文海若，任璐，羅飛亞，汪祺

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比較細(xì)胞松弛素A與B在胞質(zhì)分裂阻斷法微核試驗(yàn)中的應(yīng)用

文海若，任璐，羅飛亞，汪祺

100176 北京，中國(guó)食品藥品檢定研究院安全評(píng)價(jià)研究所（文海若、任璐），化妝品檢定所（羅飛亞），中藥民族藥檢定所（汪祺）；510006 廣州，中山大學(xué)藥學(xué)院（任璐）

比較細(xì)胞松弛素 A（Cyto A）及細(xì)胞松弛素 B （Cyto B）對(duì)微核試驗(yàn)常用細(xì)胞系——中國(guó)倉(cāng)鼠肺成纖維細(xì)胞（CHL）毒性及對(duì)體外微核試驗(yàn)結(jié)果的影響。

在熒光顯微鏡下觀察由微絲組成的應(yīng)力纖維結(jié)構(gòu)，并使用 CHL 開展胞質(zhì)分裂阻斷法微核試驗(yàn)，比較兩者對(duì)多核細(xì)胞率及含微核雙核細(xì)胞率的影響。

不同濃度的 Cyto A 和 Cyto B 與細(xì)胞作用 24 h 后，與對(duì)照組（26% ± 7%）比較均可誘導(dǎo)多核細(xì)胞形成率的顯著升高（Cyto A 及 Cyto B 3.0 μg/ml 濃度組分別為58% ± 12% 和 72% ± 9%，< 0.001），且 Cyto A 在 3.0 μg/ml濃度條件下誘導(dǎo)的平均多核細(xì)胞率與 1.5 μg/ml 濃度組比較有所降低。Cyto A 處理組在 MMC 濃度分別為 0、0.1 和 0.3 μg/ml 時(shí)的微核率分別為 0.25% ± 0.16%、1.98% ± 0.59% 和 3.80% ± 0.90%；而 Cyto B 處理組在相同 MMC 濃度時(shí)的微核率分別為 0.32% ± 0.16%、2.50% ± 0.61% 和 5.05% ± 1.09%。

雖然 Cyto B 的多核細(xì)胞造模效果略優(yōu)于 Cyto A，兩者均可有效用于胞質(zhì)分裂阻斷法微核研究。研究結(jié)果將為相關(guān)領(lǐng)域研究者提供可借鑒的實(shí)際經(jīng)驗(yàn)。

細(xì)胞松弛素類； 微核試驗(yàn)； 肌動(dòng)蛋白類； 胞質(zhì)分裂阻斷法

體外哺乳動(dòng)物細(xì)胞微核試驗(yàn)以細(xì)胞過程中形成的獨(dú)立于主核的染色單體或染色體斷片為生物標(biāo)志物，來評(píng)估受試物的潛在致染色體損傷能力。染色體損傷是腫瘤形成的分子基礎(chǔ)之一，微核形成率可用于對(duì)受試物的潛在致癌風(fēng)險(xiǎn)預(yù)測(cè)。因其試驗(yàn)方法較為簡(jiǎn)便，體外微核試驗(yàn)已廣泛應(yīng)用于環(huán)境誘變劑、保健食品、化妝品、醫(yī)療器械和藥物的安全性評(píng)價(jià)[1-3]。使用體外培養(yǎng)細(xì)胞開展常規(guī)微核法（conventional micronucleus methods）時(shí)對(duì)給藥后所有細(xì)胞的微核率進(jìn)行分析，不對(duì)細(xì)胞核分裂次數(shù)進(jìn)行區(qū)分。該方法無法排除細(xì)胞自發(fā)微核背景值，且微核率可隨細(xì)胞分裂次數(shù)而升高，故往往結(jié)果有所偏差。Fenech 等[4]于 1985 年在微核試驗(yàn)的受試物與細(xì)胞處理時(shí)加入了抑制細(xì)胞質(zhì)分裂的細(xì)胞松弛素，可通過計(jì)數(shù)細(xì)胞核數(shù)量對(duì)受試物細(xì)胞增殖的影響以及計(jì)數(shù)細(xì)胞的分裂次數(shù)進(jìn)行限定。該方法即胞質(zhì)分裂阻斷法微核試驗(yàn)（cytokinesis-block micronuceus cytome assay），僅分析完成一次分裂的雙核細(xì)胞的微核率，從而提高結(jié)果的準(zhǔn)確性?？梢娂?xì)胞松弛素的應(yīng)用在上述試驗(yàn)體系中有重要作用。

