廖敏，侯嬌艷，劉亞琴，張竹陽，萬鳳英

(德陽市產品質量監(jiān)督檢驗所，四川 德陽 618000)

醬油是以大豆、面粉等糧食作物為主要原料的傳統(tǒng)調味品[1]。為了保持醬油的鮮度，延長其保存期，常在醬油中添加苯甲酸鈉、山梨酸鉀等食品防腐劑[2], 但用量過多會對人體有一定的毒害作用。而安賽蜜是醬油中常用于改善口感的一種甜味劑。苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜是目前我國食品中常用的幾種人工合成防腐劑和甜味劑。對于食品添加劑的用量，我國均有嚴格的規(guī)定。GB 2760—2014《食品安全國家標準 食品添加劑使用標準》中規(guī)定醬油中苯甲酸、山梨酸、安賽蜜的使用限量均為1.0 g/kg，而糖精鈉則不允許在醬油中添加使用。目前對醬油中防腐劑和甜味劑的檢測方法主要有氣相色譜法、高效液相色譜法、離子色譜法[3]。其中，液相色譜法對樣品前處理有多種方法，比如加亞鐵氰化鉀-乙酸鋅沉淀劑、分散液液微萃取、固相萃取等。而本方法采用純水提取樣品，簡化樣品前處理，加快了分析速度，操作簡易，靈敏度高，回收率好，建立了簡便、有效的測定方法。

1 材料與方法

1.1 試劑與儀器

1.1.1 試劑

苯甲酸質量濃度為1.00 mg/mL，山梨酸質量濃度為1.00 mg/mL，糖精鈉質量濃度為1.00 mg/mL，安賽蜜質量濃度為1.00 mg/mL：購于中國計量科學研究院；甲醇(色譜純)；乙酸銨(分析純)；實驗室用水為超純水系統(tǒng)制備。

1.1.2 乙酸銨溶液

稱取1.54 g乙酸銨，加水溶解并定容至1000 mL。

1.1.3 儀器

高效液相色譜儀(配有島津LC-20AT泵、SIL-20A自動進樣器、CTO-10Asvp柱溫箱、二極管陣列檢測器PDA)、超聲清洗儀。

1.2 標準系列溶液工作的配制

1.2.1 混合標準溶液的配制

用移液槍準確量取苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜標準儲備液5 mL到50 mL容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻。此溶液濃度為0.1 mg/mL。

1.2.2 標準曲線

臨用前用水將0.1 mg/mL混合標準溶液逐級稀釋，配成質量濃度為0.01，0.025，0.05，0.1 mg/mL的標準系列工作溶液。

1.3 色譜條件

色譜柱：ODS-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流動相為0.02 mol/L乙酸銨-甲醇(體積比為95∶5)；流速為1.0 mL/min；柱溫為35 ℃；檢測波長為230 nm；進樣量為10 μL。

1.4 樣品處理

稱取大約2 g樣品(精確到0.0001 g)，置于50 mL容量瓶中，用水溶解并定容至刻度，混勻，經0.22 μm濾膜過濾，濾液待上機測定。

2 結果與分析

2.1 檢測波長的選擇

由二極管陣列檢測器獲得的光譜圖可知，苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜的最大吸收波長在190～250 nm之間，綜合考慮4種化合物在紫外區(qū)的檢測靈敏度，本實驗選擇230 nm作為檢測波長。

2.2 流動相和流速的選擇

依據國標GB 5009.28—2016《食品安全國家標準 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精鈉的測定》采用的流動相為0.02 mol/L乙酸銨溶液-甲醇(體積比為95∶5)；流速為1.0 mL/min。經試驗發(fā)現(xiàn)此方法對苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜的分離效果很好，能實現(xiàn)基線分離，靈敏度高，方法簡單，故采取此法。苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜混合標準溶液色譜圖見圖1。

圖1 混合標準溶液(0.1 mg/mL)液相色譜Fig.1 Liquid chromatography of the mixed standard solution (0.1 mg/mL)

2.3 線性范圍和檢出限

按所選擇的色譜條件下對一系列不同質量濃度的混合標準溶液進行色譜測定，以各組分的質量濃度和峰面積繪制標準曲線，其線性關系、相關系數(shù)、檢出限見表1。

表1 線性關系和檢出限Table 1 Linear relations and detection limits

由表1可知，各組分的線性方程、相關系數(shù)良好。

2.4 方法的回收率和精密度

按1.4的方法制備加標樣品，在線性范圍內加入一定量的標準品做加標回收實驗。每個樣品平行測定6次，計算4種添加劑的回收率和精密度，結果見表2。平均回收率在90%～104%，相對標準偏差均小于3%，測定結果令人滿意。

表2 回收率和精密度(n=6)Table 2 Recovery rate and precision (n=6)

續(xù) 表

3 結論

食品添加劑作為一種非營養(yǎng)物質，少量添加即可改善食品外觀、風味和組織結構[4]，但超量或違規(guī)使用添加劑的現(xiàn)象時有發(fā)生。為了保證食品安全，國內外學者一直在進行著不懈的探索[5]。目前，我國醬油每年生產量超過600萬噸，約占世界總產量的60%[6]。為確保其安全，需要建立高效、快捷的食品添加劑檢測方法。而本方法通過高效液相色譜同時測定醬油中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜，回收率在90%～104%，相對標準偏差均小于3%，簡化了樣品前處理，具有操作快速、簡便、準確等優(yōu)點，適合醬油中苯甲酸、山梨酸、糖精鈉、安賽蜜的檢測。