涂艷娟 曾冬鈺

蘇木素一伊紅（Hematoxylin-Eosin，HE）染色技術(shù)、冰凍的切片是臨床上常用的診斷方法，能實(shí)現(xiàn)腫瘤的診斷、鑒別，有助于指導(dǎo)臨床診療[1-2]。因此，切片質(zhì)量的好壞，能直接的關(guān)系到可否及時(shí)、準(zhǔn)確對(duì)其腫瘤能夠做出鑒別及其診斷，能夠指導(dǎo)對(duì)其手術(shù)治療的方法[3-4]。按目前狀態(tài)，對(duì)冰凍的染色切片所存在的結(jié)構(gòu)組織被破壞、裂隙冰晶比較多、其核分裂現(xiàn)像、染色差對(duì)比等的缺點(diǎn)，HE的染色屬于最根本組織學(xué)病理的染色，其染細(xì)胞核的蘇木素屬于HE的過(guò)程染色中的主要，蘇木素的染色成功與否，對(duì)細(xì)胞核著色深淺有及其重要的作用[5-6]。其染液方法的配制有不同種類(lèi)，最普遍的屬于Harris的蘇木素和Gill的蘇木素，其染色原理相同。因此，現(xiàn)采用隨機(jī)對(duì)照研究，探討切片預(yù)染在蘇木素質(zhì)量監(jiān)測(cè)效果，報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

2015年4月—2017年12月相對(duì)正常的宮頸管組織及腸粘膜組織、德國(guó)LeicaST5020+CV5030全自動(dòng)染色封片一體機(jī)、切片機(jī)、烤片機(jī)。

1.2 試劑

改良的Gill蘇木素、0.25%醇溶性伊紅、二甲苯、70%乙醇、85%乙醇、95%乙醇及無(wú)水酒精、1%鹽酸酒精、中性樹(shù)膠、Harris蘇木素液。

1.3 方法

1.3.1 將染色機(jī)常用染色程序及所需試劑輸入染色機(jī)，并加入相應(yīng)的試劑，待用。

1.3.2 上述兩種組織，切片后撈在同一張載玻片上，在60℃～65℃的烤片機(jī)上烤20～30 min，這樣的組織切片準(zhǔn)備20張，每天染色機(jī)開(kāi)機(jī)后放一張進(jìn)行試染。

1.3.3 具體染色步驟如下。（1）二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、每次5 min。（2）水化：無(wú)水酒精Ⅰ、Ⅱ，每次1 min、95%乙醇1 min、80%乙醇1 min、70%乙醇1 min、流水沖洗1 min。（3）染色：改良的Gill蘇木素、Harris的蘇木素液分別10 min、水洗2 min、1%鹽酸酒精分化1 s、自來(lái)水返藍(lán)10 min、伊紅2 s。（4）脫水透明：70%乙醇1 min、85乙醇1 min、95乙醇1 min、無(wú)水酒精Ⅰ、Ⅱ，每次1 min、二甲苯Ⅰ、Ⅱ、每次1 min。（5）中性樹(shù)膠封固[7]。

2 結(jié)果

經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期觀察發(fā)現(xiàn)隨著染色天數(shù)的增加，在不改變?nèi)旧珪r(shí)間的前提下，染色機(jī)內(nèi)的蘇木素從更換后到連續(xù)使用15天左右，期間大概染色5 000張切片，蘇木素染色力下降，鏡下觀察預(yù)染的組織切片其細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)蘇木素色素沉著，且隨著蘇木素的繼續(xù)使用、胞漿內(nèi)的色素越來(lái)越多，甚至難以分辨細(xì)胞之間的界限，看不清核的輪廓，染色結(jié)果如圖1和圖2。

圖1 新蘇木素染色結(jié)果

圖2 使用15天后的蘇木素

3 討論

蘇木素染色的好壞決定著細(xì)胞核的著色深淺，也決定了一張切片的質(zhì)量。染色前我們可以通過(guò)以下幾個(gè)方面對(duì)蘇木素的質(zhì)量進(jìn)行初步的判斷[8]。（1）擴(kuò)散程度：取一滴蘇木素液滴入一杯自來(lái)水中：沉在水底不散開(kāi)呈紅色為未成熟；在水中慢慢散開(kāi)呈絮狀，顏色由紫紅色漸變?yōu)樗{(lán)色為成熟；很快散開(kāi)呈深藍(lán)色為過(guò)熟。（2）氧化膜：蘇木素在使用過(guò)程中隨時(shí)間的推移會(huì)在液體表面出現(xiàn)一層氧化膜，可以用紙張刮除繼續(xù)使用，但是氧化膜出現(xiàn)的時(shí)間間隔會(huì)越來(lái)越短，意味著蘇木素越來(lái)越成熟[9]。（3）pH：顏色隨pH值變化：酸性—紅色，中性—紫色。堿性—藍(lán)色。細(xì)胞核的等電點(diǎn)pH為3.3～3.6，當(dāng)染液的pH＞細(xì)胞核的等電點(diǎn)，細(xì)胞核帶負(fù)電，易與帶正電的堿性染料蘇木素結(jié)合。