細(xì)胞松弛素原本是一組真菌代謝產(chǎn)物，包括細(xì)胞松弛素 A、B、C、D、E、F、H 和 J[5]。它可與細(xì)胞的微絲結(jié)合并切斷微絲，從而抑制微絲與肌動(dòng)蛋白的結(jié)合。而肌動(dòng)蛋白可與細(xì)胞核的定位、定向移動(dòng)和胞質(zhì)分裂時(shí)染色體結(jié)構(gòu)的維持有關(guān)[6]。當(dāng)肌動(dòng)蛋白功能受到干擾時(shí)，染色體的集縮與基因轉(zhuǎn)錄可受到影響[7]。此外，有研究顯示 Cyto B 可誘發(fā)細(xì)胞脫核，并可用于制備大量無核細(xì)胞質(zhì)體和無胞質(zhì)的核質(zhì)體用于細(xì)胞融合、細(xì)胞核、細(xì)胞質(zhì)成分分析及染色質(zhì)基因轉(zhuǎn)移技術(shù)等多種研究[8]。

微核試驗(yàn)中常用的造模試劑細(xì)胞松弛素為 Cyto B 和 Cyto A（結(jié)構(gòu)見圖 1），Cyto B 是體外微核試驗(yàn)指導(dǎo)原則規(guī)定使用的試劑[9]，而獲得困難時(shí)，有時(shí)也在微核試驗(yàn)中使用具有相似功能的 Cyto A。初次試驗(yàn)者在購(gòu)買試劑時(shí)容易將兩者混淆。本研究比較了兩者對(duì)微核試驗(yàn)常用細(xì)胞系中國(guó)倉(cāng)鼠肺成纖維細(xì)胞（Chinese hamster lung fibroblast，CHL）的細(xì)胞毒性及對(duì)體外微核試驗(yàn)結(jié)果的影響。

圖 1 細(xì)胞松弛素 A 與細(xì)胞松弛素 B 的化學(xué)結(jié)構(gòu)

Figure 1 Chemical structures of cytochalasin A and cytochalasin B

1 儀器與材料

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 BX40 型正置光學(xué)顯微鏡購(gòu)自日本 Olympus 公司；5810R 型離心機(jī)購(gòu)自美國(guó)Eppendorf 公司；NTS-1300 恒溫振蕩水槽購(gòu)自東京理化器械株式會(huì)社；熒光酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)伯騰公司；Operetta 高內(nèi)涵成像系統(tǒng)購(gòu)自英國(guó)珀金埃爾默公司。

1.1.2 材料與試劑 ddH2O 使用本中心 MilliQ-A10 超純水機(jī)生產(chǎn)的超純水，121 ℃、15 min 高壓滅菌，4 ℃冰箱保存；RPMI 1640 培養(yǎng)基、1% 青鏈霉素混合液、0.25% 胰蛋白酶-EDTA、胎牛血清均購(gòu)自美國(guó) Gibco 公司；DMSO 購(gòu)自美國(guó) Sigma 公司；PBS 購(gòu)自美國(guó) Hyclone 公司；Cyto A 與 Cyto B購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司，用 DMSO 配成 5 mg/ml 溶液，–20 ℃保存；Perm/Wash buffer（554723）購(gòu)自美國(guó)BD 公司；Alexa FluorTM488 鬼筆環(huán)肽（A12379）購(gòu)自美國(guó)ThermoFisher 公司；Hoechst 33342 購(gòu)自美國(guó)Invitrogen 公司。細(xì)胞為中國(guó)倉(cāng)鼠肺細(xì)胞（Chinese hamster lung cell，CHL）第 4 ~ 6 代，來自中國(guó)科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞資源中心，液氮保存。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞松弛素對(duì)微絲的影響

1.2.1.1 細(xì)胞培養(yǎng)及處理 無菌條件下，CHL 細(xì)胞使用含 10% 小牛血清及 1% 青鏈霉素的 RPMI 1640 在 37 ℃，CO2體積分?jǐn)?shù)為 5% 的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期后，以 1 ×105個(gè)/孔接種于 6 孔細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)培養(yǎng)18 ~ 24 h。

