王瑞 許曉義 張波 宋高臣

【摘 要】 目的：從細(xì)胞生物學(xué)角度觀察羅勒多糖體外對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞增殖的抑制作用。方法：1）Hela細(xì)胞培養(yǎng)及傳代。2）Hela細(xì)胞分組及給藥處理：陰性對(duì)照組（不加任何藥物）、BPS低劑量組（25μg/mL）、BPS中劑量組（50μg/mL）、BPS高劑量組（100μg/mL）、陽(yáng)性對(duì)照組（紫杉醇50μg/mL）。3）MTT法檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖情況;流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡。結(jié)果：陰性對(duì)照組、羅勒多糖25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL劑量及陽(yáng)性對(duì)照組（紫杉醇50μg/mL）作用Hela細(xì)胞24h后的細(xì)胞抑制率分別為0.3%、18.1%、29.8%、85.2%、90.1%，羅勒多糖對(duì)Hela細(xì)胞增殖的抑制作用與藥物濃度正相關(guān)（P<0.01）;羅勒多糖25μg/mL劑量作用Hela細(xì)胞24h、48h、72h后，凋亡率分別為 2.8%、9%、29%，細(xì)胞凋亡率與藥物作用時(shí)間正相關(guān)（P<0.01）。結(jié)論：1）羅勒多糖體外對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞增殖生長(zhǎng)具有良好的抑制作用。2）羅勒多糖體外對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞增殖作用和其濃度密切相關(guān)。

【關(guān)鍵詞】 羅勒多糖;Hela細(xì)胞;細(xì)胞凋亡;流式細(xì)胞術(shù)

羅勒多糖（Basil polysaccharide，BPS）系從中國(guó)傳統(tǒng)化淤名方中的一味具有抗血小板作用的藥物全草植物羅勒中經(jīng)分離、提取得到的藥物有效成分[1]。雖然有研究表明羅勒多糖能抑制一些人腫瘤細(xì)胞增殖[2]、粘附[3]、遷移[4]并誘導(dǎo)其凋亡[5]，但關(guān)于其對(duì)于宮頸癌的治療作用研究較少，偶有報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)以宮頸癌Hela細(xì)胞為研究對(duì)象，通過MTT檢測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞技術(shù)來探討B(tài)PS對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞相關(guān)生物學(xué)行為的影響。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

紫杉醇購(gòu)自佳木斯市醫(yī)藥公司;羅勒多糖提取物由佳木斯醫(yī)學(xué)院天然藥物實(shí)驗(yàn)室自提;RPMI 1640培養(yǎng)基（批號(hào)：8115400）購(gòu)自美國(guó)Gibco公司;新生牛血清購(gòu)自杭州四季青工程材料有限公司。人宮頸癌Hela細(xì)胞由佳木斯醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)人宮頸癌Hela細(xì)胞 按照常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)方法培養(yǎng)人宮頸癌Hela細(xì)胞。

1.2.2 藥物配制 羅勒多糖溶液：取1μL 10mg/mL羅勒多糖儲(chǔ)備液于EP管中，加入9μL DMSO 溶液稀釋至10μL，使之濃度為1mg/mL，再將稀釋后的藥物用2%的FBS-DMEM或RPMI 1640培養(yǎng)液稀釋，使藥物終濃度分別為25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL。另取紫杉醇母液，DMSO溶解稀釋成50μg/mL濃度。

1.2.3 MTT法檢測(cè)羅勒多糖對(duì)宮頸癌Hela細(xì)胞的抑制作用 取生長(zhǎng)狀態(tài)為對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的Hela細(xì)胞，胰蛋白酶消化，1000rpm離心5min，混勻制成懸液，調(diào)整濃度為5×104mL

3 討論

羅勒為唇形科羅勒屬植物（Ocimum basilicum L.var.pilosum（Willd.） Benth），又名九層塔、氣香草等。性溫昧辛。有疏風(fēng)行氣，化濕消食、活血、解毒之功能。用于外感頭痛、食脹氣滯、脘痛、泄瀉、月經(jīng)不調(diào)、跌打損傷、蛇蟲咬傷、皮膚濕瘡、癮疹痛癢等癥的治療[6]，羅勒多糖是其有效成分。

本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果顯示，不同劑量羅勒多糖作用人宮頸癌Hela細(xì)胞24h后，相對(duì)陰性對(duì)照組，羅勒多糖各劑量組及陽(yáng)性對(duì)照組（紫杉醇50μg/mL）的細(xì)胞增殖抑制率和凋亡率都升高，BPS干預(yù)Hela細(xì)胞后，24h、48h、72h各時(shí)間點(diǎn)用藥組細(xì)胞均出現(xiàn)明顯的凋亡，并且凋亡率隨作用時(shí)間延長(zhǎng)而相應(yīng)增加。所以羅勒多糖體外對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞增殖生長(zhǎng)具有良好的抑制作用而且增殖作用和其濃度密切相關(guān)。

參考文獻(xiàn)：

[1] Feng B，Zhu Y，Su Z，et al.Basil polysaccharide attenuates hepatocellular carcinoma metastasis in rat by suppressing H3K9me2 histone methylation under hepatic artery ligation-induced hypoxia[J].International Journal of Biological Macromolecules，2017，107（Pt B）：S0141813017326983.

[2] 李路，李蘭，肖麗，等.羅勒多糖對(duì)紫杉醇抑制肺腺癌A549細(xì)胞增殖作用的影響[J].山東中醫(yī)雜志，2016，35（06）：554-557.

[3] 羅勒多糖調(diào)節(jié)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化抑制肝癌侵襲轉(zhuǎn)移的機(jī)制研究[D].廣州中醫(yī)藥大學(xué)，2015.

[4] 朱慶均，閆丹丹，張成華，等.羅勒多糖抑制TGF-β誘導(dǎo)的A549細(xì)胞侵襲運(yùn)動(dòng)能力研究[J].中華腫瘤防治雜志，2017，24（13）：875-880.

[5] 朱慶均，連松剛，李蘭，等.羅勒多糖對(duì)HLECs中VEGFR-2/3表達(dá)的影響[J].中藥新藥與臨床藥理，2016，（03）：342-346.

[6] Lv J，Shao Q，Wang H，et al.Effects and mechanisms of curcumin and basil polysaccharide on the invasion of SKOV3 cells and dendritic cells[J].Molecular Medicine Reports，2013，08（05）：1580-1586.