閆海龍 陳樂琴 張一民 蘇浩 汪贊

摘?要：目的：探討高強度間歇性訓(xùn)練（HIIT）與中等強度持續(xù)運動對肝細胞自噬與凋亡相關(guān)因子表達的影響與差異，為運動防治急慢性肝病提供實驗依據(jù)。方法：9月齡雄性wistar大鼠70只，隨機分為基礎(chǔ)值組（B，10只），4周安靜對照組（Q1，10只），4周中等強度運動組（M1，10只），4周HIIT組（H1，10只）和8周安靜對照組（Q2，10只），8周中等強度運動組（M2，10只），8周HIIT組（H2，10只）。安靜對照組大鼠不運動，中等強度運動組以60%VO2max強度進行持續(xù)訓(xùn)練，HIIT組以50%VO2max、60%VO2max、80%VO2max的強度交替訓(xùn)練。跑臺訓(xùn)練每天50 min，每周5 d?；A(chǔ)值組大鼠在首次最大攝氧量測試后24～48 h取材，安靜對照組與干預(yù)組大鼠在干預(yù)后第4、8周最大攝氧量測試結(jié)束后24～48 h取材。采用HE染色觀察肝細胞形態(tài)，采用Western Blot檢測肝細胞中LC3-Ⅱ、p62、Bcl-2、Bax、Caspase3蛋白表達情況。結(jié)果：1）不同運動方式干預(yù)組之間細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)無明顯差別，8周各組相比4周各組細胞間隙略有增大。2）與同周安靜對照組相比，8周中等強度運動組大鼠肝細胞LC3-Ⅱ蛋白表達顯著上調(diào)（P<0.05），p62蛋白表達顯著下調(diào)（P<0.05）。而8周HIIT組上調(diào)LC3-Ⅱ、下調(diào)p62蛋白表達的效果更顯著（P<0.01）。3）與同周安靜對照組相比，中等強度持續(xù)運動組在4周與8周均顯著下調(diào)Bax/Bcl-2（P<0.01），Caspase3蛋白表達在8周時顯著下調(diào)（P<0.01）。而HIIT在4周時下調(diào)Bax/Bcl-2比中等強度持續(xù)運動更為顯著，但到8周時Bax/Bcl-2比率卻回升到與安靜組無顯著差異（P>0.05），對Caspase3蛋白表達也表現(xiàn)出相同趨勢，4周時顯著下調(diào)（P<0.01），8周時與安靜組無顯著差異（P>0.05）。結(jié)論：1）8周HIIT可有效上調(diào)大鼠肝細胞LC3-Ⅱ蛋白表達，下調(diào)p62蛋白表達，提高肝細胞自噬水平，相對于傳統(tǒng)的中等強度持續(xù)運動更為有效;2）8周中等強度持續(xù)運動可有效下調(diào)大鼠肝細胞Caspase3蛋白表達，下調(diào)Bax/Bcl-2比值，降低肝細胞凋亡水平，相對于HIIT更為持續(xù)有效。

關(guān)鍵詞：高強度間歇訓(xùn)練（HIIT）;LC3-Ⅱ;p62;Bcl-2;Bax;Caspase3

中圖分類號：G804.2?文獻標識碼：A文章編號：1006-2076（2019）03-0071-07

肝臟是人體內(nèi)最大的腺體，也是功能最復(fù)雜的器官之一，因為它對解毒、合成和釋放生物分子以及對運動肌肉的能量供應(yīng)有主要作用。最近，肝臟也被證明在運動中對氧化還原狀態(tài)和炎癥調(diào)節(jié)起著重要的作用[1]。肝臟經(jīng)常受到一系列有害刺激的影響而導(dǎo)致肝細胞死亡，在持續(xù)的破壞積累下，細胞死亡會導(dǎo)致炎癥、纖維化、肝硬化，最終導(dǎo)致肝細胞癌[2-3]。導(dǎo)致肝細胞死亡主要是由細胞凋亡和壞死引起的，也會因自噬等某些復(fù)雜情況引起[3-4]。

