蒙菁菁 楊杰

(廣西壯族自治區(qū)賀州市人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科 廣西 賀州 542699)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種常見的以持續(xù)呼吸道癥狀和氣流受限為特征的慢性呼吸系統(tǒng)疾病。其發(fā)病率、致殘率和死亡率高，給社會(huì)帶來了嚴(yán)重的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國2007年COPD患者發(fā)病率為8.4%，而王辰院士等人2017年在柳葉刀發(fā)表的文章顯示：我國40歲及以上人群，COPD患者的發(fā)病率已高達(dá)13.7%，目前仍呈明顯上升趨勢(shì)?，F(xiàn)階段，臨床上治療COPD患者的效果令人不滿意，尚無藥物能改善慢阻肺的自然病程。炎癥機(jī)制是COPD疾病最主要的一種發(fā)病機(jī)制，而免疫功能下降也在疾病進(jìn)展中發(fā)揮著重要作用[1]。有研究指出，細(xì)胞免疫參與了COPD的病因、發(fā)病機(jī)制、恢復(fù)及預(yù)后整個(gè)過程[2-3]。COPD患者隨著病情加重細(xì)胞免疫功能進(jìn)一步下降，持續(xù)的T淋巴細(xì)胞降低可提示預(yù)后不良[4]。本采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)不同時(shí)期COPD患者外周血CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞的數(shù)量，探討COPD患者外周血T淋巴細(xì)胞變化的意義，為COPD的免疫預(yù)防和治療提供參考。

1.資料與方法

1.1 一般資料

收集2018年1月—10月賀州市人民醫(yī)院呼吸內(nèi)科急性加重慢性阻塞性肺疾病患者106例為對(duì)象，其納入標(biāo)準(zhǔn)：均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)會(huì)13年修訂版慢性阻塞性肺疾病診治指南[8]。入選患者排除以下情況：自身免疫性疾病、支氣管哮喘、肺間質(zhì)病、活動(dòng)性肺結(jié)核、支氣管擴(kuò)張、惡性腫瘤、AIDS、近期使用免疫調(diào)節(jié)劑或抑制劑者或者不能配合完成支氣管舒張實(shí)驗(yàn)者，合并其它心肝腎等疾病者。106例，患者年齡40～80歲，其中男60例，女46例，平均年齡(64.42±9.42)歲，根據(jù)COPD患者肺功能FEVl占預(yù)計(jì)值百分比的數(shù)值結(jié)果，把患者分為Ⅰ(27例)、Ⅱ(26例)、Ⅲ(25例)、Ⅳ28例)四組；根據(jù)患者血?dú)夥治鼋Y(jié)果分為呼吸衰竭組(50例)和無呼吸衰竭組(56例)；根據(jù)急性加作次數(shù)/年分為頻繁急性加重組（56例）和非頻繁急性加作組（50例）；其中每年急性加重次數(shù)≥2次者，稱為頻繁急性加重，每年急性加重次數(shù)≤1次者稱為非頻繁急性加重，分別測(cè)定上述觀察指標(biāo)的不同組別COPD患者外周血淋巴細(xì)胞免疫分型CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD4+/CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞比值。隨機(jī)選取同期在本院體檢的健康者作為正常對(duì)照組共26例，其中男16例，女10例，年齡40～75歲，平均年齡(63.46±7.54)歲。COPD組和正常對(duì)照組在性別、年齡、身高、體重等基本資料比較中差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。P＞0.05。所有入選者均被告知目的，自愿接受檢查并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 儀器和試劑 儀器和試劑CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC四色試劑（貨號(hào)340499，BD公司）用于檢測(cè)CD3+、CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞；IX FACS裂解液（貨號(hào)349202，BD公司）用于裂解紅細(xì)胞。流式細(xì)胞儀：型號(hào)為BD FACS CantoⅡ，（BD公司）。測(cè)試管為絕對(duì)計(jì)數(shù)管(貨號(hào)340334，BD公司)。肺功能測(cè)定：Quark-PFT3肺功能檢測(cè)儀（意大利科時(shí)邁），技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)參考2005年美國學(xué)會(huì)和歐洲呼吸協(xié)會(huì)共同制定的肺功能測(cè)準(zhǔn)口。血?dú)夥治鰷y(cè)定采用EDAN i15檢測(cè)儀，測(cè)試卡為BG10血?dú)馍瘻y(cè)試卡(深圳市里邦精密儀器股份有限公司)。

