馬新春，郭 斌，徐 聰，張 英

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院 耳鼻咽喉科，青海 西寧 810001)

高分辨率顳骨軸位CT檢查被認為是確診大前庭水管綜合征(large vestibular aqueduct syndrome，LVAS)的金標(biāo)準(zhǔn)[1，2]，但患兒對該檢查配合性較差。

隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，多項基因檢測研究分析發(fā)現(xiàn)LVAS的根本病因與SLC26A4基因的突變關(guān)系密切，尤其是確認了IVS7-2A>G及2168A>G位點的突變是導(dǎo)致LVAS的常見突變位點[3，4]。因此擬對患兒采用基因檢測方法診斷。

本研究探討SLC26A4基因突變檢測及顳骨高分辨率CT檢查對診斷大前庭水管擴大綜合征的一致性。為臨床推廣SLC26A4基因突變檢測提供支持。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2016年12月至2018年2月于青海大學(xué)附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科行人工耳蝸植入手術(shù)的患者作為研究對象，共216例?；颊呷朐汉笤儐栂嚓P(guān)信息，主要包括患者的一般信息、家族史、藥物史、個人史(有無外傷史)，耳聾的發(fā)病年齡及母親的孕期情況等；完善耳鼻喉科?？撇轶w、聽力學(xué)檢查、影像學(xué)檢查(高分辨率顳骨軸位CT)等。符合條件的216名耳聾患兒中，男性129例，女性87例；年齡均在1～12歲，平均年齡為3.9±1.9歲，上述所有患者住院后均行基因檢測及影像學(xué)檢查。

1.2 檢測方法

1.2.1 基因檢測分析方法：經(jīng)監(jiān)護人知情同意后，采用天根生物工程公司的全血基因組DNA核酸提取試劑盒提取基因組DNA，檢測基因組的純度及濃度，對符合標(biāo)準(zhǔn)的基因組DNA進行PCR擴增，采用北京博奧生物公司提供的基因芯片，對患者基因組進行雜交、芯片洗滌與甩干、芯片掃描，檢測、分析責(zé)任基因SLC26A4上的IVS7-2A>G、2168A>G位點突變情況。

1.2.2 影像學(xué)檢查分析方法：對患兒行高分辨率顳骨軸位CT檢查，其檢查由青海大學(xué)附屬醫(yī)院影像中心完成。LVAS擴大判斷標(biāo)準(zhǔn)：軸位顳骨CT上前庭導(dǎo)水管中段最大直徑超過1.5 mm、前庭導(dǎo)水管外口超過2.5 mm。為排除誤差，每名患兒的影像學(xué)檢查結(jié)果均由影像中心的3名高年資醫(yī)生判讀。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS19.0軟件對兩種診斷結(jié)果行Fisher確切概率或行×列表卡方檢驗法，檢測兩種方法的差異性，其檢驗水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 顳骨CT檢查結(jié)果

行顳骨HRCT檢查的216例患者結(jié)果：正常148例，內(nèi)耳畸形68例(導(dǎo)水管擴大39例，其中合并有耳蝸Mondini畸形5例)；通過Monte Carlo(蒙特卡洛)確切概率法分析發(fā)現(xiàn)LVAS的檢出率在性別及民族構(gòu)成比上均無統(tǒng)計學(xué)差異(表1)。

表1 216例患者影像學(xué)結(jié)果(%)

Table 1Imaging results of 216 patients(%)

*：表示Fisher確切概率法所得結(jié)果

2.2 責(zé)任基因檢測結(jié)果

行基因檢測的216例患兒結(jié)果：正常180例，SLC26A4基因位點突變的有36例，漢、回、藏及其他民族檢出率分別為16.26%、14.54%、26.09%、22.22%，民族上無統(tǒng)計學(xué)意義。突變者中IVS7-2A>G純合突變16例、2168A>G純合突變2例，共18例；IVS7-2A>G雜合突變11例、2168A>G純合突變5例，共16例，IVS7-2A>G與2168A>G的復(fù)合雜合突變?yōu)?例(表2)。

表2 216例患者SLC26A4基因檢測結(jié)果(%)

Table 2Results of SLC26A4 gene test in 216 patients(%)

*：表示Fisher確切概率法所得結(jié)果

2.3 影像學(xué)診斷與基因檢測結(jié)果對比分析情況

39例導(dǎo)水管擴大畸形患者中檢測出36例伴有責(zé)任基因的突變，另有3例顳骨HRCT影像學(xué)診斷符合標(biāo)準(zhǔn)，但未檢測出SLC26A4基因的位點突變。我們通過醫(yī)學(xué)統(tǒng)計方法對于影像學(xué)診斷與基因檢測兩種診斷方法進行一致性檢驗，Kappa=0.952，提示兩種方法存在較好一致性(表3～4)。

表3VA擴大患者在基因突變中的分布(%)

Table 3Distribution of Patients with enlarged VA in gene mutations(%)

表4SLC26A4基因檢測與影像學(xué)檢查結(jié)果(%)

Table 4Results of SLC26A4 gene test and imaging examination(%)

3 討論

基因檢測技術(shù)，尤其是基因芯片的出現(xiàn)成為分子生物醫(yī)學(xué)的重要組成部分?；蛐酒脑硎菍⒁阎墓潭ㄔ谥С治锏奶结樑c帶有標(biāo)記的待測基因雜交，通過探針上的雜交信號獲取檢測基因的各項信息[5]，目前已成為分子生物學(xué)的重要檢測方法而廣泛應(yīng)用于生物科學(xué)的眾多領(lǐng)域中。

多項研究表明SLC26A4是導(dǎo)致LVAS的責(zé)任基因，SLC26A4基因突變具有種族差異，在我國LVAS患者的SCL26A4基因檢出率高達97%，占所有突變類型的57.63%，尤其是IVS7-2A>G及2168A>G位點的突變[6]。其中以IVS7-2A>G突變最為多見，約有80%的LVAS患者中可以檢測到IVS7-2A>G位點的突變。本研究發(fā)現(xiàn)，SLC26A4基因突變的檢出率為16.67%，其中 IVS7-2A>G位點突變約占責(zé)任基因突變的80.56%，2168A>G位點突變占22.22%，這與國內(nèi)其他研究結(jié)果相一致[7，8]。結(jié)合本研究結(jié)果及相關(guān)結(jié)論，對于可疑患兒可采用基因檢測有效地發(fā)現(xiàn)或確診LVAS。

前庭導(dǎo)水管異常擴大時，外力的作用可引起顱內(nèi)壓異常增高，致內(nèi)淋巴逆流，損傷內(nèi)耳毛細胞，進而導(dǎo)致LVAS患者聽力下降[9]。LVAS是一種常見的內(nèi)耳畸形[10]，本研究顯示，36例SLC26A4基因突變者的影像學(xué)檢查均提示雙側(cè)VA擴大，3例患者的影像學(xué)檢查雖然符合LVAS診斷標(biāo)準(zhǔn)，但未檢測到責(zé)任基因的突變。分析原因：LVAS為常染色體隱性遺傳性疾病，目前關(guān)于LVAS責(zé)任基因主要認為是SLC26A4的突變，也不排除是其他責(zé)任基因的突變，或是SLC26A4基因上其他位點的突變導(dǎo)致了LVAS的發(fā)生，本研究的樣本量尚少，有待進一步確認。

本研究顯示，基因檢測與影像學(xué)檢查兩種方法對診斷LVAS具有良好的一致性。