1.2.1.2 染色與固定 觀察細(xì)胞培養(yǎng)情況，移除含 Cyto A 或 Cyto B 的培養(yǎng)基，使用 0.1 ml PBS 沖洗細(xì)胞 2 次，移除液體。每孔加入 0.1 ml 含3.7% 甲醇的 PBS 溶液固定，室溫孵育 20 min 后移除液體。每孔加入 0.1 ml PBS 清洗細(xì)胞 3 次，每次 10 min，清洗后移除液體。每孔加入 0.1 ml 鬼筆環(huán)肽的 1 × 工作液染色，室溫孵育 60 min 后移除液體。每孔加入 0.1 ml PBS 清洗細(xì)胞 3 次，每次 5 min，清洗后移除液體。每孔加入 100 μl 含 Hoechst 33342（終濃度 5 μg/ml 或 16.23 μmol/L）的 PBS（含 1% 胎牛血清）混合液，37 ℃、5% CO2條件下避光染色 10 min。移除含染料的培養(yǎng)基，使用 PBS 100 μl 清洗 2 次，每次 5 min，最后一次洗后剩余液體不移除。

1.2.1.3 鏡下觀察 使用 Operetta CLS 高內(nèi)涵分析系統(tǒng)在 400 × 倍熒光顯微鏡下對(duì)微絲及細(xì)胞核形態(tài)觀察及拍照。

1.2.2 體外胞質(zhì)分裂阻斷法微核試驗(yàn)

1.2.2.1 給藥處理 胞質(zhì)分裂阻斷法微核試驗(yàn)簡(jiǎn)述如下[10]。細(xì)胞培養(yǎng)方法同 1.2.1.1。在無代謝活化條件下，細(xì)胞分別給予 0.1 和 0.3 μg/ml 的絲裂霉素 C（MMC）與細(xì)胞共同作用 6 h 后，更換含濃度為 1.0、1.5 和 3.0 μg/ml 的 Cyto A 和 Cyto B 的培養(yǎng)液與細(xì)胞繼續(xù)作用約 24 h（1.5 個(gè)細(xì)胞倍增周期）。同時(shí)設(shè) 0.5% DMSO 為對(duì)照組。每個(gè)條件3 個(gè)復(fù)孔。

1.2.2.2 制片與染色 使用胰蛋白酶-EDTA 消化細(xì)胞，并將細(xì)胞懸液于 1000 r/min 離心 5 min 后收獲。細(xì)胞經(jīng)不含鈣、鎂離子的杜氏磷酸緩沖液（Dulbecco's phosphate buffered saline，DPBS）洗滌 2 次后，加入預(yù)溫的 0.075 mol/L KCl 溶液于 37 ℃低滲處理不超過 5 min。加入甲醇:冰醋酸（3:1）對(duì)樣本進(jìn)行固定，并經(jīng) 1000 r/min 離心5 min 后棄上清。重復(fù)固定 2 次。滴片、待玻片干燥后浸入 5% 姬姆薩溶液，染色約 25 min。標(biāo)本染色后使用自來水沖洗并在室溫下自然干燥。

1.2.2.3 鏡檢指標(biāo) 顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)：①每個(gè)劑量組玻片標(biāo)本中 500 個(gè)細(xì)胞中多核細(xì)胞數(shù)，并計(jì)算多核細(xì)胞百分率；②2000 個(gè)雙核細(xì)胞中微核數(shù)，并計(jì)算微核形成百分率。

1.3 統(tǒng)計(jì)及數(shù)據(jù)分析

圖 2 細(xì)胞松弛素 A 與細(xì)胞松弛素 B 對(duì)微絲形態(tài)的影響

Figure 2 Effects of cytochalasin A and cytochalasin B to the morphology of actin filament

2 結(jié)果

2.1 比較細(xì)胞松弛素 A 與 B 對(duì)微絲的影響

使用熒光抗體標(biāo)定微絲和細(xì)胞核后，在熒光顯微鏡下（400 ×）可見由微絲組成的應(yīng)力纖維結(jié)構(gòu) （圖2）。細(xì)胞在貼壁條件下生長(zhǎng)時(shí)，應(yīng)力纖維與細(xì)胞長(zhǎng)軸平行。Cyto A 及 Cyto B 作用后，應(yīng)力纖維形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)有所破壞，細(xì)胞形態(tài)變得狹長(zhǎng)，并可誘導(dǎo)雙核細(xì)胞的形成。

