閆福源，周 爽，王任晶，許 寧，崔長升，齊 濱，劉 莉

（長春中醫(yī)藥大學(xué)，長春 130117）

西洋參又名花旗參，為五加科植物西洋參（Panax quinquefolium L.）的干燥根，原產(chǎn)美國北部和加拿大南部，根性涼，能補氣養(yǎng)陰、清熱生津[1-3]。由于鮮西洋參不能長途運輸，只能曬干后進入中國，所以西洋參的加工產(chǎn)品的研究鮮有報道，只加工成生曬參類單一品種[4]。西洋參在我國引種成功后，逐漸代替了進口西洋參，產(chǎn)量逐年增加，到2017年年底全國產(chǎn)量可達200噸。西洋參至今加工品種仍然是傳統(tǒng)的單一生曬參類，已遠遠滿足不了人民保健事業(yè)的需要。

將西洋參加工成西洋紅參后，水解酶、淀粉酶、麥芽糖酶等受到破壞，防止了皂苷類成分的水解，并且質(zhì)地堅硬，使有效成分得到保護，也會有新成分產(chǎn)生，具有很大的醫(yī)療價值，如已知的有美拉德反應(yīng)生成的是延緩衰老的精氨酸葡萄雙糖苷[5]?，F(xiàn)代藥學(xué)研究顯示，西洋參炮制品西洋紅參對于提高免疫力、抗疲勞及抗心肌缺血等多方面均具有較好的活性，而提高免疫力活性為其最主要的應(yīng)用價值之一[6]。從檢索文獻[7-11]得出紅參的炮制過程可分為凈制、蒸制、烘干、晾曬、二次烘干5個過程，有研究表明，炮制和烘干時間及溫度的不同對于西洋紅參的化學(xué)成分影響均較大，故對于該藥物的藥理活性亦具有一定的影響[12-13]。

相比較紅參而言，對于西洋紅參的研究目前還比較少，其炮制工藝及化學(xué)成分的研究還不夠深入。因此，建立西洋紅參的炮制方法及相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，系統(tǒng)深入研究西洋紅參化學(xué)成分，特別是人參皂苷類成分，具有很高的科研價值。

1 材料

1.1 儀器 電熱恒溫水浴鍋（上海精宏實驗設(shè)備有限公司），SHBⅢ-S循環(huán)水多用式真空泵（鄭州長城科貿(mào)有限公司），OSB-2100旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海愛朗儀器有限公司），KQ-500DA型數(shù)控超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司），Agilent 1220LC-高效液相色譜儀（安捷倫1220科技有限公司），JT1001N精天電子天平（上海精天電子儀器有限公司）。

1.2 試藥 人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1，均由北京恒元啟天化工技術(shù)研究院提供。乙醇為分析純，甲醇和乙腈為色譜純，水為超純水，西洋參均來自中國吉林省通化市。

2 方法

2.1 西洋紅參的炮制實驗 經(jīng)查閱文獻及參考廠家的制作加工工藝，完成如下的實驗設(shè)計。實驗因素水平見表1，實驗方案見表2。

表1 實驗因素水平

表2 三因素三水平實驗方案設(shè)計

2.2 西洋紅參中人參皂苷的含量測定實驗

2.2.1 對照品溶液的制備 分別取人參皂苷Rg1標(biāo)準(zhǔn)品、人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品和人參皂苷Rb1標(biāo)準(zhǔn)品適量，精密稱足，加甲醇制成每1 mL各含人參皂苷Rg1 0.1 mg、人參皂苷Re 0.4 mg和人參皂苷Rb1 1 mg的混合溶液，搖勻，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取樣品粉末約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入40 %乙醇50 mL，加熱回流1 h，放冷，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液25 mL，減壓蒸干，殘渣用40%乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至5 mL量瓶中，加40%乙醇稀釋至刻度，即得。