細胞自噬和凋亡是維護細胞和組織內(nèi)穩(wěn)態(tài)的兩種重要的分解代謝過程[5]。各類研究已經(jīng)證實，它們在決定細胞命運方面有著緊密且復(fù)雜的聯(lián)系。自噬可以通過提高半胱天冬蛋白酶（Caspase）活性導(dǎo)致細胞死亡，也可以作為一個應(yīng)激反應(yīng)，延遲Caspase酶的激活使細胞存活，并移除受損的細胞器[6]。凋亡抑制蛋白Bcl-2與Bcl-xL又可以與自噬因子Beclin-1相互作用抑制自噬[7]。新的證據(jù)表明，這兩種途徑中核心蛋白之間的相互作用是細胞凋亡與自噬之間關(guān)聯(lián)的分子機制基礎(chǔ)[8]。時至今日，自噬已經(jīng)成為繼凋亡之后生命科學(xué)領(lǐng)域最熱門的研究之一，通過運動訓(xùn)練調(diào)節(jié)細胞自噬水平越來越成為人們研究的靶點，而目前有關(guān)運動對肝細胞自噬的影響研究尚少，細胞凋亡與自噬之間的調(diào)控機制也未完全明確。

高強度間歇性訓(xùn)練（High intensity interval training，HIIT）是一種以超過無氧閾強度或是接近于或大于最大攝氧量強度進行重復(fù)多次的相對較短時間（如10 s～5 min）運動的方式。研究表明，它可以有效調(diào)節(jié)血糖水平[9]，提高體內(nèi)抗氧化酶的活性，降低氧化應(yīng)激水平[10]。與中等強度持續(xù)運動相比，HIIT在預(yù)防和減少肝脂肪沉積、減輕脂肪組織炎癥和改善胰島素敏感性方面更有效[9，11]。眾多研究已經(jīng)顯示，細胞凋亡與自噬是運動鍛煉促進機體健康的重要生理機制。本研究通過選取傳統(tǒng)的中等強度持續(xù)運動與目前備受關(guān)注的高強度間歇訓(xùn)練兩種干預(yù)方式，來探討它們對肝細胞自噬與凋亡相關(guān)因子表達的影響與差異，為運動防治急慢性肝病提供新的實驗依據(jù)。

1?對象與方法

1.1?實驗對象與分組

本研究選取9月齡清潔級雄性wistar大鼠70只。將大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機分為基礎(chǔ)值組（B，10只），4周安靜對照組（Q1，10只），4周中等強度運動組（M1，10只），4周HIIT組（H1，10只）和8周安靜對照組（Q2，10只），8周中等強度運動組（M2，10只），8周HIIT組（H2，10只）。所有大鼠均在清潔級環(huán)境下分籠飼養(yǎng)，自由采食與飲水，動物房溫度為25℃，12小時明暗周期交替。

1.2?實驗運動方案

安靜對照組：不進行運動。

中等強度運動組：大鼠進行跑臺訓(xùn)練。實驗運動前先進行VO2max測試。根據(jù)測試結(jié)果，確定運動強度為60%VO2max強度[12]進行訓(xùn)練，每天50 min，每周5 d。

HIIT運動組：運動干預(yù)前根據(jù)大鼠最大攝氧量測試結(jié)果，根據(jù)大鼠達到最大攝氧量時的跑臺運動速度，參考梁春瑜等[13]方案設(shè)計，確定HIIT運動方案進行為期8周的訓(xùn)練，每天訓(xùn)練50 min，每周訓(xùn)練5 d，運動方案見表1。干預(yù)組大鼠每兩周進行一次最大攝氧量測試，根據(jù)最大攝氧量測試結(jié)果重新調(diào)整運動強度。

1.3?VO2max測試方案

所有大鼠在正式實驗開始前及訓(xùn)練至第2，4，6，8周末時均進行VO2max測試。最大攝氧量測試根據(jù)Leandro 等[14]的研究進行改良，具體測試方案見表2。大鼠達到最大攝氧量的判斷標準為：1）大鼠在電刺激的情況下不能在跑臺上繼續(xù)跑。2）兩級之間的VO2max/一級速度之間相差小于5%。測試儀器為開放環(huán)路量熱計（OxymaxDeluxe System，哥倫布儀器，美國）。

