龍 雨 江 花* 楊建波

（1 西南醫(yī)科大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合學(xué)院，四川 瀘州 646000；2 西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科，四川 瀘州 646099）

電針治療肥胖癥已在國(guó)內(nèi)普遍應(yīng)用，甚至有風(fēng)靡世界的趨勢(shì)，很多文獻(xiàn)顯示電針能夠降低肥胖個(gè)體的體質(zhì)量［1－3］，國(guó)內(nèi)王鴻度團(tuán)隊(duì)在“少陽(yáng)主骨”實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)電針足少陽(yáng)經(jīng)穴能夠降低去卵巢大鼠的體質(zhì)量［4］。我們進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)電針足少陽(yáng)經(jīng)穴能夠降低正常SD大鼠的體質(zhì)量 （P＜0.05）［5］，但未觀察電針后大鼠體內(nèi)脂肪變化，也未完全明確正常大鼠體質(zhì)量下降的原因。電針足少陽(yáng)經(jīng)穴不僅能降低病理性體質(zhì)量增加，還能在生理?xiàng)l件下改變體脂形成，這是一個(gè)

非常有趣的問(wèn)題。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察電針足少陽(yáng)經(jīng)穴后正常大鼠飲食、飲水、體內(nèi)脂肪變化及血清瘦素、ACTH等變化，試圖探討電針足少陽(yáng)經(jīng)穴降低正常大鼠體質(zhì)量的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 健康清潔級(jí)SD大鼠40只，雌雄各半，雄性（350±10） g，雌性 （300±10） g，成都達(dá)碩生物科技有限公司提供［合格證號(hào)：SYXK（川） 2013-065］，飼養(yǎng)于西南醫(yī)科大學(xué)城北動(dòng)物房，動(dòng)物房溫度20～26℃，相對(duì)濕度40%～70%，光暗周期 12 h，正常飲食及飲水。信封法編號(hào)，雙盲法將雌雄均分為電針組及對(duì)照組，共4組，每組10只，同組每5只飼養(yǎng)于1籠。

1.2 主要儀器及試劑 大名華龍牌無(wú)菌針灸針（豫食藥監(jiān)械（準(zhǔn)） 字 2014第 2270502號(hào)）（1寸 0.25×25 mm）、新華佗牌電子針療儀 SDZ-Ⅱ（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司）、大鼠血清瘦素 ELISA試劑盒（ENZO公司）、離心機(jī)（上海盧湘儀）、精密電子天平（d=0.1 mg，上海精科天美科學(xué)儀器有限公司），乙醚（成都金山化學(xué)試劑有限公司）、1%戊巴比妥鈉、采血針、EP管等。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 每日定時(shí)測(cè)量完所有大鼠的體質(zhì)量、飲食及飲水量后，開(kāi)始實(shí)驗(yàn)。電針組大鼠用少量乙醚麻醉至淺昏迷后立即取出，綁扎于自制的鼠板中，暴露出穴位，穴位定位參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》（新世紀(jì)第4版）。毫針針刺“環(huán)跳”穴（直刺約 7 mm），“陽(yáng)陵泉”穴（直刺約 5 mm），“懸鐘”穴（斜刺約 5 mm），實(shí)施平補(bǔ)平瀉手法5 s后，“環(huán)跳”穴及“陽(yáng)陵泉”穴連接電針儀，頻率15 Hz，波形疏密波，電壓1.5 V，治療時(shí)長(zhǎng) 10 min。電針組每日治療1次，連續(xù)治療5 d后休息2 d，所有穴位每日左右輪換。對(duì)照組飼養(yǎng)同電針組，但不予電針干預(yù)。在進(jìn)行上述所有干預(yù)時(shí)，各組大鼠均在同一空間，但保證每組之間不能聽(tīng)到別組干預(yù)的聲音，也不能見(jiàn)到別組干預(yù)的畫(huà)面。

1.4 標(biāo)本采集 4周后，將各組大鼠用 1%戊巴比妥鈉 4 mL/100 g腹腔注射麻醉，有齒鑷夾大鼠雙足確定其失去痛覺(jué)后，迅速開(kāi)腹，分離腹主動(dòng)脈，取動(dòng)脈血5～7 mL于 EP管中，常溫靜置 1 h后用離心機(jī)按2000 r/min離心 10 min，分離血清，置于 －80℃ 冰箱 24 h待用。將大鼠腹腔內(nèi)脂肪全部取出，稱(chēng)重并記錄。去除大鼠毛發(fā)、頭及內(nèi)臟，洗凈后將大鼠身體放入自制容器內(nèi)，參照相關(guān)文獻(xiàn)［6］，按其步驟計(jì)算大鼠體脂密度。從 －80℃冰箱中取出大鼠血清，按ELISA試劑盒步驟檢測(cè)大鼠血清瘦素，剩余血清送至西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科檢測(cè) ACTH、皮質(zhì)醇、睪酮、雌激素。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 所有數(shù)據(jù)用sigma Plot 10.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，行 t檢驗(yàn)，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）描述，P＜0.05則差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠體質(zhì)量、飲食量、飲水量比較 雄性大鼠經(jīng)電針治療后，與對(duì)照組相比飲食量降低（P＜0.01），飲水量降低 （P＜0.01），體質(zhì)量降低 （P＜0.05）。雌性大鼠經(jīng)電針治療后，與對(duì)照組相比飲食量降低（P＜0.05），飲水量降低（P＜0.01），體質(zhì)量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

