張彬，婁紅，劉松，劉志

保定市第二醫(yī)院普通外科，河北 保定0710000

胃癌是最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，具有較高的發(fā)病率，早期胃癌患者多無特異性臨床癥狀，早期診斷率低，當(dāng)患者出現(xiàn)癥狀或確診時已屬于進(jìn)展期或晚期。胃癌患者的預(yù)后除了與治療方式有關(guān)外，還與胃癌的臨床分期、病理類型以及生物學(xué)行為等有關(guān)。因此，尋找簡便易行的胃癌相關(guān)性檢測指標(biāo)，并探討其在胃癌早期診斷和預(yù)后判斷中的應(yīng)用價值是目前胃癌研究領(lǐng)域中的重要課題[1]。有研究表明，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子在腫瘤的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要的作用，為新生血管的形成提供基質(zhì)支架；趨化因子主要分布于細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中，能直接刺激新生血管的形成；血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子和趨化因子不僅對細(xì)胞的各項(xiàng)生命活動起著重要的調(diào)控作用，而且對腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移具有協(xié)同作用。趨化因子受體 7（C-X-C chemokine receptor 7，CXCR7）是趨化因子受體家族中的一員[2]。有研究發(fā)現(xiàn)，CXCR7和趨化因子受體4（C-X-C chemokine receptor 4，CXCR4）均是趨化因子配體 12（C-X-C chemokine ligand 12，CXCL12）[即基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（stromal cell-derived factor-1，SDF-1）]的受體，而SDF-1已被證實(shí)在胃癌、卵巢癌和膀胱癌等惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中均發(fā)揮著重要的作用[3-5]。本研究比較了104例胃癌患者胃癌組織、癌旁黏膜組織和50例胃部良性病變患者正常胃黏膜組織中CXCR7的表達(dá)情況，并分析了CXCR7的陽性表達(dá)與胃癌患者臨床特征的關(guān)系，旨在為胃癌的臨床診治開拓新的思路，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月至2017年12月保定市第二醫(yī)院收治的胃癌患者的胃癌組織標(biāo)本。胃癌患者的納入標(biāo)準(zhǔn)：①均進(jìn)行了胃癌根治性切除術(shù)；②均經(jīng)組織病理學(xué)檢查證實(shí)；③未接受過任何與腫瘤相關(guān)的治療；④臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤的患者。根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入104例胃癌患者，其中，男66例，女38例；51歲以下7例，51～69歲83例，69歲以上14例。同時選取上述104例胃癌患者的癌旁黏膜組織（距腫瘤邊緣≥5 cm）標(biāo)本，標(biāo)本均經(jīng)病理檢查證實(shí)無腫瘤細(xì)胞浸潤。另選取本院同期收治的行胃次全切除術(shù)的胃部良性病變患者的正常胃黏膜組織標(biāo)本。胃部良性病變患者的納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理診斷及胃鏡檢查確診患有胃炎、胃潰湯、良性腫瘤或息肉等；②組織病理學(xué)檢查證實(shí)未產(chǎn)生惡性病變；③臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并自身免疫性疾病；②存在嚴(yán)重的心、腦、腎、肝等功能障礙；③合并精神類疾病。根據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入胃部良性病變患者50例，其中，男32例，女18例；51歲以下4例，51～69歲40例，69歲以上6例。兩組患者的性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 免疫組織化學(xué)染色方法

采用免疫組織化學(xué)法和免疫熒光雙染法檢測胃癌組織、癌旁黏膜組織和正常胃黏膜組織中CXCR7的表達(dá)情況。具體方法：所有組織標(biāo)本以10%中性甲醛溶液固定，經(jīng)常規(guī)石蠟包埋后作連續(xù)性病理切片，厚度約為4 μm；將切片脫蠟至水，以微波枸櫞酸鹽進(jìn)行抗原修復(fù)，行二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）室溫顯色，一抗和二抗的稀釋濃度均為1∶200，蘇木素復(fù)染，脫水、透明、封片；磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）洗滌。檢測試劑為兔抗人CXCR7多克隆抗體（購自美國Abnova公司），嚴(yán)格按照說明書的步驟進(jìn)行操作。