2.2.3 色譜條件 色譜柱：Aglient Eclipse Plus C18（4.6×250 mm，5 μm）柱；流動相：乙腈（A）-水（B）；流速為1 mL/min；柱溫：35 ℃；波長：203 nm；進樣量：10 μL；流動相梯度見表3。

表3 梯度洗脫條件

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 分別精密吸取三種人參皂苷Rg1、Re和Rb1標(biāo)準(zhǔn)品溶液進樣，以人參皂苷含量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，分別繪制三種人參皂苷Rg1、Re和Rb1的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到以下三種人參皂苷的回歸方程，見表4。

表4 人參皂苷線性關(guān)系考察

2.3.2 精密度試驗 分別精密吸取同一西洋紅參供試品溶液10 μL，重復(fù)進樣6次，測得各色譜峰峰面積和保留時間，分別計算標(biāo)準(zhǔn)偏差，得人參皂苷Rg1、Re和Rb1峰面積的RSD值分別為0.28%、0.41%和0.39%，結(jié)果表明儀器的精密度良好。

2.3.3 重現(xiàn)性試驗 取同一西洋紅參樣品5份，按2.2.1處理方法將其制成供試品溶液，按2.2.3液相色譜條件，分別進樣測定，測得各色譜峰峰面積和保留時間，分別計算標(biāo)準(zhǔn)偏差，得人參皂苷Rg1、Re和Rb1峰面積的RSD值分別為1.88%、1.94%和1.65%，結(jié)果表明方法重現(xiàn)性良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗 精密吸取西洋紅參供試品溶液 10 μL，分別在配制后的 0、2、4、6、8、12、24 h進行進樣測定，結(jié)果供試品溶液中各人參皂苷在24 h之內(nèi)峰面積無明顯變化，分別計算其標(biāo)準(zhǔn)偏差，得人參皂苷Rg1、Re和Rb1峰面積的RSD值分別為1.55%、0.84%和1.22%，結(jié)果表明供試品溶液24 h之內(nèi)在該溶液中化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，本法適用于其含量測定。

2.3.5 加樣回收率試驗 分別精密稱取西洋紅參樣品3份，分別加入已精密稱定的人參皂苷，按2.2.1處理方法將其制成供試品溶液，按2.2.3液相色譜條件測定人參皂苷含量，分別計算加樣回收率，結(jié)果表明人參皂苷Rg1、Re和Rb1的加樣回收率分別為99.2%、98.8%和98.3%，RSD值分別為1.77%、1.62%和1.58%。

3 結(jié)果

九份西洋紅參樣品中人參皂苷Rg1、Re和Rb1的含量，見表5。

表5 九份西洋紅參樣品中三種人參皂苷Rg1、Re和Rb1的含量 %

4 討論

本實驗通過正交實驗設(shè)計，根據(jù)蒸制時間、烘干溫度和烘干時間炮制出九份不同條件下的西洋紅參的樣品。

通過用高效液相色譜法對九份西洋紅參樣品中的人參皂苷Rg1、Re和Rb1三種單體皂苷進行含量測定，確定了蒸制時間、烘干溫度和烘干時間三個條件對人參皂苷含量影響的大小順序，結(jié)果顯示：對人參皂苷Rg1的含量影響的大小順序是烘干時間＞蒸制時間＞烘干溫度；對人參皂苷Re的含量影響的大小順序是烘干時間＞蒸制時間＞烘干溫度；對人參皂苷Rb1的含量影響的大小順序是烘干溫度＞烘干時間＞蒸制時間。通過對九份西洋紅參樣品中三種人參皂苷Rg1、Re和Rb1含量之和的正交分析結(jié)果得到了蒸制時間、烘干溫度和烘干時間三種因素對三種人參皂苷的影響大小順序為：烘干溫度＞蒸制時間＞烘干時間，確定了西洋紅參炮制的最佳工藝為蒸制時間3 h，烘干溫度70 ℃，烘干時間10 h。

綜上所述，本實驗用高效液相色譜法對九份西洋紅參樣品進行含量測定，可以為建立西洋紅參的炮制規(guī)范和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供一定的參考依據(jù)。