2.2 比較細(xì)胞松弛素 A 與 B 對(duì)體外胞質(zhì)分裂阻斷法微核結(jié)果的影響

CHL 細(xì)胞的倍增周期約為 16 h，不同濃度的 Cyto A 和 Cyto B 與細(xì)胞作用 24 h（約 1.5 個(gè)細(xì)胞倍增周期）后，每濃度組分別計(jì)數(shù) 500 個(gè)細(xì)胞中的單核與多核細(xì)胞數(shù)（圖 3）。與對(duì)照組（26% ± 7%）比較Cyto A 及 Cyto B 均可誘導(dǎo)多核細(xì)胞（雙核及以上）形成率顯著升高（3.0 μg/ml 濃度組分別為 58% ± 12% 和 72% ± 9%，< 0.001），且 Cyto A 在 3.0 μg/ml 濃度條件下誘導(dǎo)的平均多核細(xì)胞率與 1.5 μg/ml 濃度組比較略有降低。1.0 及 3.0 μg/ml Cyto A 與相同濃度 Cyto B 相比，所誘導(dǎo)的多核細(xì)胞形成率顯著降低（< 0.001），可能與 Cyto A 的胞質(zhì)分裂阻斷能力和細(xì)胞毒性有關(guān)。上述結(jié)果雖然試驗(yàn)選用濃度范圍下 Cyto A 與 Cyto B 均可有效誘導(dǎo)大量多核細(xì)胞的形成，但 Cyto B 的多核細(xì)胞造模效果略優(yōu)于 Cyto A。

圖 3 細(xì)胞松弛素 A 與細(xì)胞松弛素 B 對(duì)多核細(xì)胞率的影響（n = 500，*P < 0.001，與 0.5% DMSO 組比較；#P < 0.001，與相同濃度 Cyto A組比較）

Figure 3 Effects of cytochalasin A and cytochalasin B to the ratio of multinucleated cells (n = 500,*< 0.001, comparing to 0.5% DMSO group;#< 0.001, comparing to Cyto A group of the same concentration)

以 1.5 μg/ml 為 Cyto A 和 Cyto B 處理濃度，分別給予不同濃度的體外微核試驗(yàn)陽(yáng)性劑 MMC 來評(píng)價(jià) Cyto A 和 Cyto B 對(duì)微核形成率的影響。含微核的雙核 CHL 細(xì)胞形態(tài)如圖 4A 所示。Cyto A 處理組在MMC 濃度分別為 0、0.1 和 0.3 μg/ml 時(shí)的微核率分別為 0.25% ± 0.16%、1.98% ± 0.59% 和 3.80% ± 0.90%；而 Cyto B 處理組在相同 MMC 濃度時(shí)的微核率分別為 0.32% ± 0.16%、2.50% ± 0.61% 和 5.05% ± 1.09%。陰性背景值在文獻(xiàn)報(bào)道范圍之內(nèi)[10-12]。無論經(jīng) Cyto A 或 Cyto B 處理，0.1 和 0.3 μg/ml MMC 均可誘導(dǎo) CHL 細(xì)胞雙核細(xì)胞微核率顯著性升高，且存在劑量相關(guān)性（< 0.01），但相同 MMC 濃度條件下 Cyto A 或 Cyto B 處理組之間的微核率無顯著性差異。提示 Cyto A 和 Cyto B 均可用于胞質(zhì)分裂阻斷法微核試驗(yàn)。

圖 4 細(xì)胞松弛素 A 與細(xì)胞松弛素 B 對(duì)含微核雙核細(xì)胞率的影響（n = 2000；A：含微核的雙核細(xì)胞圖例；B：含微核雙核細(xì)胞發(fā)生率分析結(jié)果；**P < 0.01，與 Cyto A-MMC 0 μg/ml 組比較；##P < 0.01，與 Cyto B-MMC 0 μg/ml 組比較）