1.4?取材

基礎(chǔ)值組大鼠在首次最大攝氧量測試結(jié)束后24～48 h取材，安靜對照組與干預(yù)組大鼠在干預(yù)后第4，8周最大攝氧量測試結(jié)束后24～48 h進行取材。2%戊巴比妥鈉腹腔注射進行麻醉，迅速摘取肝臟稱重，切取肝臟右葉投入液氮中，隨后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中保存，用于western-blot測試。

1.5?肝組織學(xué)樣本制備

將大鼠肝組織石蠟切片依次經(jīng)脫蠟、水化、蘇木素染色、分化、反藍、伊紅染色、脫水、透明、封片，制成HE染色切片。置于光學(xué)顯微鏡下觀察、采圖。

1.6?Western Blot 檢測

取肝臟100 mg加入1 mL含有蛋白酶抑制劑的裂解液中低溫勻漿，使細胞充分裂解后置于4℃離心機離心，12 000轉(zhuǎn)離心10 min，取上清液。隨后用Thermo Fisher的BCA試劑盒測定并調(diào)整蛋白濃度一致，加入蛋白上樣緩沖液，配平上樣量，70℃水浴10 min使蛋白變性后分裝樣品。

加樣到預(yù)制膠（NuPAGE Novex 12%Bis-Tris Gel）置于電泳槽，加入5%體積的電泳緩沖液，120 V電泳90 min;轉(zhuǎn)膜（轉(zhuǎn)膜緩沖液：Tris 3.03 g/L、甘氨酸14.41 g/L、甲醇200 ml/L、蒸餾水）約90 min;5%脫脂奶粉封閉1 h;一抗（Abcam：GAPDH—Ab181602，P62—Ab109012，Bax—Ab32503;Cell Signaling： Caspase3—9664s;Santa Cruz：Bcl-2—Sc-7382;Nuvos：LC3—NB100-2220）封閉4℃搖床過夜，次日用TBST洗膜8 min×4;二抗（Abcam：GAPDH、P62、Bax、Caspase3—羊抗兔Ab6721;Thermo：Bcl-2—羊抗鼠A16078）封閉1 h，后用TBST 洗膜8 min×4;化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（Bio-rad公司，美國）曝光顯影。

1.7?數(shù)據(jù)處理與分析

測試條帶采用Image Lab 4.0進行數(shù)據(jù)采集。所有實驗數(shù)據(jù)用平均數(shù)±標準差（[AKX-]±SD）表示，運用SPSS17.0進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，采用Levene檢驗進行方差齊性檢驗，單因素方差分析（One-way ANOVA）進行差異性分析。以P<0.05為顯著性差異標準，以P<0.01為非常顯著性差異標準。

2?結(jié)果

2.1?肝組織形態(tài)

圖1顯示，不論是基礎(chǔ)值組還是安靜組與運動干預(yù)組，大鼠肝細胞結(jié)構(gòu)完整，細胞核大且呈圓形。不同運動方式干預(yù)組之間細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)無明顯差別。8周各組相比4周各組細胞間隙略有增大，但細胞輪廓清晰，排列整齊，表明8周的HIIT與中等強度運動干預(yù)并未對肝細胞形態(tài)結(jié)構(gòu)造成明顯影響，運動干預(yù)沒有過量。

2.2?各組大鼠肝細胞自噬因子LC3-Ⅱ、p62蛋白表達結(jié)果

圖2顯示，安靜組LC3-Ⅱ蛋白表達無顯著變化（P>0.05）。中等強度運動組LC3-Ⅱ蛋白表達總體呈上升趨勢，但到8周時才出現(xiàn)顯著性差異，此時M2組比Q2組LC3-Ⅱ蛋白表達顯著上升34.8%（P<0.05）。HIIT組與同周安靜組相比，LC3-Ⅱ蛋白表達在4周時略有下降但無顯著性差異（P>0.05），8周時卻顯著上升，此時H2組比Q2組LC3-Ⅱ蛋白表達顯著上升52.7%（P<0.01）。H2組LC3-Ⅱ蛋白表達高于M2組，但無顯著性差異（P>0.05），H2組比H1組LC3-Ⅱ蛋白表達顯著上升53.9%（P<0.01）。

