朱 鋒 尹進(jìn)強(qiáng) 楊 玲

泰山醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山東 泰安 271000

Napsin A屬于天門冬氨酸蛋白酶家族，參與Ⅱ型肺泡細(xì)胞的表面活性B蛋白的產(chǎn)生和成熟過程，也可以作為溶酶體蛋白酶參與腎臟蛋白質(zhì)的代謝過程[1-3]。Napsin A不僅表達(dá)于肺泡上皮細(xì)胞和腎臟近曲小管的上皮細(xì)胞[4]，且在大多數(shù)肺腺癌和部分腎細(xì)胞癌中均陽性表達(dá)[5]。因此，Napsin A被認(rèn)為是肺腺癌的特異性和敏感性的分子標(biāo)記，常常用于原發(fā)性肺腺癌的鑒別診斷。隨著對(duì)Napsin A的研究深入，一些研究發(fā)現(xiàn)在卵巢透明細(xì)胞癌和甲狀腺癌組織中也存在一定程度的表達(dá)[6-7]。但目前鮮見Napsin A在淋巴組織中的表達(dá)的相關(guān)報(bào)道。為探討Napsin A在淋巴瘤中的表達(dá)情況，我們采用免疫組織化學(xué)的方法檢測了Napsin A在淋巴組織和淋巴瘤中的表達(dá)，并進(jìn)一步探討其與臨床特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1臨床資料

收集2010年至今在我院確診為淋巴瘤的210例組織標(biāo)本和30例淋巴組織反應(yīng)性增生的組織標(biāo)本。兩位病理學(xué)家根據(jù)最新的WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病理診斷[8]。淋巴瘤的石蠟標(biāo)本包括：彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤(Diffused large B cell lymphoma，DLBCL)50例，間變性大細(xì)胞淋巴瘤(anaplastic large cell lymphoma，ALCL)60例，霍奇金淋巴瘤(Hodgkin lymphoma，HL)30例，外周T細(xì)胞淋巴瘤(Peripheral T-cell lymphoma，PTCL) 60例，其他成熟B細(xì)胞類型的淋巴瘤10例。其中ALK陽性的ALCL40例，ALK陰性的ALCL20例。收集患者資料包括：年齡、性別、血清LDH、病理類型、臨床癥狀、影像學(xué)資料、療效預(yù)后等。

1.2免疫組化

對(duì)福爾馬林固定后石蠟包埋的各種腫瘤樣本和反應(yīng)性淋巴樣組織樣本，進(jìn)行4um切片，應(yīng)用免疫組織化學(xué)S-P法染色。通過Leica BOND-MAX自動(dòng)免疫染色器對(duì)Napsin A和ALK抗體進(jìn)行免疫組化染色(IHC)。小鼠抗人Napsin A單克隆抗體和ALK單克隆抗體均購自北京中杉金橋生物有限公司，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，以肺組織作為Napsin A染色的陽性對(duì)照。

1.3結(jié)果判斷

染色切片高倍視野下(×400倍)隨機(jī)選取5個(gè)視野，每個(gè)視野隨機(jī)觀察100個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽性細(xì)胞率的平均值，表達(dá)Napsin A的淋巴瘤細(xì)胞在每個(gè)樣本中的比例是兩個(gè)病理學(xué)家評(píng)估的一半。Napsin A胞漿染色強(qiáng)度分類為以下3類：0，1%～30%，31%～66%和67%～100%，并就病例差異達(dá)成共識(shí)[9]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。為了評(píng)估免疫組織化學(xué)陽性率和臨床特征關(guān)系變量的區(qū)別，應(yīng)用Pearson’s卡方檢驗(yàn)或Fisher’s exact test。以P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1Napsin A在ALCL中的表達(dá)情況

根據(jù)2016版WHO淋巴瘤分類和染色結(jié)果，Napsin A在間變性大細(xì)胞淋巴瘤的胞漿中呈點(diǎn)狀分布。而在反應(yīng)性淋巴組織中Napsin A陰性或僅在少量組織細(xì)胞中表達(dá)，這一現(xiàn)象與文獻(xiàn)描述一致[10]。ALCL的Napsin A表達(dá)率為(20.0%，12/60)，其中ALK陽性的ALCL(25.0%，10/40例)，其表達(dá)的比率明顯高于ALK陰性的ALCL(10.0%，2/20；P=0.01)。

2.2Napsin A在DLBCL中的表達(dá)情況

我們的研究發(fā)現(xiàn)，Napsin A也在DLBCL的腫瘤細(xì)胞的胞漿中也呈現(xiàn)點(diǎn)狀分布，陽性細(xì)胞表達(dá)比例為14.0%(7/50)。但其他成熟B細(xì)胞類型的淋巴瘤中不能檢測到Napsin A。

2.3Napsin A在HL及外周T細(xì)胞淋巴瘤中的表達(dá)。

我們的研究發(fā)現(xiàn)，除了非霍奇金淋巴瘤，Napsin A在霍奇金淋巴瘤中也有表達(dá)，表達(dá)比例為10.0%(3/30)。腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)陽性表達(dá)。Napsin A在外周T細(xì)胞淋巴瘤中也有少量的病例呈陽性表達(dá)，表達(dá)率為6.6%(4/60)。