Figure 4 Effects of cytochalasin A and cytochalasin B to the ratio of micronucleated cells (n = 2000; A: Representative image of binucleated cells containing micronuclei; B: Data analysis of the incidence on binucleated cells containing micronuclei;**< 0.01, comparing to Cyto A-MMC 0 μg/ml group;##< 0.01, comparing to Cyto B-MMC 0 μg/ml group)

3 討論

微絲為直徑約 7 nm 的肌動(dòng)蛋白纖維，與微管和中間纖維共同構(gòu)成細(xì)胞骨架，是決定細(xì)胞形狀和維持細(xì)胞內(nèi)部區(qū)域化的重要結(jié)構(gòu)[13]。微絲在細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、跨膜運(yùn)輸和細(xì)胞分裂、信號(hào)傳導(dǎo)等過程中發(fā)揮決定性作用。在動(dòng)物細(xì)胞的有絲分裂末期，在子代細(xì)胞之間形成由微絲構(gòu)成的縊縮環(huán)，通過微絲束中肌動(dòng)蛋白和肌球蛋白的收縮而隔斷子代細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)，形成兩個(gè)獨(dú)立的子代細(xì)胞[14]。細(xì)胞松弛素可抑制微絲的組裝并破壞其三維網(wǎng)絡(luò)[5]。因此，在細(xì)胞培養(yǎng)過程中添加細(xì)胞松弛素可形成核分離而細(xì)胞質(zhì)不分離的多核細(xì)胞。

體外胞質(zhì)分裂阻斷法微核試驗(yàn)是常見的遺傳毒性評(píng)價(jià)方法，在環(huán)境誘變劑、化妝品、保健食品及納米材料毒理學(xué)評(píng)價(jià)及科研工作中得到廣泛應(yīng)用[15]。細(xì)胞松弛素的添加有助于對(duì)細(xì)胞分裂次數(shù)進(jìn)行區(qū)分。單核細(xì)胞中的微核提示與自身背景有關(guān)，與受試物作用無關(guān)；而微核率則隨著細(xì)胞分裂次數(shù)增加而顯著升高。因此通過限定計(jì)數(shù)雙核細(xì)胞中的含微核細(xì)胞數(shù)，有助于排除非藥物因素引起的微核率升高。而通過計(jì)數(shù)單核和多核細(xì)胞比例，也可對(duì)受試物細(xì)胞增殖的影響進(jìn)行評(píng)價(jià)。此外，細(xì)胞松弛素的使用還可保留細(xì)胞分裂中期凋亡及壞死細(xì)胞形態(tài)，可對(duì)樣本中凋亡及壞死細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)分析[16-17]。而雙核細(xì)胞的形成，也使研究者可以對(duì)除微核外，另外一項(xiàng)生物標(biāo)志物“核質(zhì)橋”（nucleoplasmic bridges，NPB）進(jìn)行觀察。NPB 是雙核細(xì)胞中位于兩個(gè)主核之間連續(xù)的橋狀核質(zhì)，可提示 DNA 錯(cuò)誤修復(fù)或端粒末端融合效應(yīng)。有研究提示 NPB 對(duì)60Co γ 射線誘導(dǎo)的遺傳物質(zhì)損傷做出靈敏而可靠的判斷[18]。OECD 指導(dǎo)原則推薦使用 Cyto B 用于細(xì)胞造模，因 Cyto A 具有相似阻斷細(xì)胞質(zhì)分離的效應(yīng)，后者也可用于胞質(zhì)分裂阻斷法微核試驗(yàn)。本研究比較了兩者對(duì)微核試驗(yàn)結(jié)果的影響，提示 Cyto A 的細(xì)胞毒性略大于 Cyto B，此外兩者對(duì)雙核細(xì)胞微核率的形成效應(yīng)等同，使用 Cyto A 對(duì)微核的形成無明顯促進(jìn)或抑制的作用，均可用于該研究。從作用機(jī)制角度分析，細(xì)胞松弛素對(duì)遺傳物質(zhì)無損傷作用，且對(duì)細(xì)胞分裂周期無明顯影響。本研究中也未見 Cyto A 及 Cyto B 對(duì)微核率的形成存在顯著性差異。

