李君 王倩青 張曉蘭

(1新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院婦科婦瘤科，河南 新鄉(xiāng) 453000；2青海大學(xué)附屬醫(yī)院腫瘤婦科)

卵巢癌是臨床中十分常見的惡性婦科腫瘤，其臨床發(fā)病率及病死率居高不下，有研究指出我國卵巢癌發(fā)病率及死亡率呈明顯的逐年增高趨勢，對婦女的健康安全造成嚴重威脅〔1〕?，F(xiàn)階段臨床中對卵巢癌患者進行治療的標準策略為鉑類藥物聯(lián)合手術(shù)治療〔2〕。卵巢癌的治療及診斷技術(shù)不斷提高，晚期卵巢癌生存率無明顯改善〔3〕。PURA是與RNA或DNA具有高度親和力的蛋白，在腫瘤的發(fā)生及發(fā)展過程中PURA可與E2F1、pRb等蛋白因子結(jié)合并誘發(fā)下游信號通路，是重要的潛在抑癌基因〔4〕。此外，有研究結(jié)果顯示，PURA蛋白在多種化療藥物作用下產(chǎn)生DNA損傷修復(fù)〔5〕，但PURA等位基因與卵巢癌順鉑化療療效的相關(guān)性研究仍鮮有報道，本文分析卵巢癌患者順鉑化療療效與PURA等位基因的關(guān)系。

1 資料方法

1.1一般資料 選取2010年1月至2018年1月間新鄉(xiāng)市中心醫(yī)院婦產(chǎn)科收治的經(jīng)病理檢查確診卵巢癌患者作為研究對象，所有患者采用20 mg/m2劑量順鉑(H37021362，齊魯制藥有限公司)進行治療。依照國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟TNM分期系統(tǒng)〔6〕對患者進行分期，依照巴塞羅那分級系統(tǒng)〔7〕對患者行組織病理學(xué)分析。采用QIAGEN提取全血DNA。所有患者對本研究知情，并簽署知情同意書。

1.2PURA等位基因分析 通過檢索PUBMED數(shù)據(jù)庫分析PURA等位基因(rs142688247)，并采用引物及探針序列，基因上游引物5′-GGGCGCTCAAAAGCGAGTT-3′，下游引物5′-GCCAGAGCGTCACGGAAC-3′，C等位基因探針：5′-VIC-GCATCCGCCAGACGGTCAA-3′，T等位基因探針：5′-FAM-AGCTTGGCCAGAGCGTCAC-3′。采用PCR法檢測時選用6 μl體系，其中包括40×無菌水0.125 μl，基因組DNA 1 μl，2× TaqMan 2.5 μl，依照定量PCR法檢測，其反應(yīng)程序為60 s 95℃、15 s 95℃、60 s 60℃，共45個循環(huán)，后采用序列檢測系統(tǒng)及PCR系統(tǒng)進行檢測分析，并向循環(huán)中加入非模板，10%樣品重復(fù)檢測做質(zhì)控。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS20.0軟件行χ2檢驗，繪制生存曲線評估患者生存率。

2 結(jié) 果

2.1患者臨床病理特征 全部患者中治療后3年內(nèi)復(fù)發(fā)41例，治療后3個月完全緩解148例、部分緩解34例?；颊吲R床病理特征為：年齡(64.32±10.84)歲；有吸煙史者132例；有避孕藥服用史82例；有淋巴轉(zhuǎn)移者10例；分期：Ⅰ期19例，Ⅱ期135例，Ⅲ期42例，Ⅳ期4例。復(fù)發(fā)者41例，治療反應(yīng)：完全緩解148例，部分緩解34例，穩(wěn)定10例，進展6例，無信息2例。

2.2臨床特征與基因型相關(guān)性 通過數(shù)據(jù)庫檢索分析PURA基等位基因共發(fā)現(xiàn)T型和C型，本組研究結(jié)果顯示T型基因出現(xiàn)頻率占31.25%，C型基因出現(xiàn)頻率占34.62%，基因型差異與患者病理分期差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，在治療反應(yīng)性上T型基因攜帶者對藥物反應(yīng)性顯著高于C型攜帶者(P<0.05)，見表1。