這表明8周HIIT與中等強度持續(xù)運動干預(yù)可以顯著上調(diào)LC3-Ⅱ蛋白表達，且HIIT的干預(yù)效果要優(yōu)于中等強度持續(xù)運動。

圖3顯示，安靜組p62蛋白表達無顯著變化（P>0.05）。中等強度運動組p62蛋白表達呈下降趨勢，M1組、M2組與同周安靜組相比p62蛋白表達分別顯著下降19.9%、21.1%（P<0.05）。HIIT組與同周安靜組相比，p62蛋白表達4周時無顯著差異（P>0.05），8周時H2比Q2顯著下降32.2%（P<0.01）。同時H2組比H1組p62蛋白表達顯著下降31.7%（P<0.01）。

這表明8周HIIT與中等強度持續(xù)運動干預(yù)可以顯著下調(diào)p62蛋白表達，且HIIT的干預(yù)效果要優(yōu)于中等強度持續(xù)運動，但中等強度持續(xù)運動的下調(diào)效果在4周時就表現(xiàn)出顯著性。

2.3?各組大鼠肝細胞凋亡因子Caspase3 、Bcl-2、Bax蛋白表達結(jié)果

圖4顯示，安靜組Caspase3蛋白表達無顯著變化（P>0.05）。中等強度運動組Caspase3蛋白表達總體呈下降趨勢，但到8周時才出現(xiàn)顯著性差異，此時M2組比Q2組Caspase3蛋白表達顯著下降38.4%（P<0.01）。HIIT組Caspase3蛋白表達先下降后上升，與同周安靜組相比，H1顯著下降36.6%（P<0.01），H2組已基本上升到比Q2組略低水平（P>0.05），H2比H1組顯著上升61.8%（P<0.01）。H1組比M1組顯著下降36.6%（P<0.01）。

這表明HIIT對Caspase3蛋白表達的下調(diào)效果主要在4周時，而中等強度持續(xù)運動對Caspase3蛋白表達的下調(diào)效果主要在8周時。

圖5顯示，在Bcl-2蛋白表達結(jié)果中，安靜組無顯著變化（P>0.05）。4周時與Q1組相比，M1組顯著上升22%（P<0.05），H1組顯著上升45%（P<0.01），H1組顯著高于M1組（P<0.01）。8周時與Q2組相比，H2組顯著下降15.2%（P<0.05），H2組相比H1組顯著下降38.2%（P<0.01）。

在Bax蛋白表達結(jié)果中，安靜組無顯著變化（P>0.05）。4周時與Q1組相比，M1組顯著下降16.5%（P<0.05），H1組顯著下降28%（P<0.01）。8周時與Q2組相比，M2組與H2組均無顯著性變化。

在Bax/Bcl-2比值結(jié)果中，安靜組無顯著變化（P>0.05）。中等強度運動M1組、M2組與同周安靜組相比分別顯著下降28.7%、26.7%（P<0.01）。HIIT組Bax/Bcl-2比值先下降后上升，與同周安靜組相比，H1顯著下降51.4%（P<0.01），H2組已上升到比Q2組略高但無顯著性（P>0.05），且H2組比H1組顯著上升1.17倍，同時H2組顯著高于M2組（P<0.01）。

這表明在對Bax與Bcl-2調(diào)控下的凋亡水平干預(yù)中，中等強度持續(xù)運動在4周和8周都顯著下調(diào)了凋亡水平。而HIIT主要在4周時下調(diào)凋亡水平，且4周的干預(yù)效果優(yōu)于中等強度持續(xù)運動。

[TP3q20.TIF，BP#][TS（][HT5"K][JZ]圖5?各組大鼠肝細胞免疫印跡Bax/Bcl-2結(jié)果比較[TS）]

