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        食品中維生素C的高效液相色譜檢測(cè)

        2019-09-10 00:06:33李美慧
        中國(guó)食品 2019年1期
        關(guān)鍵詞:維生素C高效液相色譜

        李美慧

        摘要:高效液相色譜檢測(cè)方法具有很強(qiáng)的分辨率、靈敏度,且能夠同時(shí)測(cè)定幾種性質(zhì)類似的食品成分。本文在闡述高效液相色譜法的基礎(chǔ)上,具體分析高效液相色譜檢測(cè)法在食品維生素C成分檢測(cè)中的應(yīng)用。

        關(guān)鍵詞:高效液相色譜;維生素C;檢測(cè)應(yīng)用

        高效液相色譜檢測(cè)法是在上世紀(jì)六十年代發(fā)展起來的一種同新型分析、分離技術(shù),是在以往液相色譜法基礎(chǔ)上引入的氣相色譜法理論,之后在高效、高靈敏度檢測(cè)器的基礎(chǔ)上發(fā)展而成。在使用的過程中,高效液相色譜法具有很強(qiáng)的靈敏度、分辨率,且色譜柱在使用的過程中能夠被反復(fù)利用,因?yàn)楸蝗藗儚V泛應(yīng)用在生物化學(xué)、食品分析、醫(yī)藥研究、無機(jī)分析等領(lǐng)域。

        一、材料和方法

        儀器和試劑的選擇。實(shí)驗(yàn)檢測(cè)儀器選擇Agilentll00高效液相色譜儀,輔助配合應(yīng)用二極管陣列檢測(cè)儀器。實(shí)驗(yàn)試劑包含甲醇、辛烷磺酸鈉和應(yīng)用甲醇辛烷磺酸鈉配置成0. 1%水溶液;三氟乙酸;67抗環(huán)血酸。利用儀器設(shè)備準(zhǔn)確稱量lOmg的抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)品,并按照每升O.lmol的比例溶解鹽酸,之后用高純度水將純水定容在100毫升左右[1]。

        色譜條件的確定。實(shí)驗(yàn)操作色譜柱型號(hào)為250mmx4.6mmx5μm;流動(dòng)相是甲醇和0.1%比例的辛烷磺酸鈉溶液;檢測(cè)波長(zhǎng)為230mm;樣本的流動(dòng)速度是每分鐘1ml;樣品的進(jìn)樣量是1OμL。在確定好色譜條件之后以濃度為基本橫坐標(biāo)、峰面積數(shù)值為縱坐標(biāo)繪制工作曲線,之后通過回歸計(jì)算得到回歸方程Y=496.5XC - 149.1,回歸系數(shù)是0.9996。

        樣品檢測(cè)和結(jié)果計(jì)算。在實(shí)驗(yàn)中,對(duì)于液體樣品不需要進(jìn)行額外的處理,在應(yīng)用濾膜過濾之后按照相應(yīng)的色譜條件進(jìn)行直接進(jìn)樣處理。固體樣品則需要按照相關(guān)規(guī)定稱取一定數(shù)量的樣品,在樣品容器中加入蒸餾水,一直到樣品達(dá)到25mL,超聲波提取5分鐘。根據(jù)樣品的峰面積計(jì)算出樣品中維生素C的含量。

        二、結(jié)果和討論

        第一,色譜條件的選擇。首先,檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇。將配置完成的維生素C溶液放置在二極管陣列進(jìn)行波長(zhǎng)掃描,發(fā)現(xiàn)維生素C溶液在239nm位置上的時(shí)候會(huì)被最大限度吸收,為此將239nm作為實(shí)驗(yàn)檢測(cè)波長(zhǎng)。維生素C的紫外吸收?qǐng)D譜和峰純度圖譜如圖1所示。其次,流動(dòng)相選擇。考慮到抗壞血酸在酸性環(huán)境中比較穩(wěn)定,因而流動(dòng)相的酸堿值確定為酸性,具體數(shù)值在3-4.5之間[2]。同時(shí),應(yīng)用辛烷磺酸鈉作為離子檢測(cè)試劑。第二,精密度試驗(yàn)。通過精密度試驗(yàn)操作發(fā)現(xiàn),RSD的數(shù)值在0.56% -1.18%。第三,回收率試驗(yàn)。應(yīng)用加標(biāo)回收的方式對(duì)試驗(yàn)的精確度進(jìn)行評(píng)價(jià),之后選取其中的五份樣本進(jìn)行色譜測(cè)定,測(cè)定結(jié)果如表1所示。第四,方法的線性范圍和檢出限。在色譜條件下制定標(biāo)準(zhǔn)的工作曲線,具體如圖2所示,根據(jù)工作曲線了解到實(shí)驗(yàn)的線性范圍為0.3μg/ML - 1.6μg/ML。第五,實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果和熒光法測(cè)定結(jié)果比較如表2所示。

        從以上的實(shí)踐操作情況來看,高效液相色譜法不僅能夠測(cè)定食品或者保健品中的維生素成分,而且還能夠在檢測(cè)分析的過程中采取定量和定性結(jié)合的方式同時(shí)分離和測(cè)定幾種維生素,從而幫助人們更好地了解食品及保健品中的成分,確保食品安全。但是從實(shí)際應(yīng)用情況來看,對(duì)于不同食品和保健品,維生素C的樣品預(yù)處理和色譜分析條件不同,為此,在具體操作中需要相關(guān)人員結(jié)合試驗(yàn)條件的不同來選擇適合的色譜分析方法,從而提升樣品測(cè)定成效。

        參考文獻(xiàn)

        [1]魯杰,楊大進(jìn),王竹天.固相萃取一高效液相色譜法測(cè)定保健食品中維生素B12的研究[J].中國(guó)食品衛(wèi)生雜志,2004,16(4):324-328.

        [2]王愛月,張向兵,李發(fā)生.高效液相色譜法測(cè)定食品及保健品中維生素C含量的研究[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2006.16(10):1175-1176.

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