文/姜紅 侯小平 何毅 崔巍

以丙酮、氯仿為萃取劑，采用負離子化學源氣相色譜/質(zhì)譜法對生物檢材中的三唑侖進行了分析檢驗 // 三唑侖分子結(jié)構(gòu)中含有電負性較大的鹵族元素氯（Cl），應用負離子化學源進行檢驗可以極大地提高檢測靈敏度，得到了較為滿意的檢驗結(jié)果，該方法可用于公安機關(guān)實際辦案。

三唑侖（Triazolam，又稱海樂神、酣樂欣、三唑苯二氮卓），化學名為8-氯-6-氯苯-1-甲基-4H-三唑侖，[4,3a][1,4]-苯并二氮卓（C17H12Cl2N4），屬三唑苯二氮卓類（benzodiazepines）安眠鎮(zhèn)靜藥物，臨床上常用來治療抗焦慮和失眠。三唑侖純品為白色或淡黃色結(jié)晶粉末，幾乎無味，溶于氯仿，稍溶于乙醇，微溶于水和乙醚。藥用為藍色片劑，每片含0.25 mg三唑侖，服用半片就有明顯的催眠作用，血中濃度高于4 ng/mL就會產(chǎn)生明顯的鎮(zhèn)靜作用。

因為三唑侖屬于新型高效安眠、鎮(zhèn)靜藥，藥效極強（少量使用即產(chǎn)生藥效），在市場上有售，易于獲得。所以，在近年來的麻醉搶劫、強奸案件中，三唑侖是案犯經(jīng)常使用的麻醉藥物之一。三唑侖進入體內(nèi)后，在血中以原體形式存在，在尿中原體含量低于1%，而其代謝產(chǎn)物α-羥基三唑侖卻占60-80%。由于三唑侖代謝速度快，體內(nèi)組織及體液中含量極微，這給檢驗工作帶來一定的困難，目前國內(nèi)外分析三唑侖及其代謝產(chǎn)物α-羥基三唑侖的方法有：GC-NPD法、GC-ECD法、HPLC法、GC/MS和GC/MS/MS法，本文采用負離子化學源氣相色譜/質(zhì)譜法（NCI-GC/MS）檢驗生物檢材中的三唑侖，該方法操作迅速、簡便，干擾小、靈敏度高，結(jié)果準確可靠，可直接用于公安基層辦案。

實驗部分

檢測器溫度：280 ℃；

柱溫（程序升溫）：80 ℃（2 min）30℃ /min 280℃（16.5 min）；

分流比 ：20：1 ；

總流量：2 mL/min；

質(zhì)譜數(shù)據(jù)采集模式：全掃描;

掃描范圍：40-450 m/z；

電子倍增器電壓：1.0 kV。

實驗方法

首先要對檢材進行前處理：取檢材血5 mL（或尿5 mL、胃內(nèi)容物、肝各 5 g），用丙酮 -水（9：1）20 mL浸泡，超聲萃取20 min。離心分離，上清液在水浴80℃下，濃縮至2 mL。調(diào)pH=10，用氯仿10 mL振蕩、提取5 min，離心分離，分出氯仿。再用10mL氯仿提取一次，合并兩次提取液，在50℃下?lián)]干氯仿，用100μL甲醇溶解，然后經(jīng)GC/MS進行分析。

結(jié)果與討論

實驗儀器

GCMS-QP5050A（島津公司）；

離子源：NCI源（負離子化學源）；

載氣：CH4、He.

實驗條件

色譜柱：J&W DB-5（30 mX 0.25 mm X 0.25μm）毛細管柱；

傳輸線溫度：250 ℃；

進樣口溫度：280 ℃；

利用負離子化學源氣相色譜/質(zhì)譜法檢驗三唑侖的理論依據(jù)

因為三唑侖多從尿中代謝并排出，所以在麻醉搶劫、強奸案中，尿液是最好的檢材。但因尿中藥物原體極微，難以檢測，所以對尿液中三唑侖的分析多是以檢測其代謝產(chǎn)物α-羥基三唑侖為主。而三唑侖的代謝物在尿中并非以游離狀態(tài)存在，而是與葡萄糖醛酸結(jié)合，形成共軛化合物，所以檢測尿中的代謝物必須先水解，使之從結(jié)合態(tài)中游離出來，才能有效地將其提取出來。又由于三唑侖的代謝物含有羥基，需要衍生化后才能進樣分析，因此前處理過程比較繁瑣且比較費時。而用負離子化學源氣相色譜/質(zhì)譜法檢驗三唑侖，大大簡化了前處理過程，提取步驟較少，操作簡便快速。