表1 2組大鼠體質(zhì)量、飲食量、飲水量比較 （）

表1 2組大鼠體質(zhì)量、飲食量、飲水量比較 （）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 鼠數(shù) 雄性體質(zhì)量（g） 飲食（g/d） 飲水（mL/d）雌性體質(zhì)量（g） 飲食（g/d） 飲水（mL/d）電針組 20 394.42±15.28對(duì)照組 20 445.18±6.20*22.75±0.45 26.35±0.37**36.82±0.99 0.52±1.41**301.17±3.88 16.17±0.32 28.83±0.79 306.37±5.14 17.28±0.29* 33.37±1.13**

2.2 各組大鼠腹腔內(nèi)脂肪/體質(zhì)量、比重、體脂比較 雄性大鼠經(jīng)電針治療后，與對(duì)照組相比腹腔內(nèi)脂肪/體質(zhì)量、比重、體脂差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；雌性大鼠經(jīng)電針治療后，與對(duì)照組相比腹腔內(nèi)脂肪/體質(zhì)量比率降低（P＜0.01），比重和體脂差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表2。

表2 2組大鼠腹腔內(nèi)脂肪/體質(zhì)量、體脂、比重比較 （）

表2 2組大鼠腹腔內(nèi)脂肪/體質(zhì)量、體脂、比重比較 （）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

雄性腹腔內(nèi)脂肪/體質(zhì)量（g）雌性組別 鼠數(shù) 比重 體脂（%） 比重 體脂（%）電針組 20 0.511±0.058對(duì)照組 20 0.711±0.101腹腔內(nèi)脂肪/體質(zhì)量（g）1.082±0.0076.675±1.716 1.072±0.006 8.351±2.499 1.572±0.149 2.522±0.226**1.063±0.011 12.103±4.253 1.052±0.007 16.340±2.208

2.3 各組大鼠血清瘦素、ACTH等比較 經(jīng)電針治療后，雌雄電針組及對(duì)照組之間血清瘦素、ACTH等差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＞0.05），見(jiàn)表3～4。

表3 2組雄性大鼠血清瘦素、ACTH、皮質(zhì)醇、睪酮比較（）

表3 2組雄性大鼠血清瘦素、ACTH、皮質(zhì)醇、睪酮比較（）

組別 鼠數(shù)電針組 10 1835.293±576.080 302.816±51.582對(duì)照組 10 1443.810±238.164 206.134±31.801血清瘦素（pg/mL） ACTH(pg/mL) 皮質(zhì)醇（ng/mL） 睪酮(ng/mL)1.713±2.961 12.940±0.060 13.823±0.030 2.953±0.640

表4 2組雌性大鼠血清瘦素、ACTH、皮質(zhì)醇、雌激素比較（）

表4 2組雌性大鼠血清瘦素、ACTH、皮質(zhì)醇、雌激素比較（）

注：與對(duì)照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 鼠數(shù)電針組 10 2498.414±367.191 525.273±56.240對(duì)照組 10 1638.215±745.361 311.154±85.751血清瘦素（pg/mL） ACTH(pg/mL) 皮質(zhì)醇（ng/mL） 雌激素(pg/mL)51.970±4.890 14.313±0.077 14.543±0.078 46.350±3.990

3 討論

3.1 “少陽(yáng)主骨”之“骨”再探 本實(shí)驗(yàn)在國(guó)內(nèi)王鴻度團(tuán)隊(duì)“少陽(yáng)主骨”的理論基礎(chǔ)上，做了進(jìn)一步的研究?！端貑?wèn)·上古天真論》關(guān)于男女生長(zhǎng)發(fā)育的論述體現(xiàn)了人的生長(zhǎng)壯老已與骨的生長(zhǎng)壯老已密切相關(guān)。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的發(fā)展，有學(xué)者提出，骨至少可以分泌2種激素，并且與骨質(zhì)疏松、異位鈣化、腎病、糖尿病、肥胖癥等內(nèi)分泌及代謝性疾病存在復(fù)雜關(guān)聯(lián)［7］。在既往“少陽(yáng)主骨”系列研究中，已證明電針足少陽(yáng)膽經(jīng)經(jīng)穴能夠降低正常大鼠的體質(zhì)量［5］。而同樣的電針治療運(yùn)用于非足少陽(yáng)經(jīng)穴，大鼠的體質(zhì)量并沒(méi)有發(fā)生確切的改變（P＞0.05，n=5），說(shuō)明“少陽(yáng)主骨”理論與體質(zhì)量之間的關(guān)系值得進(jìn)一步的探討。在《說(shuō)文解字》之《卷四·骨部》記載：“（骨） 肉之覆也……亦肉中有骨也，從冎。有肉。去肉為冎，在肉為骨。古忽切。十五部，凡骨之蜀皆從骨。”冎，即小篆象去掉肉的骨型，意思是“剮”，從肉，表示骨與肉相連。說(shuō)明“少陽(yáng)主骨”理論中的“骨”，不應(yīng)該僅僅作為結(jié)構(gòu)支架，而應(yīng)該作為一個(gè)器官，與生長(zhǎng)代謝、體質(zhì)量變化有密切的關(guān)系。

