羅文欣， 王 瑩， 馬紅梅， 蘭 衛(wèi),3

(新疆醫(yī)科大學(xué)1中醫(yī)學(xué)院， 烏魯木齊 830011； 2附屬中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部， 烏魯木齊 830002;3新疆名醫(yī)名方與特色方劑學(xué)實驗室， 烏魯木齊 830000)

德國洋甘菊(MatricariachamomillaL.)為母菊屬1年生草本植物[1]，主要含有香豆素、總黃酮和揮發(fā)油等多種化學(xué)成分[2]。研究表明其中總黃酮主要為槲皮素、芹菜素、木犀草素、萬壽菊苷、木犀草素等[3-5]，具有抑制真菌、消炎、抗氧化、降血糖、降血脂、氧化應(yīng)激神經(jīng)保護、促進血液循環(huán)、抗病毒、保肝及解痙等多種藥理作用[6-9]。臨床上主要用于治療感冒咳嗽、咽喉腫痛、關(guān)節(jié)骨痛、癡呆舌重等疾病[10-14]。黃酮類成分是德國洋甘菊主要藥理活性成分[15]。本研究采用單因素試驗和正交試驗對德國洋甘菊總黃酮的提取工藝進行研究，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器UV2550型紫外分光光度儀(日本島津公司),AL104型電子天平(瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司),KQ-500DE型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司),101型電熱鼓風(fēng)干燥箱(北京市永光明醫(yī)療儀器有限公司)。

1.2 試藥蘆丁對照品(中國科學(xué)院成都生物研究所,批號MUST-15091104),無水乙醇(天津市北聯(lián)精細化學(xué)品開發(fā)有限公司,批號20181120),亞硝酸鈉(天津市盛奧化學(xué)試劑有限公司,批號20180803),硝酸鋁(天津市永晟精細化工有限公司,批號20180305),氫氧化鈉(天津市盛奧化學(xué)試劑有限公司,批號20170320),甲醇(天津市北聯(lián)精細化學(xué)品開發(fā)有限公司,批號20180920)。

1.3 藥材德國洋甘菊藥材2017年6月采于新疆醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院藥材基地，經(jīng)新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)醫(yī)院李永和主任中藥師鑒定為德國洋甘菊(Matricariachamomilla)的干燥花蕾。

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備稱取蘆丁對照品適量，加甲醇溶解制成含黃酮0.2 mg/mL的溶液，搖勻，即得。

2.2 樣品溶液的制備稱取德國洋甘菊粉末0.5 g，70%乙醇，藥液比為1∶10，提取1.0 h，抽濾，即得。

2.3 標準曲線的繪制分別吸取“2.1”項下蘆丁對照品溶液0、1.0 、2.0 、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0 mL置于25 mL容量瓶中，分別加入1 mL 5%亞硝酸鈉水溶液，搖勻，放置6 min；加入1 mL 10%硝酸鋁溶液，搖勻，放置6 min；加入4%氫氧化鈉溶液10 mL，用甲醇定容至刻度，搖勻，在500 nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(A)，濃度為橫坐標(C)繪制標準曲線，得回歸方程：A=0.011 3C+0.009 25，r=0.999 8，表明蘆丁濃度在15～70 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 單因素試驗

2.4.1 乙醇濃度的單因素試驗 取德國洋甘菊粉末0.5 g，按“2.2”項下方法，確定提取時間為1.0 h，料液比為1∶10，乙醇濃度分別為0%、30%、50%、70%、90%提取，按 “2.3”項下方法測定德國洋甘菊總黃酮的含量分別為2.207、4.018、4.690、5.863、5.277 mg/g。選取德國洋甘菊總黃酮乙醇提取濃度為50%、70%、90%作為正交試驗條件。

2.4.2 提取時間的單因素試驗 取德國洋甘菊粉末0.5 g，按“2.2”項下方法，確定乙醇濃度為70%，料液比為1∶10，提取時間分別為0.5、1.0、1.5、2.0 h，按“2.3”項下方法測定德國洋甘菊總黃酮的含量分別為4.241、5.210、5.634、6.258 mg/g。選取德國洋甘菊總黃酮提取的提取時間為1.0、1.5、2.0 h作為正交試驗條件。

2.4.3 藥液比的單因素試驗 取德國洋甘菊粉末0.5 g，按“2.2”項下方法，確定乙醇濃度為70%，提取時間為1.0 h，藥液比分別為1∶4、1∶8、1∶10、1∶12，按“2.3”項下方法測定德國洋甘菊總黃酮的含量分別為5.451、6.032、6.487、6.475 mg/g。選取德國洋甘菊總黃酮提取的藥液比分別為1∶4、1∶8、1∶12作為正交試驗條件。

2.5 正交試驗根據(jù)單因素試驗結(jié)果，選擇乙醇濃度(A)分別為50%、70%、90%，藥液比(B)分別為1∶4、1∶8、1∶12，提取時間(C)分別為1.0、1.5、2.0 h為參考因素，以德國洋甘菊總黃酮提取量為指標，采用L9(34)正交試驗設(shè)計，對德國洋甘菊總黃酮提取條件進行正交試驗，德國洋甘菊總黃酮提取的最佳提取工藝條件為A2B3C3，即提取溶劑的乙醇濃度為70%，藥液比為1∶12，提取時間為2.0 h。方差分析結(jié)果表明3個因素對德國洋甘菊總黃酮提取量影響的大小順序為：A>C>B(即乙醇濃度>溶劑用量>提取時間)，見表1-3。

表1 因素水平表

2.6 驗證試驗按照最佳提取工藝條件提取德國洋甘菊總黃酮，平行提取并測定3次，德國洋甘菊總黃酮的提取量分別為6.479、6.492、6.488 mg/g，平均值為6.486 mg/g。

表2 正交試驗結(jié)果

表3 方差分析表

注：F1-0.05(2，2)=19.00，F(xiàn)1-0.01(2，2)=99.00。

3 討論

本研究采用單因素試驗法，分別對乙醇濃度、藥液比、提取時間等指標進行了考察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當乙醇濃度逐漸增大(從0%增大到90%)時，提取液中總黃酮的濃度也逐漸增大，這是因為黃酮類是以C6-C3-C6為基本骨架構(gòu)成的一類多酚性的化合物，極性較大，易溶于乙醇等有機溶劑，且乙醇可除去蛋白質(zhì)、多糖類等水溶性雜質(zhì)，增加提取的總黃酮純度，因此乙醇濃度越高，總黃酮的提取率就越高。此外，當藥液比和提取時間逐漸增大時，提取液中總黃酮的濃度也隨之增大，這是因為黃酮類成分因其結(jié)構(gòu)或攜帶官能團的不同，呈現(xiàn)不同的溶解能力，充足的溶劑和提取時間，可以增加黃酮類成分的溶解度，從而提高總黃酮的提取率。再通過正交試驗，綜合考察乙醇濃度、提取時間、藥液比對德國洋甘菊總黃酮提取率的影響，確定最佳提取工藝，為德國洋甘菊總黃酮的規(guī)模化生產(chǎn)提供理論基礎(chǔ)。