表1 臨床特征與基因型的相關(guān)性〔n(%)〕

2.3PURA基因多態(tài)型與患者總生存率 PURA T基因型患者治療總生存率明顯優(yōu)于PURA C基因型患者(P<0.05)，見圖1。

圖1 患者生存曲線

3 討 論

卵巢癌是現(xiàn)階段臨床中較為常見的惡性婦科腫瘤，一般情況下患者多無特異性臨床癥狀，因而常被患者忽視進而導(dǎo)致患者在發(fā)現(xiàn)時多以發(fā)展至中晚期〔8〕。現(xiàn)階段臨床中多采用手術(shù)方案對卵巢癌患者進行治療，但單獨采用手術(shù)方案對中晚期患者進行治療時其手術(shù)效果較差，因而導(dǎo)致患者治療質(zhì)量較差，術(shù)后病死率及復(fù)發(fā)率居高不下，且對患者生活質(zhì)量產(chǎn)生嚴重不良影響〔9〕。一般情況下，卵巢癌患者術(shù)后病情惡化或復(fù)發(fā)時臨床中導(dǎo)致患者死亡的主要原因之一。有學(xué)者指出，在卵巢癌患者采用手術(shù)方案治療同時聯(lián)合應(yīng)用化療方案可有效彌補手術(shù)治療不足〔10〕。順鉑是現(xiàn)階段臨床中較為常見的化療藥物，其具有較高的臨床療效。但在對卵巢癌患者進行治療時順鉑類藥物仍存在一定缺陷，臨床中如何尋找到提高鉑類藥物細胞毒作用靶點十分迫切。研究結(jié)果顯示，采用順鉑對卵巢癌患者進行治療時常引起腫瘤細胞死亡的機制為細胞無法有效修復(fù)斷裂DNA雙鏈并出現(xiàn)持續(xù)性積累〔11〕。

PURA基因微乳染色體5q31區(qū)基因包括早期生長反應(yīng)基因-1及白介素，可編碼多種細胞因子。有學(xué)者采用熒光原位雜交技術(shù)分析結(jié)果顯示，在骨髓增生異常綜合征中可見EGR-1與PURA多種形式移位，并可能導(dǎo)致病情惡化發(fā)展至急性髓細胞性白血病〔12〕。PURA蛋白是重要的核基質(zhì)成分，在非雄激素依賴前列腺細胞中過表達PURA可誘導(dǎo)應(yīng)激反應(yīng)通路基因表達，并促進細胞分化調(diào)節(jié)細胞功能。卵巢上皮細胞病變在卵巢癌發(fā)生及發(fā)展過程中起到十分重要的作用，在鑒別卵巢癌發(fā)生過程中多種人卵巢癌體外模型及卵巢上皮細胞系行全基因組分析，結(jié)果表明20%異常表達基因與細胞外成分密切相關(guān)〔13〕，且在細胞內(nèi)腫瘤發(fā)生及發(fā)展過程中PURA基因起到十分重要的作用。有研究結(jié)果顯示，腫瘤細胞對順鉑等化療藥物治療的敏感度與DNA密切相關(guān)〔14〕。有研究結(jié)果顯示，PURA等位基因與多種腫瘤發(fā)生及發(fā)展密切相關(guān)〔15〕。本組研究結(jié)果顯示，兩組病理分型相近T型基因攜帶者對藥物反應(yīng)性顯著高于C型攜帶者，且T型基因改變與患者生存期密切相關(guān)。分析認為，T型基因變異可改善細胞內(nèi)DNA修復(fù)能力，提高化療藥物治療敏感度，此外T型基因變異對卵巢癌治療的臨床療效有一定促進作用。此外，PURA T型基因?qū)煼磻?yīng)正向作用，加速腫瘤細胞修復(fù)損傷能力，提高化療藥物敏感度，改善患者預(yù)后質(zhì)量。此外，PURA T基因型可作為評估順鉑治療質(zhì)量的預(yù)后因子，但其等位基因功能尚未完全揭示，仍有待后續(xù)深入研究。