李鳳琴 王 玉

(西昌學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院,四川西昌 625014)

大腸埃希氏菌俗稱大腸桿菌（Escherichia coli），為環(huán)境中的常在菌，但某些特定血清型會給養(yǎng)殖業(yè)帶來較為嚴(yán)重的損失。而隨著抗生素在細(xì)菌疾病防控中的使用，特別是廣譜抗生素的大劑量、大范圍地不合理使用，使得大腸桿菌耐藥情況日益突出。

四環(huán)素作為廣譜抗生素，因其對多種細(xì)菌均有很好的抑制效果而被廣泛用于大腸桿菌病的防治中，大腸桿菌對四環(huán)素的耐藥性問題也隨之日漸突出，目前研究發(fā)現(xiàn)，其耐藥機(jī)制主要包括四環(huán)素外排泵機(jī)制、核糖體保護(hù)機(jī)制、酶滅活和核糖體靶位修飾四種。

1 方法

64株雞源大腸桿菌（Escherichia coli）菌株由攀西地區(qū)動物疫病檢測與防控省級重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室分離鑒定保存。

用DNA提取試劑盒按說明書步驟和要求提取復(fù)蘇菌株DNA。

參照基因庫中的CP024992.1序列設(shè)計(jì)引物，上游引物（P1）序列為TTGGCATTCTGCATTCACTCG，下游引物（P2）序列為CCACCCGTTCCACGTTGTT；預(yù)計(jì)擴(kuò)增產(chǎn)物長度為344bp。

經(jīng)優(yōu)化后，使用下列條件進(jìn)行各菌株tetA基因的檢測。

上下游引物各0.5μl；2×PCR Master Mix 12.5μl；DNA模板2μl；ddH2O 9.5μl。50℃退火30s，共30個(gè)循環(huán)。

PCR產(chǎn)物在1.5%的瓊脂糖凝膠中進(jìn)行電泳，并觀察結(jié)果。

2 試驗(yàn)結(jié)果

PCR產(chǎn)物經(jīng)測序比對，確為tetA基因。部分菌株P(guān)CR產(chǎn)物電泳結(jié)果如圖1，tetA基因攜帶菌株在250～500bp之間出現(xiàn)明亮的單一條帶。

圖1 部分菌株P(guān)CR產(chǎn)物電泳圖

經(jīng)統(tǒng)計(jì)，64株大腸桿菌中，有58株為陽性，6株為陰性，tetA耐藥基因檢出率為90.6%。

3 討論分析

近年來，大腸桿菌對抗生素耐藥性研究主要集中在β-內(nèi)酰胺類、氨基糖苷類以及喹諾酮類等藥物上。但就目前形勢來看，大腸桿菌對四環(huán)素類抗生素的耐藥性也不容忽視。本文的檢測結(jié)果也顯示，涼山地區(qū)雞源大腸桿菌tetA基因流行廣泛，雖未進(jìn)行四環(huán)素類抗生素耐藥表型的驗(yàn)證，但可推測該地區(qū)四環(huán)素類抗生素耐藥性形勢嚴(yán)峻，與部分學(xué)者在其他地區(qū)的研究結(jié)果一致。

針對這一現(xiàn)狀，建議該地區(qū)做好大腸桿菌病的科學(xué)防控，防止耐藥基因在不同菌株和菌種之間進(jìn)行傳播。