1.2.2 血液樣本制備 外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)所有患者及健康體檢者均于入院第二天清晨空腹抽取外周靜脈血2ml。全血標(biāo)本采用乙二胺四乙酸二鉀抗凝，6小時(shí)之內(nèi)送測(cè)定。將試管分為兩組，分別加入CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC四色試劑20ul，然后分別加入全血標(biāo)本50ul，于振蕩器上混勻，室溫避光孵育15min。加入IX FACS裂解液500ul，充分震蕩，室溫避光放置15min。待紅細(xì)胞充分完全裂解后，采用BD FACS CantoⅡ流式細(xì)胞儀（美國BD公司）檢測(cè)各份血液標(biāo)本中CD3+、CD4+、CD8+T細(xì)胞占淋巴細(xì)胞的百分率。

肺功能測(cè)定采用Quark-PFT3肺功能檢測(cè)儀（意大利科時(shí)邁）檢測(cè)，檢測(cè)所有受試者第1秒用力呼氣容積占預(yù)計(jì)值百分比（FEV1%prep）、第1秒用力呼氣容積/用力肺活量比（FEV1/FVC）以及最大用力呼氣中段流量占預(yù)計(jì)值百分比（MMFR%prep），所有患者都檢測(cè)三次，取三次檢測(cè)結(jié)果平均值。所有肺通氣功能檢查由同一名檢測(cè)員完成并由同一名專科醫(yī)師出具報(bào)告。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2.結(jié)果

2.1 入選各組病例的基本情況

COPD組與正常對(duì)照組的性別、年齡、身高、體重比較均無顯著性差異（P＞0.05），見表1。

表1 急性加重慢性阻塞性肺疾病組與正常對(duì)照組一般資料比較（）

表1 急性加重慢性阻塞性肺疾病組與正常對(duì)照組一般資料比較（）

正常對(duì)照組 COPD組 P性別(男/女)16/10 60/46 ＞0.05年齡(歲)63.46±7.54 64.42±9.42 ＞0.05身高(cm)160.04±9.03159.29±16.26 ＞0.05體重(kg)50.85±8.79 54.24±9.43 ＞0.05

2.2 急性加重期COPD患者不同肺功能分級(jí)外周血淋巴細(xì)胞免疫分型結(jié)果

與正常對(duì)照組比較，肺功能Ⅲ級(jí)組和肺功能Ⅳ級(jí)組COPD患者外周血CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞以及CD3+CD4+/CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞比例均降低，而肺功能Ⅳ級(jí)組COPD患者外周血CD3+T淋巴細(xì)胞比例也較正常對(duì)照組降低。肺功能Ⅳ級(jí)組COPD患者外周血CD3+，CD3+CD4+，CD3+CD4+/CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞比例也較Ⅰ級(jí)肺功能COPD組降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 不同等級(jí)肺功能患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群結(jié)果比較

2.3 急性加重次數(shù)不同COPD患者外周血淋巴細(xì)胞免疫分型結(jié)果。頻繁急性加重期慢性阻塞性肺疾病患者外周血CD3+CD4+T細(xì)胞亞群較正常對(duì)照組及非頻繁急性加重組均降低，P＜0.05，而頻繁急性加重組CD3+T淋巴細(xì)胞亞群與非頻繁急性加重期組比較，明顯下降▲▲P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表3。

表3 急性加重次數(shù)不同患者外周血T淋巴細(xì)胞亞群結(jié)果比較

2.4 不同血氧程度外周血T淋巴細(xì)胞亞群

COPD呼吸衰竭組中CD3+T淋巴細(xì)胞及CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞與無呼吸衰竭組及正常對(duì)照組比較，均明顯降低(均P＜0.01)。見表4。

表4 不同血氧程度外周血T淋巴細(xì)胞亞群結(jié)果比較()

表4 不同血氧程度外周血T淋巴細(xì)胞亞群結(jié)果比較()

與正常對(duì)照組比較,★P＜0.05,★★P＜0.01,與無呼吸衰竭組比較▲P＜0.05,▲▲P＜0.01。

呼吸功能分級(jí) n CD3+ CD3+CD4+ CD3+CD8+ CD3+CD4+/CD3+CD8+正常對(duì)照組 26 65.16±9.05 41.14±8.32 23.59±6.52 1.88±0.64無呼吸衰竭組 56 63.73±11.83 38.78±10.77 24.81±9.04 1.76±0.78呼吸衰竭組 50 52.43±14.25★★▲▲ 28.90±10.93★★▲▲ 23.07±9.19 1.44±0.71★▲