2.4ALCL及DLBCLs表達(dá)Napsin A的臨床特征和預(yù)后提示。

表1 Napsin A表達(dá)的ALCL的臨床特征

Napsin A表達(dá)的ALCL的臨床特征總結(jié)。Napsin A的表達(dá)與患者年齡、性別、血清LDH均無關(guān)(P>0.05)。在全身的ALCL中Napsin A的表達(dá)與較高的國際預(yù)后指數(shù)有關(guān)，有Napsin A表達(dá)的ALCL及DLBCL患者傾向預(yù)后較差。同時(shí)，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)在LDH血清升高組患者的Napsin A的表達(dá)較LDH正常組高；R-CHOP方案治療后未能緩解組(PR、SD和PD)的表達(dá)較完全緩解組高。而在DLBCL，PTCL患者中臨床病理特征與Napsin A表達(dá)無明顯相關(guān)性。

3 討 論

目前研究證實(shí)，Napsin A在肺及腎來源的癌的病理診斷中有一定的特異性和敏感性，現(xiàn)在用于兩種腫瘤的臨床病理診斷和鑒別診斷。近年來，在卵巢癌、甲狀腺癌、子宮內(nèi)膜癌等其他腫瘤中相繼被發(fā)現(xiàn)有異常高表達(dá)[11,12]。而其在淋巴瘤中的表達(dá)缺乏研究。我們的研究發(fā)現(xiàn)，在反應(yīng)性淋巴樣組織，只有少數(shù)組織細(xì)胞是Napsin A陽性或陰性表達(dá)，而在不同病理類型的淋巴瘤中有不同程度的表達(dá)。ALK陽性的ALCL(25.0%，10/40例)表達(dá)Napsin A的比率明顯高于ALK陰性的ALCL(10.0%，2/20；P=0.01)。Napsin A也在彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤表達(dá)14.0%(7/50)，霍奇金淋巴瘤表達(dá)10.0%(3/30)，外周T細(xì)胞淋巴瘤表達(dá)6.6%(4/60)。這一結(jié)果提示，Napsin A的特異性有一定的局限性，在肺和淋巴瘤的診斷和鑒別診斷中需要結(jié)合其他組織學(xué)特點(diǎn)綜合考慮。Napsin A在一些淋巴瘤細(xì)胞的表達(dá)可能是異常的。超過10%的包括ALK陽性ALCL，HL和DLBCL在內(nèi)的淋巴瘤亞型表現(xiàn)出Napsin A表達(dá)。這些腫瘤有各種細(xì)胞來源。ALK陽性的ALCL和HL共有一些形態(tài)學(xué)特征，包括細(xì)胞大、胞漿豐富和退行性的特征[13]。

我們檢測的結(jié)果與最近的報(bào)道比較一致，此外還提示在濾泡性淋巴瘤，漿細(xì)胞瘤中也有很少比例的表達(dá)，本研究結(jié)果ALCL的表達(dá)率高于文獻(xiàn)，可能與樣本量有關(guān)，在其他類型淋巴瘤中的表達(dá)更需要大樣本的進(jìn)一步深入研究。

目前認(rèn)為Napsin A的高表達(dá)與腫瘤分化好和較好預(yù)后有關(guān)，而低表達(dá)被認(rèn)為是手術(shù)切除肺腺癌的一個(gè)獨(dú)立的預(yù)后不良的因素。我們的研究顯示，Napsin A表達(dá)高的患者常表現(xiàn)為血清LDH升高，并且Napsin A高表達(dá)的ALCL患者經(jīng)典化療后完全緩解率低于Napsin A陰性組，并且傾向預(yù)后較差[14]。由于Napsin A在淋巴瘤中表達(dá)率與患者的預(yù)后有關(guān)，因此，其在淋巴瘤中表達(dá)的生理及病理意義需要更深一步的研究。

考慮到Napsin A在腎小管蛋白分解代謝及肺表面活性蛋白突變中起潛在性的作用，Napsin A可能參與導(dǎo)致ALK陽性ALCL和HL共有形態(tài)學(xué)特征的蛋白質(zhì)的分解代謝。在所有淋巴瘤中ALK陽性ALCL出現(xiàn)最頻繁，且表達(dá)最強(qiáng)[12]。然而，目前，淋巴瘤細(xì)胞亞型異常Napsin A表達(dá)的機(jī)制以及淋巴瘤中Napsin A的作用仍不清楚。

總之，我們的研究證明，Napsin A在淋巴瘤各亞型中存在差異表達(dá)，尤其是在ALK陽性ALCL、HL和DLBCL中；因此，這些淋巴瘤應(yīng)被納入Napsin A陽性腫瘤的鑒別診斷中。Napsin A在淋巴瘤的生物學(xué)和功能學(xué)之間的關(guān)系尚需要進(jìn)一步研究。