1.3 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)及觀察指標(biāo)

以細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃色或者棕黃色顆粒為陽性染色，綜合陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞的比例和染色強(qiáng)度進(jìn)行半定量判定。參照相關(guān)文獻(xiàn)[6]對染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞的比例進(jìn)行評分。染色強(qiáng)度判定標(biāo)準(zhǔn)：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞的比例判定標(biāo)準(zhǔn)：選取5個高倍視野（×400）于顯微鏡下進(jìn)行觀察，計(jì)算陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞的比例，陽性細(xì)胞所占比例≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。兩項(xiàng)評分相加，最終結(jié)果0分為陰性（-），1～3分為弱陽性（+），4～5分為中度陽性（++），6～7分為強(qiáng)陽性（+++）。本研究將弱陽性（+）、中度陽性（++）和強(qiáng)陽性（+++）歸為陽性表達(dá)，將陰性（-）歸為陰性表達(dá)。比較胃癌組織、癌旁黏膜組織、正常胃黏膜組織中CXCR7的陽性表達(dá)率，分析CXCR7表達(dá)與胃癌患者臨床特征的關(guān)系，以及CXCR7表達(dá)與胃癌患者臨床特征的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 20.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CXCR 7在胃癌組織和正常胃黏膜組織中的表達(dá)情況

胃癌組織中CXCR7的陽性表達(dá)率為94.23%，明顯高于正常胃黏膜組織的2.00%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=125.106，P＜0.01）；胃癌組織中CXCR7中度陽性（++）和強(qiáng)陽性（+++）的比例較高。（表1）

表1 胃癌組織和正常胃黏膜組織中CXCR 7的表達(dá)情況[ n（%）]

2.2 CXCR 7在胃癌組織及癌旁黏膜組織中的陽性表達(dá)情況

CXCR7在胃癌組織中的陽性表達(dá)率為94.23%（98/104），明顯高于癌旁黏膜組織中的37.50%（39/104），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=74.437，P＜0.01）。

2.3 不同臨床特征胃癌患者胃癌組織中CXCR 7的表達(dá)情況

腫瘤直徑≥5 cm、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化、侵及漿膜的胃癌患者胃癌組織中CXCR7的陽性表達(dá)率均高于腫瘤直徑＜5 cm、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、中高分化、未侵及漿膜的胃癌患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征胃癌患者胃癌組織中CXCR 7表達(dá)情況的比較

2.4 CXCR 7表達(dá)與胃癌患者臨床特征的相關(guān)性

經(jīng)Spearman秩相關(guān)分析，結(jié)果顯示，胃癌患者的腫瘤直徑、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、浸潤深度均與胃癌組織中CXCR7的表達(dá)呈明顯正相關(guān)（r=0.538、0.627、0.569、0.597，P＜0.01），分化程度與胃癌組織中CXCR7的表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)（r=-0.513，P＜0.01）。

3 討論

胃癌多發(fā)于胃竇部、胃大彎和胃小彎，絕大多數(shù)胃癌屬于胃腺癌，患者的發(fā)病年齡大多在50歲以上。近年來，胃癌的發(fā)病率逐漸下降，且呈現(xiàn)年輕化的趨勢；在性別方面，中國男性胃癌的發(fā)病比例高于女性[7]。胃癌的發(fā)病原因至今尚未完全清楚，其癥狀與胃炎、胃潰瘍等慢性胃疾病的癥狀相似，目前認(rèn)為胃癌的發(fā)生可能與患者的飲食結(jié)構(gòu)、工作壓力、幽門螺桿菌感染、環(huán)境和遺傳等因素有關(guān)[8]。有研究表明，幽門螺桿菌是與胃癌相關(guān)的病原菌，幽門螺桿菌感染的黏膜上皮組織內(nèi)CXC趨化因子表達(dá)增高，通過過度募集白細(xì)胞而產(chǎn)生胃黏膜慢性炎癥反應(yīng)，增加病變上皮細(xì)胞癌變的概率，演變成為胃癌，提示趨化因子及其受體也可能參與了胃部腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移等過程[9]。