化學電離是利用樣品蒸氣分子與甲烷等反應氣體的離子相互作用（分子-離子反應）而使樣品分子離子化。由于分子-離子反應過程并不給予分子離子過多的能量，因而減少了分子離子進一步裂解的幾率，增加了分子離子峰強度，減少了碎片離子峰，常常生成質(zhì)子化的分子，這些離子稱為準分子離子，因此化學電離屬于一種軟電離技術(shù)。它的優(yōu)點是，即使對于不穩(wěn)定的有機化合物，也可得到相對豐度較大的分子離子峰，提供了樣品分子量的信息。負離子化學源，是高親電化合物的一種極靈敏、選擇性極強的質(zhì)譜分析法，它彌補了正離子CI和EI法靈敏度低的缺陷，對鹵素類化合物靈敏度非常高，其靈敏度可以和電子捕獲檢測器（ECD）相媲美。

利用負離子化學源氣相色譜/質(zhì)譜法檢驗三唑侖的優(yōu)勢

在麻醉搶劫、強奸案件中，尿液是最好的檢材，其次是血液。三唑侖在體代謝速度快，體內(nèi)組織及體液中含量極微，在體內(nèi)尿液中含量低達10-10。三唑侖具有高親酯性，易溶于生物膜的類脂質(zhì)中而擴散。在胃腸道很快通過毛細血管壁而被吸收到血液中，在血漿中與血漿蛋白的結(jié)合率達90%。但它在血液中存留時間很短，很快就在肝臟中進行代謝并隨尿排出，三唑侖在血漿中最大治療濃度僅為0.02 μg/mL，因此它在血液中濃度也很低,見表1。特別是對麻醉搶劫、強奸案件中的活體檢驗用質(zhì)譜法直接定性難度較大，而用其他方法對體內(nèi)檢材一般也檢不出來，因為三唑侖的沸點較高，一般在GC（FID、NPD檢測器）、GC/MS（EI源）等儀器上響應很低，所以在實際辦案中很容易漏檢，因此常常使案件的偵破工作陷入僵局。而采用負離子化學源氣相色譜/質(zhì)譜法檢驗三唑侖，效果較好，因為三唑侖分子結(jié)構(gòu)中含有鹵族元素，（含有二個氯原子），應用負化學源可以極大地提高檢測靈敏度，得到滿意的結(jié)果。

表1 三唑侖在血漿中的有關(guān)濃度（ng/mL）。

案例應用

案例1

X年X月X日，41歲的劉某某被3名犯罪嫌疑人殺死并被分尸，尸體分多處埋藏。半年后偵查人員將其尸體挖出三塊，均已高度腐敗。將其送到公安部物證鑒定中心進行檢驗，理化檢驗人員對送檢的死者的胃及胃內(nèi)容、肝組織分別進行了檢驗。首先用有機溶劑進行提取，然后用GC/ECD、GC/MSNCI進行分析，從送檢的死者的胃及胃內(nèi)容、肝組織中均檢出三唑侖成分，肝組織中三唑侖的含量為1.36 μg/g，進而為案件的偵破，提供了科學的證據(jù)。

案例2

X年X月X日，江西省某地一年輕女子劉某，被一中年男子騙至當?shù)匾宦蒙缰?，該男子誘騙劉某喝下1罐飲料，致使劉某昏迷，遂對劉某進行強奸，并搶走現(xiàn)金、首飾及手機等物品。辦案人員將受害者劉某的尿液，送至公安部物證鑒定中心進行檢驗，首先將受害者劉某的尿液用有機溶劑進行提取，然后用GC/ECD、GC/MS-NCI進行分析，在劉某的尿液中檢出麻醉藥物三唑侖的成分，為確定案件的性質(zhì)提供了有力的證據(jù)。

案例3

X年X月X日晚9時許，湖南省某地3位看管園林的老人，在喝了他人送的牛奶后昏睡不醒，待第二天醒后3人發(fā)現(xiàn)門前一棵珍貴的樹木—羅漢松已被挖走。刑技人員對受害人李某醒后的第一泡尿液進行了提取，并送到公安部物證鑒定中心進行分析檢驗。經(jīng)對受害人李某醒來后的第一泡尿液進行GC/ECD、GC/MS-NCI分析，檢出麻醉藥物三唑侖的成分。

圖1 案例1中三唑侖的總離子流圖。

圖2 案例1中三唑侖的質(zhì)譜圖。

圖4 案例3中三唑侖的總離子流圖。

結(jié)語

麻醉搶劫、強奸案件的發(fā)生具有很大的社會危害性，不僅會給受害者造成財物損失，同時也極大地危害了受害人的身心健康。為了更有力地打擊這類犯罪案件，為案件的偵破提供線索，指明方向，為證實犯罪提供科學的依據(jù)，必須建立一套完整、系統(tǒng)的對三唑侖及其代謝物在生物體內(nèi)的分析檢驗方法，以便及時、準確地對其進行定性和定量分析。實驗結(jié)果表明：對于麻醉搶劫、強奸案件中體內(nèi)組織及體液中的麻醉藥物，可采用負離子化學源氣相色譜/質(zhì)譜法進行檢驗，該方法操作簡便、快速、干擾小、靈敏度高，結(jié)果準確可靠，可直接用于公安基層辦案，此方法可作為法庭科學實驗室中分析檢驗麻醉藥物的一種簡單而快速的方法。