3.2 電針與血清瘦素、ACTH等的關(guān)系 有文獻(xiàn)顯示，針灸治療能夠降低肥胖大鼠的血清瘦素，改善肥胖大鼠瘦素抵抗現(xiàn)象，降低大鼠體質(zhì)量［9］。瘦素是含有167個(gè)氨基酸殘基的多肽類(lèi)激素，主要由白色脂肪細(xì)胞分泌和產(chǎn)生，生理情況下脂肪分泌瘦素，瘦素進(jìn)入血液，然后與瘦素受體結(jié)合，通過(guò)循環(huán)系統(tǒng)作用于其靶器官來(lái)行使最關(guān)鍵的生理學(xué)調(diào)節(jié)功能——維持能量平衡。本次實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)電針組大鼠血清瘦素水平較對(duì)照組略有上升，但差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此與肥胖大鼠不同，電針足少陽(yáng)經(jīng)穴可能并不是通過(guò)影響血清瘦素水平來(lái)降低正常大鼠的體質(zhì)量。有文獻(xiàn)表明，ACTH可以調(diào)劑脂代謝［10］，性激素變化也與內(nèi)臟脂肪有一定的聯(lián)系［11］，本次實(shí)驗(yàn)，電針組大鼠的 ACTH、皮質(zhì)醇、睪酮及雌激素水平較對(duì)照組均沒(méi)有明顯的變化。綜上，電針足少陽(yáng)經(jīng)穴對(duì)正常大鼠上述激素影響較小，可能是通過(guò)其他途徑來(lái)改變正常大鼠的體質(zhì)量及體內(nèi)脂肪。

3.3 電針與大鼠食欲、體內(nèi)脂肪的關(guān)系 通過(guò)觀察大鼠的腹腔內(nèi)脂肪、體脂及比重變化，我們發(fā)現(xiàn)電針足少陽(yáng)經(jīng)穴能夠降低正常大鼠的體內(nèi)脂肪。既往實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，電針足少陽(yáng)經(jīng)穴能夠降低去卵巢大鼠的脛骨遠(yuǎn)端相對(duì)脂肪面積［4］，這可能和電針治療后，大鼠的血清骨鈣素改變有關(guān)。由成骨細(xì)胞合成及分泌的骨鈣素，大部分羧基化后在鈣離子協(xié)助下與羥磷灰石結(jié)合以后沉積在骨基質(zhì)里，那些少量的未被羧基化的骨鈣素進(jìn)入血液，共同參與機(jī)體的能量代謝［8］。但在將電針治療運(yùn)用于正常大鼠的實(shí)驗(yàn)中，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)針刺后大鼠血清骨鈣素有差異性改變［5］，但是本次實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)電針組大鼠的飲食量和飲水量較對(duì)照組減少，電針可能直接對(duì)大鼠的食欲中樞產(chǎn)生影響，導(dǎo)致食欲變化，最終出現(xiàn)體質(zhì)量及脂肪量的變化。

3.4 未來(lái)展望 同人類(lèi)一樣，大鼠也主要通過(guò)下丘腦來(lái)調(diào)節(jié)攝取飲食的需要量，其中下丘腦弓狀核部分顯得尤為重要，其擁有產(chǎn)生促食欲的神經(jīng)肽等食欲調(diào)節(jié)信號(hào)，同時(shí)缺少血腦屏障，是與血循環(huán)中的瘦素、胰島素、性激素等外周信號(hào)直接溝通的重要部位［12－13］。有實(shí)驗(yàn)證明，經(jīng)電針治療后，肥胖大鼠的血清瘦素降低，但是下丘腦瘦素受體含量增加［9］，因此瘦素能更有效地發(fā)揮其作用，降低大鼠的體質(zhì)量。但是在本次實(shí)驗(yàn)中，由于經(jīng)費(fèi)有限，人力不足，我們并未檢測(cè)大鼠的下丘腦瘦素受體含量，也未明確大鼠食欲降低的具體信號(hào)通路，這些問(wèn)題的解決有待于未來(lái)的進(jìn)一步研究。