對(duì)于高血壓較長(zhǎng)癥狀的老年的患者，其全身動(dòng)脈的系統(tǒng)病變，尤其小動(dòng)脈的改變，及其顯著，其舒張壓極難進(jìn)行降低，降壓藥劑量太大，其血壓的下降太多，對(duì)組織的血液灌注及其不利，胰激的酶肽釋放屬于水解酶蛋白，廣泛在哺乳類(lèi)的組織動(dòng)物中出現(xiàn)，其中含量最高屬于胰腺[10]。在其體內(nèi)，對(duì)其激肽原中所釋放出的激肽的作用，可以擴(kuò)張平滑肌血管、毛細(xì)血管，改善血液循環(huán)，它還能將纖溶酶原轉(zhuǎn)變?yōu)槔w溶酶，能進(jìn)一步的把不溶性纖維的水解蛋白轉(zhuǎn)成可溶性的小肽，對(duì)血栓進(jìn)行溶解。

Harris蘇木素液屬于全氧化的蘇木素，其蘇木素的用量太大，被經(jīng)過(guò)氧化后，轉(zhuǎn)成有染色能力的蘇木紅比較多，在進(jìn)行染色后，應(yīng)對(duì)其進(jìn)行乙醇鹽酸的分化，從而退掉不應(yīng)著色和過(guò)染的部分，是退行性的染色。GiU蘇木素屬于半氧化的蘇木素，對(duì)其蘇木素的用量比較小，被進(jìn)行氧化所形成的蘇木紅比較少，由此在比較短的時(shí)間里，不會(huì)出現(xiàn)過(guò)染色情況，也就不會(huì)有乙醇鹽酸的分化。Harris蘇木素及其Gill蘇木素進(jìn)行配制的過(guò)程中，運(yùn)用的媒染劑普遍屬于硫酸鋁和鋁鉀硫酸，在其中有主要作用的都屬于鋁離子。太多的媒染劑對(duì)讓其溶液呈現(xiàn)膠狀，并很快失效，不會(huì)對(duì)染色的能力進(jìn)行增強(qiáng)，不會(huì)延長(zhǎng)染色劑使用的時(shí)間。Gill蘇木素其配制的過(guò)程中所運(yùn)用的氧化劑屬于碘酸鈉，其蘇木素所運(yùn)用的氧化劑屬于氧化汞。其蘇木素只有將其轉(zhuǎn)變成蘇木紅后，才會(huì)對(duì)其發(fā)揮出染料作用，在此過(guò)程里氧化屬于關(guān)鍵部分，氧化的不充分對(duì)其染色的能力極差，過(guò)度的氧化會(huì)讓染液的表面呈現(xiàn)出氧化膜，會(huì)引起切片的污染。Harris蘇木素運(yùn)用加溫的氧化，雖然能夠加速其形成蘇木紅，但極易有金屬樣氧化膜的出現(xiàn)，會(huì)浮在容器壁上及其液面上[11]。碘酸鈉的氧化劑屬于水溶性的氧化劑，在同蘇木索的氧化中所出現(xiàn)均勻的反應(yīng)，其氧化的還原作用屬于持續(xù)性的增強(qiáng)，沒(méi)有形成氧化膜，由此對(duì)于切片的污染同樣也減少了，其費(fèi)用相比運(yùn)用氧化汞的成本低，沒(méi)有毒性，還能對(duì)環(huán)境的污染進(jìn)行減少。Harris的蘇木素屬于漸退性的染液的一種，在進(jìn)行配制后的運(yùn)用，所出現(xiàn)的著色力較強(qiáng)。GiU蘇木素在最佳的染色力中，屬于染色的中期，在對(duì)其掌握的染色時(shí)間會(huì)有所不同[12]。

全自動(dòng)染色封片機(jī)以其操作量大、穩(wěn)定性好、效率高等優(yōu)點(diǎn)已被越來(lái)越多的病理科接受并使用，逐漸替代手工操作，但是一旦染色液出現(xiàn)問(wèn)題，經(jīng)常導(dǎo)致的也是成批的切片需要重新制片，我們?cè)谑褂萌旧珯C(jī)前除了按上述方法對(duì)染色液的質(zhì)量進(jìn)行初步的判斷外，還可以通過(guò)織預(yù)染的方式來(lái)進(jìn)一步保障染色質(zhì)量，特制的組織切片選取相對(duì)正常的腸粘膜及宮頸管組織，前者含杯狀細(xì)胞分泌粘蛋白MUC2，后者含宮頸管腺體分泌粘蛋白MUC5AC，這兩種粘蛋白都屬于凝膠型粘蛋白，容易吸附雜質(zhì)。后續(xù)長(zhǎng)時(shí)間的染色觀察發(fā)現(xiàn)當(dāng)預(yù)染切片胞漿內(nèi)出現(xiàn)蘇木素色素沉著時(shí)，當(dāng)天機(jī)染的其他組織染色質(zhì)量也較差。因此我們便可以把出現(xiàn)色素沉著作為發(fā)現(xiàn)蘇木素質(zhì)量問(wèn)題的依據(jù)，及時(shí)更換蘇木素以確保后續(xù)工作的正常進(jìn)行。預(yù)染不僅意味著對(duì)試劑是否有效的檢測(cè)，同時(shí)也對(duì)染色機(jī)的程序是否正常運(yùn)行進(jìn)行了測(cè)試。每天將預(yù)染出來(lái)的切片交由醫(yī)生鏡下觀察，確認(rèn)無(wú)染色質(zhì)量問(wèn)題后即可進(jìn)行日常工作的染色，通過(guò)組織切片的預(yù)染，我科的HE染色質(zhì)量進(jìn)一步得以提高。

綜上所述，通過(guò)組織切片預(yù)染能夠?qū)μK木素的質(zhì)量起著有效的監(jiān)測(cè)作用，保障HE染色質(zhì)量。