dāng)“巴達(dá)干”功能紊亂時(shí)臨床上可見反應(yīng)遲鈍，意識(shí)模糊等“巴達(dá)干”異常的癥狀[15]。另外，心與腦以黑白脈相連，從白脈之海-腦出發(fā)的白脈像彩帶一樣延伸到心臟，當(dāng)心“赫依”和“巴達(dá)干”功能紊亂時(shí)，進(jìn)而影響白脈傳導(dǎo)，臨床可出現(xiàn)意識(shí)模糊、精神紊亂、煩躁不安等抑郁表現(xiàn)[16]。因此，從蒙醫(yī)學(xué)理論及抑郁癥臨床表現(xiàn)分析，其病因可認(rèn)為心“赫依”和“巴達(dá)干”功能紊亂，影響白脈的傳導(dǎo)功能，進(jìn)而影響腦而引起。本課題基于蒙醫(yī)學(xué)的心與腦的內(nèi)在聯(lián)系，對(duì)治療心跳、心悸、胸悶氣喘、心絞痛等心血管疾病及失眠抑郁等病癥療效顯著的蒙藥肉蔻-5味丸進(jìn)行開展抗抑郁作用研究。結(jié)果提示，肉蔻-5味丸可改善慢性抑郁癥大鼠的抑郁狀態(tài)，并能夠降低慢性抑郁癥大鼠血清IL-1、IL-6含量，這可能其通過抗炎效應(yīng)進(jìn)而調(diào)節(jié)HPA軸功能來發(fā)揮作用。近年來，蒙醫(yī)藥學(xué)作為民族醫(yī)藥的重要組成部分，以其多層次、多靶點(diǎn)作用特點(diǎn)在精神障礙性疾病等疑難雜癥的治療方面發(fā)揮著重要作用。