3?討論

3.1?不同運動方式對大鼠肝細胞自噬因子LC3-Ⅱ、p62蛋白表達影響

自噬（autophagy）是真核細胞中高度保守且普遍存在的生命現(xiàn)象，主要用于降解和回收利用細胞內(nèi)不被需要的生物大分子、受損傷的細胞器等[15]。自噬過程中，細胞通過雙層膜結(jié)構(gòu)包裹細胞內(nèi)需要降解的內(nèi)源性物質(zhì)形成自噬體（autophagosome）。與此同時，一種微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（microtubule-associated protein light chain 3，LC3）的胞漿形式LC3-Ⅰ與和磷脂酰乙醇胺（phosphatidylethanolamine， PE）偶聯(lián)形成LC3-Ⅱ，并穩(wěn)定定位于自噬體內(nèi)外膜表面。因此，LC3-Ⅱ被認為自噬活動的特異性標志物。通常用LC3-Ⅱ蛋白表達量或LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值來衡量自噬活性[16]。但是由于LC3-Ⅱ?qū)贵w的敏感性高于LC3-Ⅰ，實際檢測結(jié)果LC3-Ⅰ的減少并不與LC3-Ⅱ的增加同步，因此單純比較LC3-Ⅱ蛋白的水平可能更合適[17]。p62是SQSTM1編碼的泛素結(jié)合蛋白，是自噬的選擇性底物之一。當自噬被激活時，p62 可連接LC3和泛素化的底物運送至自噬體，在自噬體與溶酶體結(jié)合成的自噬溶酶體（autolysosome）中被一同降解。因此，對LC3與p62的免疫分析被用于監(jiān)測自噬流（autophagic flux）的變化[18]。

趙軍等[19]研究發(fā)現(xiàn)，通過對高脂喂養(yǎng)的大鼠進行23周有氧運動干預(yù)，可以顯著提高肝細胞LC3-Ⅱ蛋白表達水平，抑制ROS的生成，而高脂安靜組大鼠ROS生成增多，氧化應(yīng)激水平提高，發(fā)生肝炎和肝纖維化。Rosa[20]等也通過對高脂喂養(yǎng)與常規(guī)喂養(yǎng)的老鼠進行4周自由轉(zhuǎn)輪運動干預(yù)，發(fā)現(xiàn)不管是高脂喂養(yǎng)還是常規(guī)喂養(yǎng)的老鼠均提高了肝臟基礎(chǔ)自噬水平，且相同喂養(yǎng)方式的運動組與安靜組相比，肝細胞LC3-Ⅱ蛋白表達均顯著上升，p62蛋白表達均顯著下降。提示長期規(guī)律運動可以通過提高肝細胞自噬水平，減少受損細胞器的積累，滿足能量供應(yīng)，抑制氧化應(yīng)激，從而減少肝脂質(zhì)沉積和肝內(nèi)炎癥，阻止肝纖維化的發(fā)生，保護肝臟健康。本研究結(jié)果顯示，8周HIIT與中等強度持續(xù)運動均可顯著上調(diào)肝細胞自中LC3-Ⅱ蛋白表達，顯著下調(diào)p62蛋白表達。但8周時HIIT相比中等強度持續(xù)運動上調(diào)LC3-Ⅱ、下調(diào)p62蛋白表達的效果更顯著。Wang Ningning[11]等研究也發(fā)現(xiàn)，相對于傳統(tǒng)中等強度持續(xù)運動，8周的HIIT對于阻止肝脂肪沉積和調(diào)節(jié)代謝功能方面更為有效。推測長期的HIIT對肝細胞自噬因子LC3-Ⅱ與p62蛋白表達的影響更大。值得注意的是，4周時HIIT組的LC3-Ⅱ與p62蛋白表達基本與安靜組一致，而中等強度持續(xù)運動組的LC3-Ⅱ蛋白表達已有少量上升，p62蛋白表達更是已出現(xiàn)顯著下降，提示中等強度持續(xù)運動對肝細胞LC3-Ⅱ與p62蛋白表達的影響早于HIIT。

