孫英慧 宋爽 楊紫恩

（北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院 遼寧 沈陽(yáng) 110016）

原發(fā)性肝癌是臨床常見的一種惡性腫瘤，主要由肝細(xì)胞和(或)肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞癌變導(dǎo)致。近年來(lái)原發(fā)性肝癌治療手段逐漸豐富，包括手術(shù)治療、放化療以及免疫治療等手段極大提高了原發(fā)性肝癌患者的生存率[1]。其中過(guò)繼免疫治療是治療原發(fā)性肝癌的新型手段，細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(CIK)作為一種體外廣譜抗瘤免疫活性細(xì)胞目前在原發(fā)性肝癌免疫治療中得到了廣泛應(yīng)用[2]，為進(jìn)一步探討CIK細(xì)胞免疫治療原發(fā)性肝癌的臨床療效，現(xiàn)做如下報(bào)道。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選擇我院2010年5月—2016年5月間收治的71例原發(fā)性肝癌患者，所有患者均經(jīng)手術(shù)病理結(jié)果確診，納入時(shí)病灶無(wú)轉(zhuǎn)移，臨床分期I、Ⅱ期，Child-pugh分級(jí)為A、B級(jí)，且未接受過(guò)其他免疫抑制劑治療。其中男性患者37例，女性患者34例，年齡42～78歲，平均年齡（62.3±2.5）歲。

1.2 治療方法

抽取患者外周血50mL，使用密度梯度離心法分離出1×107～7×107個(gè)單個(gè)核細(xì)胞，細(xì)胞濃度控制在1×106/mL～2×106/mL，并加入IFN-γ1000IU/mL/mL，置于37℃、5%CO2環(huán)境中培養(yǎng)24h。然后加入單克隆抗CD3抗體100ng/mL、IL-2 1000U/mL繼續(xù)培養(yǎng)1～2d，每2～3天添加新鮮無(wú)血清培養(yǎng)基及IL-21000U/mL繼續(xù)培養(yǎng)2周。所有制備操作流程均符合臨床相關(guān)規(guī)定及安全標(biāo)準(zhǔn)，質(zhì)控合格后于CIK細(xì)胞培養(yǎng)第15d收集、離心、洗滌CIK 細(xì)胞，并使用20%人血白蛋白生理鹽水重懸，制成 200mLCIK細(xì)胞懸液，1h內(nèi)靜脈輸注到患者體內(nèi)，隔日再回輸一次，2次為1療程，持續(xù)治療3個(gè)療程。

1.3 療效評(píng)價(jià)指標(biāo)

采集患者靜脈血2ml，利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)患者治療前后的T細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞水平，對(duì)免疫功能進(jìn)行評(píng)價(jià)，同時(shí)對(duì)患者進(jìn)行2年的隨訪，記錄患者生存情況及復(fù)發(fā)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS20.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用表示，計(jì)數(shù)資料用率（%）表示，其中計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 免疫功能比較

患者治療后CD8+水平以及CD4+/CD8+較治療前有所改善，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），治療前后CD3+、CD4+水平差異未見統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表。

表 患者治療前后T細(xì)胞亞群比較（）

表 患者治療前后T細(xì)胞亞群比較（）

CD3+(%)CD4+(%)CD8+ (%)CD4+/CD8+治療前 77.28±16.59 42.25±11.43 25.87±7.94 1.86±0.61治療后 77.42±17.26 41.68±12.51 29.26±9.25 1.45±0.57 P＞0.05 ＞0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.2 隨訪結(jié)果

71例患者中，復(fù)發(fā)13例，死亡9例，復(fù)發(fā)率和病死率分別為18.3%和12.6%。

3.討論

肝癌的發(fā)生及發(fā)展與患者的免疫功能有密切關(guān)系，手術(shù)是目前治療肝癌的主要方式，但術(shù)后患者預(yù)后差、復(fù)發(fā)率高[3]，提高肝癌患者的免疫功能對(duì)于提高臨床療效，延長(zhǎng)患者生存期具有重要意義。過(guò)繼免疫治療是提高腫瘤患者免疫功能的一種重要治療手段，對(duì)于提高患者的免疫功能，降低腫瘤的復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移率有重要作用[4]。CIK是一群具有非組織相容性復(fù)合體限制殺瘤活性的異質(zhì)細(xì)胞，其中CD3和CD56 T細(xì)胞具有體外增殖能力強(qiáng)、廣譜高效殺瘤活性等特點(diǎn)[5]，對(duì)于調(diào)節(jié)和增強(qiáng)機(jī)體免疫功能，清除體內(nèi)殘余病灶，防止腫瘤復(fù)發(fā)有積極意義。

機(jī)體免疫系統(tǒng)主要由CD4+與CD8+相互作用形成，腫瘤患者因機(jī)體免疫功能降低，因此出現(xiàn)CD4+下降而CD8+上升，進(jìn)而導(dǎo)致CD4+/CD8+下降[6]。采用CIK細(xì)胞免疫治療原發(fā)性肝癌取得了較好的臨床療效，治療后患者的T細(xì)胞亞群CD8+水平以及CD4+/CD8+較治療前有所改善（P＜0.05），且遠(yuǎn)期療效較為理想，這與宋娟[7]報(bào)道一致。Pan[8]對(duì)204例外科術(shù)后的肝癌患者行至少4周期CIK細(xì)胞治療，患者治療后的5年生存率明顯高于未用CIK細(xì)胞治療組患者。CIK抑制腫瘤的機(jī)理在于非MHC限制性細(xì)胞毒性作用由NKG2D介導(dǎo)，與顆粒酶作用后造成細(xì)胞溶解，并釋放顆粒酶導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞裂解，同時(shí)增強(qiáng)機(jī)體對(duì)癌細(xì)胞的免疫功能，提升免疫監(jiān)視功能水平。

綜上所述，采用CIK細(xì)胞免疫治療原發(fā)性肝癌的療效確切，能夠有效改善患者免疫功能，對(duì)于降低復(fù)發(fā)率，延長(zhǎng)生存期具有積極意義，可在臨床推廣應(yīng)用。