趨化因子是一類能夠趨化細(xì)胞移動的小分子分泌蛋白，由70～100個氨基酸組成。目前已發(fā)現(xiàn)了多種趨化因子。所有趨化因子蛋白質(zhì)序列中均有4個保守的半胱氨酸，可分為CXC、CC、CX3C和C四個亞型，其對應(yīng)的受體有CXCR、CCR、CX3CR和CR。CXCL12屬于CXC型趨化因子。有研究發(fā)現(xiàn)，CXCL12廣泛表達(dá)于多種腫瘤組織和細(xì)胞中，CXCL12的唯一受體是CXCR4，既往關(guān)于CXCL12/CXCR4反應(yīng)軸的研究較多，CXCL12與CXCR4結(jié)合能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移[10]。也有研究發(fā)現(xiàn)，CXCR7也是CXCL12的受體，且與CXCL12具有較高的親和力[10]，由此推斷，作為趨化因子與其特異性受體結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)的CXCR7，同樣可能會促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲、遷移、黏附以及腫瘤新生血管的生成[11]。有研究發(fā)現(xiàn)，CXCR7與肝癌、乳腺癌、子宮癌、胰腺癌等惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[12-13]。CXCR7主要表達(dá)于細(xì)胞的細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中。本研究中，胃癌組織中CXCR7的陽性表達(dá)率明顯高于正常胃黏膜組織，且CXCR7在胃癌組織及其癌旁黏膜組織中均有所表達(dá)，胃癌組織中CXCR7的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁黏膜組織（P＜0.01），表明CXCR7的表達(dá)水平升高可能對胃癌的發(fā)生發(fā)展具有促進(jìn)作用[14]。

CXCR7與腫瘤微環(huán)境有關(guān)。惡性腫瘤的迅速生長需要一定的宿主微環(huán)境作誘導(dǎo)，腫瘤細(xì)胞的增殖需要產(chǎn)生和分泌細(xì)胞因子，從而刺激血管和間質(zhì)增生[15]。CXCR7屬于G蛋白偶聯(lián)受體超家族，由362個氨基酸排列而成，胃癌組織中CXCR7的表達(dá)水平較高，極大地促進(jìn)了腫瘤微環(huán)境中間質(zhì)纖維母細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞的生成，營造了腫瘤生長和轉(zhuǎn)移的微環(huán)境[16]。本研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤直徑≥5 cm、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、低分化、侵及漿膜的胃癌患者胃癌組織中CXCR7的陽性表達(dá)率均高于腫瘤直徑＜5 cm、TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、中高分化、未侵及漿膜的胃癌患者（P＜0.05），表明腫瘤直徑、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、分化程度和浸潤深度可能與CXCR7的表達(dá)有關(guān)。關(guān)于這一結(jié)論的相關(guān)機(jī)制雖仍有待進(jìn)一步探索，但CXCR7在胃癌發(fā)生、發(fā)展中的潛在作用已得到廣泛認(rèn)可，CXCR7表達(dá)情況的檢測有助于對胃癌患者的病情與預(yù)后進(jìn)行判斷[17-18]?；诖耍醒芯空J(rèn)為通過阻斷CXCL12/CXCR7信號通路，或?qū)σ恍┡c腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)的靶基因或因子[如基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）、鈣粘蛋白、纖維連接蛋白等]的表達(dá)及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路進(jìn)行調(diào)控，從而抑制腫瘤細(xì)胞生長的治療方法值得探究[4]。

綜上所述，CXCR7在胃癌組織中的表達(dá)水平較高，且其表達(dá)水平與胃癌患者的腫瘤直徑、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、分化程度和浸潤深度有關(guān)。CXCR7在胃癌組織中表達(dá)的具體機(jī)制仍有待進(jìn)一步探索。CXCR7有望成為胃癌早期診斷和病情評估的指標(biāo)之一，且有可能為胃癌的治療提供新的策略。