3.2?不同運動方式對大鼠肝細胞凋亡因子Bcl-2、Bax、Caspase3蛋白表達影響

細胞凋亡（apoptosis）是由基因控制的細胞自主性死亡的過程，在眾多調(diào)控凋亡的因子中Bcl-2家族和Caspase家族發(fā)揮著重要作用。B細胞淋巴瘤-2基因（Bcl-2）是凋亡抑制基因，Bcl-2相關(guān)X蛋白（Bax）是促進凋亡的基因，Bax/Bcl-2的比率形成了細胞凋亡的“分子開關(guān)”，Bax/Bcl-2升高細胞趨于凋亡，反之細胞凋亡受到抑制。而凋亡的細胞死亡最終由Caspase家族完成。半胱天冬蛋白酶-3（Caspase3）處于Caspase級聯(lián)反應(yīng)的中心位置，是細胞凋亡的執(zhí)行者，當它被上游信號激活后，會自身切割為有活性的狀態(tài)，并水解下游底物，切斷DNA，導(dǎo)致細胞凋亡[21]。一旦Caspase3被激活，細胞死亡將不可被逆轉(zhuǎn)[22]。

研究發(fā)現(xiàn)，在游泳至力竭后的老鼠海馬體中即刻發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)Ca2+顯著增多，凋亡細胞的數(shù)量顯著增加，Caspase3蛋白表達顯著增加，說明力竭運動后細胞內(nèi)Ca2+的超載是引發(fā)凋亡增多的原因之一[23]。對大鼠進行5周游泳運動后，急性力竭運動組心肌組織的SIRT1和Bcl-2蛋白表達明顯減少，Bax和心肌細胞凋亡顯著增加，急性力竭加耐力訓(xùn)練組Bax和心肌細胞凋亡明顯減少，急性力竭加耐力訓(xùn)練加SIRT1抑制組SIRT1和Bcl-2蛋白表達明顯更低，Bax和細胞凋亡明顯更高[24]，表明SIRT1信號通路的激活和耐力運動可以抑制細胞凋亡，保護心肌細胞。人體實驗也發(fā)現(xiàn)[25]，在短時間高強度運動后，周圍血液中白細胞的MTP立即下降，白細胞在運動過程中和運動后逐漸趨于凋亡，同時在運動過程中，腫瘤壞死因子和可溶性Fas配體的血漿濃度升高，表明短時間高強度運動可導(dǎo)致外周血白細胞凋亡的增加和促炎癥介質(zhì)的增加。金其貫[26-27]等研究認為，適量的運動訓(xùn)練可使大鼠骨骼肌細胞中Bcl-2蛋白表達增加，長期運動訓(xùn)練使骨骼肌細胞中Bax蛋白表達下降。以上研究表明：運動形式、運動量和運動時間對Bcl-2、Bax、Caspase3的蛋白表達以及細胞凋亡會產(chǎn)生不同影響，短時間大強度或力竭運動會使促凋亡蛋白表達升高，抗凋亡蛋白表達降低;而長期規(guī)律運動才能有效抑制細胞的凋亡，保護機體免受外界刺激誘發(fā)的細胞損傷。本實驗中，中等強度持續(xù)運動在4周與8周均顯著下調(diào)Bax/Bcl-2比值，對Caspase3蛋白表達主要在8周時顯著下調(diào)。Luo[28]等實驗也表明，6周的耐力訓(xùn)練能明顯減少肝細胞凋亡數(shù)目。而HIIT在4周時下調(diào)Bax/Bcl-2比中等強度持續(xù)運動更為顯著，但到8周時Bax/Bcl-2比率卻回升到與安靜組無顯著差異，對Caspase3的蛋白表達也表現(xiàn)出相同的趨勢，4周時顯著下調(diào)，8周時與安靜組無顯著差異，表明HIIT對Bax/Bcl-2與Caspase3蛋白表達主要在4周時下調(diào)，而中等強度持續(xù)運動在這方面表現(xiàn)得更為持久。