3.討論

慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一種累及氣道、肺實(shí)質(zhì)、肺血管及至全身的慢性炎癥。其主要病理改變?yōu)橛泻怏w或顆粒導(dǎo)致氣道黏膜的慢性炎癥并持續(xù)發(fā)展。慢阻肺的病因復(fù)雜、發(fā)病機(jī)制尚沒有得到完全闡明。急性加重COPD是指COPD患者短期內(nèi)出現(xiàn)咳嗽、咳痰、呼吸困難等癥狀加重，或伴發(fā)熱等癥狀出現(xiàn)。急性加重致患者需要反復(fù)住院，從而大大增加了其醫(yī)療費(fèi)用，并使其死亡風(fēng)險(xiǎn)明顯增加，尤其是頻繁急性加重患者，其肺功能下降速度及未來風(fēng)險(xiǎn)較無急性加重患者明顯增加。即使經(jīng)積極抗炎和舒張支氣管等常規(guī)治療，COPD患者的治療未取得滿意療效。

T淋巴細(xì)胞作為體內(nèi)重要的免疫細(xì)胞，主要參與調(diào)解機(jī)體細(xì)胞免疫。在T細(xì)胞亞群中，CD3+是T細(xì)胞的特征性分子表面標(biāo)志，主要反應(yīng)T細(xì)胞的總數(shù)；CD4+是輔助T細(xì)胞(TH)和效應(yīng)T細(xì)胞的表面標(biāo)志，其通過分泌細(xì)胞因子和表達(dá)表面分子對(duì)調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的啟動(dòng)及強(qiáng)弱起重要作用，該細(xì)胞減少，表示機(jī)體免疫功能下降，CD8+抗原是細(xì)胞毒T細(xì)胞（Tc）和抑制T細(xì)胞(TS)的表面標(biāo)志，主要?dú)乖墓δ?，有助于消除病原體，但當(dāng)其細(xì)胞數(shù)量過度則可引導(dǎo)致機(jī)體的損傷即CD4+/CD8+比例下降，提示免疫功能低下，免疫調(diào)節(jié)處于負(fù)調(diào)節(jié)狀態(tài)。目前，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)慢阻肺患者的T淋巴細(xì)胞分化異常顯著，這種分化異常易導(dǎo)致患者免疫功能低下并增加易感性[5]。而慢阻肺患者的反復(fù)急性發(fā)作又會(huì)加重自身免疫功能的紊亂，導(dǎo)致呼吸道防御功能逐漸下降甚至損傷從而增加感染的發(fā)生率，如此惡性循環(huán)，從而導(dǎo)致肺功能的進(jìn)行性下降，以及疾病進(jìn)行性進(jìn)展加重[6]。

本結(jié)果顯示，與正常對(duì)照組比較，肺功能Ⅲ級(jí)組和肺功能Ⅳ級(jí)組COPD患者外周血CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞以及CD3+CD4+/CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞比例均降低，而肺功能Ⅳ級(jí)組COPD患者外周血CD3+T淋巴細(xì)胞比例也較正常對(duì)照組降低.肺功能Ⅳ級(jí)組COPD患者外周血CD3+，CD3+CD4+，CD3+CD4+/CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞比例也較Ⅰ級(jí)肺功能COPD組降低。當(dāng)COPD患者反復(fù)急性加重及合并呼吸衰竭時(shí)，其CD3+和CD4+T淋巴細(xì)胞水平均較正常對(duì)照組及非頻繁急性加重組和無呼吸衰竭組降低，表明患者肺功能越差，急性加重越頻繁以及呼吸功能越差，其免疫功能則越差，同時(shí)也說明患者免疫功能低下增加了慢性阻塞性肺疾病的易感性，且與病情的嚴(yán)重程度正相關(guān)。正常對(duì)照組及各組中外周血CD8+T淋巴細(xì)胞淋巴未見明顯異常，而相關(guān)研究顯示[7-8]COPD患者氣道內(nèi)CD8+T淋巴細(xì)胞增多，表明CD8+T淋巴細(xì)胞向氣道內(nèi)募集、激活而釋放多種炎性介質(zhì)進(jìn)而破壞肺的結(jié)構(gòu)和引起局部炎癥反應(yīng)[9]。CD8+T淋巴細(xì)胞的這種變化可能與CD8+T淋巴細(xì)胞重新分布有關(guān)。