然而，細(xì)胞松弛素在微核試驗(yàn)中的應(yīng)用也存在一定局限。因細(xì)胞松弛素對(duì)細(xì)胞骨架的形成有所干擾，可影響細(xì)胞對(duì)納米材料等難溶受試物的內(nèi)吞或攝取。故對(duì)于納米材料，建議在給藥后期再添加 Cyto B（延遲的共同處理），或使用先給藥再添加 Cyto B（后處理）的方式，從而促進(jìn)受試物與細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)在無 Cyto B 的情況下充分暴露，提高其與遺傳物質(zhì)的相互作用機(jī)會(huì)[19-20]。此外，細(xì)胞松弛素也可通過抑制細(xì)胞動(dòng)力學(xué)干擾多倍體的形成，從而影響對(duì)潛在多倍體誘導(dǎo)劑毒性的判斷[21]。

綜上所述，使用細(xì)胞松弛素開展胞質(zhì)分裂阻斷法微核試驗(yàn)在生物監(jiān)測(cè)和化合物毒性評(píng)價(jià)及研究中有一定用武之地。本研究比較了不同的細(xì)胞松弛素亞型，Cyto A 和 Cyto B 對(duì)胞質(zhì)分裂阻斷法微核試驗(yàn)結(jié)果的影響。兩者在體外微核試驗(yàn)中均可能涉及，但有關(guān) Cyto A 的文獻(xiàn)報(bào)道寥寥，難以確定適宜的給藥條件。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn) Cyto A 和 Cyto B 均可有效用于胞質(zhì)分裂阻斷法微核研究，但后者的多核細(xì)胞造模效果略優(yōu)于前者且細(xì)胞毒性較低。研究結(jié)果將為相關(guān)領(lǐng)域研究者的實(shí)際工作提供參考與借鑒。

志謝 感謝珀金埃爾默公司（Perkin Elmer，北京）王瑜博士對(duì)熒光染色及分析技術(shù)的支持。

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Comparison of cytochalasin A and B in the cytokinesis-blocking micronucleus assay

WEN Hai-ruo, REN Lu, LUO Fei-ya, WANG Qi

Institute for Safety Evaluation (WEN Hai-ruo, REN Lu), Institute for Cosmetics Control (LUO Fei-ya), Institute for Control of Chinese Traditional Medicine and Ethnic Medicine (WANG Qi), National Institutes for Food and Drug Control, Beijing 100050, China; School of Pharmaceutical Sciences, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510006, China (REN Lu)

To compare the cytotoxicity and the effects of cytochalasin A (Cyto A) and cytochalasin B (Cyto B) on the results ofmicronucleus test on Chinese hamster lung (CHL) cells frequently used in micronucleus test.

The stress fiber structures formed by actin microfilaments were observed under fluorescence microscope, and the cytokinesis-blocking micronucleus test was performed to compare the multinuclear cell rate and micronucleus rate induced by Cyto A and Cyto B.

The cells were treated with different concentrations of Cyto A and Cyto B for 24 hours, and both treatment could significantly increase the multinuclear cell rate. For Cyto A and Cyto B treatment at 3.0 μg/ml, the multinuclear cell rate was 58% ± 12% and 72% ± 9%, respectively, compared with the control of 26% ± 7% (< 0.001). The multinuclear cell rate induced by Cyto A at 3.0 μg/ml was lower than that at 1.5 μg/ml. The micronucleus ratio of cells in Cyto A treatment group along with different concentration of MMC (0, 0.1 and 0.3 μg/ml) were 0.25% ± 0.16%, 1.98% ± 0.59% and 3.80% ± 0.90%, respectively; while the micronucleus ratio under similar conditions after Cyto B treatment was 0.32% ± 0.16%, 2.50% ± 0.61% and 5.05% ± 1.09%, respectively.

Although Cyto B showed slight better effects on establishing the multinucleated cell model, both Cyto A and Cyto B could be effectively used in the cytokinesis-blocking micronucleus test.

Cytochalasins; Micronucles test; Actins; Cytokinesis-block

WANG Qi, Email: sansan8251@sina.com; LUO Fei-ya, Email: feiya.luo@nifdc.org.cn

國(guó)家自然科學(xué)基金（81503347）；國(guó)家十三五“重大新藥創(chuàng)制”專項(xiàng)課題（2018ZX09201017）

汪祺，Email：sansan8251@sina.com；羅飛亞，Email：feiya.luo@nifdc.org.cn

2019-01-16

10.3969/j.issn.1673-713X.2019.02.003