3.3?肝細胞自噬與凋亡關(guān)系的探討

大量研究表明，細胞自噬和凋亡廣泛存在于真核細胞生物體內(nèi)，是維護細胞和組織內(nèi)穩(wěn)態(tài)的兩種重要分解代謝過程[5]。盡管凋亡與自噬的特征及機制不同，但兩種途徑并不是相互獨立的，它們有共同的刺激因子和調(diào)節(jié)蛋白，兩種途徑之間存在著復(fù)雜的對話。根據(jù)二者調(diào)控方式的不同，可大致將其交互作用歸納為兩種：合作關(guān)系和拮抗關(guān)系。自噬與凋亡表現(xiàn)為合作關(guān)系在現(xiàn)有研究中較為多見。該種情況下，自噬與凋亡的調(diào)控目標都是促進細胞死亡?；蚋髯酝揭l(fā)細胞死亡，或—種為主，另一為輔，也可在—方功能缺陷的情況下，另一方替補誘導(dǎo)細胞死亡。很多誘導(dǎo)凋亡的刺激常常也會誘導(dǎo)自噬，例如在治療肺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，姜黃素可以同時誘導(dǎo)癌細胞凋亡和自噬來抑制癌細胞的增殖[29]。研究發(fā)現(xiàn)，煙草煙霧可以通過激活活性氧同時誘導(dǎo)細胞凋亡和自噬增加，從而抑制胎盤的發(fā)育[30]。拮抗關(guān)系中，自噬與凋亡相互抑制，細胞自噬的上調(diào)抑制凋亡的發(fā)展，促使細胞存活。例如在骨質(zhì)疏松癥的病理過程中發(fā)現(xiàn)，成骨細胞自噬可有效抑制氧化應(yīng)激介導(dǎo)的細胞凋亡，這是治療骨質(zhì)疏松癥的潛在靶標[31]。在老鼠的癌癥模型中發(fā)現(xiàn)，自噬通過抑制p53的反應(yīng)來促進腫瘤生長，維持線粒體功能，在壓力下維持代謝平衡和生存，防止癌細胞凋亡[32]。張昊[33]等也發(fā)現(xiàn)，運動訓(xùn)練通過上調(diào)的自噬相關(guān)蛋白Atg5、Beclin1、LC3的表達，抑制心肌細胞凋亡，改善老齡大鼠心臟功能。

本實驗中對肝細胞自噬與凋亡相關(guān)因子表達的檢測顯示，8周中等強度持續(xù)運動可以持續(xù)上調(diào)肝細胞自噬水平，下調(diào)肝細胞凋亡水平。而HIIT對肝細胞的影響整體上也表現(xiàn)出上調(diào)自噬水平與下調(diào)凋亡水平的情況，但與中等強度持續(xù)運動相比，HIIT在4周時主要表現(xiàn)在下調(diào)肝細胞凋亡水平，且比中等強度持續(xù)運動下調(diào)凋亡的程度大，而在8周時HIIT主要表現(xiàn)在上調(diào)肝細胞自噬水平，且比中等強度持續(xù)運動上調(diào)自噬的程度大。表明與中等強度持續(xù)運動相比，HIIT對肝細胞自噬與凋亡水平的影響起效更快，刺激程度更大，但影響效果并不持久。在兩種不同運動方式對肝細胞的影響中，肝細胞自噬與凋亡表現(xiàn)出相互拮抗的關(guān)系，肝細胞自噬水平的上調(diào)會抑制肝細胞凋亡，改善和保護大鼠肝臟功能。

4?結(jié)論

4.1?8周HIIT可有效上調(diào)大鼠肝細胞LC3-Ⅱ蛋白表達，下調(diào)p62蛋白表達，提高肝細胞自噬水平，相對于傳統(tǒng)的中等強度持續(xù)運動更為有效。

4.2?8周中等強度持續(xù)運動可有效下調(diào)大鼠肝細胞Caspase3蛋白表達，下調(diào)Bax/Bcl-2比值，降低肝細胞凋亡水平，相對于HIIT更為持續(xù)有效。

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