葉渟渟 王雯 張曉蘭

1福建醫(yī)科大學(xué)福州總醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)院，福州 350025；2福州總醫(yī)院消化內(nèi)科，福州 350025

胰腺癌是一種早期確診率低、預(yù)后差、病死率極高的惡性疾病，其發(fā)病率在全球范圍內(nèi)呈逐年上升趨勢。超過95%的胰腺癌是胰腺導(dǎo)管腺癌(pancreatic ductal adenocarcinoma，PDAC)[1]，它通常由胰腺上皮內(nèi)瘤變(pancreatic intraepithelial neoplasias，PanINs)發(fā)展而來[2]。基于形態(tài)學(xué)異型程度，PanINs又被進一步分為PanIN-1、PanlN-2和PanlN-3。甲狀腺激素受體相互作用蛋白6(thyroid hormone receptor interactor 6，TRIP6)是zyxin 家族成員之一，可參與多種蛋白的功能調(diào)節(jié)。它作為一個平臺可募集大量分子，通過調(diào)節(jié)肌動蛋白、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，參與肌動蛋白細胞骨架重組、細胞黏附、遷移、抗凋亡應(yīng)答及轉(zhuǎn)錄調(diào)控。TRIP6結(jié)構(gòu)的特異性和功能的多樣性使其在多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中扮演著重要的角色[3]。本研究檢測TRIP6蛋白在正常胰腺組織、PanINs、PDAC中的表達，探討其在PDAC發(fā)生中的作用，以期為闡明PDAC的發(fā)病機制及臨床診療思路提供新的線索。

材料與方法

一、胰腺組織標本

收集2012年1月至2016年12月福州總醫(yī)院病理科存檔的胰腺組織石蠟標本111例。其中正常胰腺組織43例(胰腺外傷6例，癌旁組織32例，異位胰腺5例)、PanINs 18例(86個病灶，其中25個病灶為PanIN-1，33個為PanIN-2，28個為PanIN-3)、PDAC 50例。PanlNs的分級參照常曉燕等[4]報道的PanINs分類系統(tǒng)。病例入選標準：(1)術(shù)前未行輔助放化療；(2)所有標本均經(jīng)術(shù)后病理證實。50例PDAC患者臨床病理資料完整。

二、方法

所有標本常規(guī)石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，以兔抗人TRIP6多克隆抗體進行SP法染色。檢測步驟嚴格按試劑盒說明書進行。兔抗人TRIP6多克隆抗體購自美國Abcam公司，工作濃度為1∶100，非免疫胎牛血清、PBS緩沖液、內(nèi)源性過氧化酶阻斷劑、第二代即用型免疫組織化學(xué)EliVisionTMplus廣譜試劑盒、DAB顯色試劑盒等均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。以細胞質(zhì)和(或)胞核內(nèi)觀察到棕黃色顆粒為陽性。由兩名病理科醫(yī)師獨立閱片，每例組織切片隨機采取5個視野拍攝圖片，應(yīng)用IPP(Image-Pro Plus 6.0)專業(yè)圖像分析軟件進行圖像分析，每張圖片獲取陽性區(qū)域的吸光度值(IOD)，除以陽性區(qū)域面積(Area)，獲取AOD值表示免疫組織化學(xué)評分(immunohistochemistry score，IHCS)[5]，取5個視野的AOD均值作為每例標本的IHCS。根據(jù)王偉等[6]方法，取IHCS第75百分位數(shù)(P75)作為TRIP6表達高低的臨界值。

三、統(tǒng)計學(xué)處理

結(jié) 果

一、不同胰腺組織TRIP6的表達量

TRIP6主要表達在癌細胞的胞質(zhì)，少數(shù)在胞核表達。正常胰腺組織TRIP6陰性表達或僅有極少量表達(圖1A)；PanINs組織TRIP6表達隨著組織異型程度增加由弱陽性表達逐漸增強(圖1B～1D)；PDAC組織TRIP6強陽性表達(圖1E)。正常胰腺組織及PanIN-1、PanIN-2、PanIN-3、PDAC組織TRIP6表達的IHCS分別為(0.010±0.003)、(0.029±0.003)、(0.055±0.014)、(0.090±0.025)、(0.094±0.030)分，各組間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。組間兩兩比較結(jié)果顯示，正常胰腺組TRIP6表達量均顯著低于其他4組，PanIN-1組表達量均顯著低于除正常胰腺組外的其他3組，PanIN-2組表達量顯著低于PanIN-3組和PDAC組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均<0.05)；PanIN-3組表達量雖然低于PDAC組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.13)。

圖1 正常胰腺組織(1A)及PanIN-1(1B)、PanIN-2(1C)、PanIN-3(1D)、PDAC (1E)組織TRIP6的表達(免疫組化 ×100)

二、PDAC組織TRIP6表達與臨床病理特征的關(guān)系

以PDAC組織TRIP6表達量0.104分為界分為低表達和高表達兩組，結(jié)果顯示，PDAC組織TRIP6表達與術(shù)前血清CA19-9水平、胰腺癌分化程度、神經(jīng)浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)，而與患者性別、年齡及腫瘤大小、腫瘤部位、血管浸潤、浸潤深度、TNM分期無關(guān)(表1)。

討 論

胰腺癌是目前世界范圍內(nèi)惡性程度最高的腫瘤之一，其1年和5年生存率僅為25%和5%[7]。由于缺乏有效的早期檢測指標，胰腺癌被發(fā)現(xiàn)時往往已是晚期，即使行外科手術(shù)切除也不能獲得滿意的療效。目前用于協(xié)助診斷胰腺癌的主要有CT、MRI、EUS-FNA、ERCP以及腫瘤標志物CA19-9、CEA等，但早期診斷仍十分困難。研究已經(jīng)證實，胰腺癌主要從PanINs進展而來，因此深入研究胰腺癌前病變的分子變化，有助于早診斷、早干預(yù)，防范于未然。

TRIP6是zyxin家族成員之一，主要定位于胞質(zhì)或黏著斑(Fas)，并可穿梭至細胞核，充當轉(zhuǎn)錄輔助因子[2]。Zhao等[8]研究表明，TRIP6的過表達增加AKT的活化并抑制了FOXO3a的轉(zhuǎn)錄活性，從而促進肝癌細胞的增殖。Grunewald等[9]研究發(fā)現(xiàn)，TRIP6在原發(fā)性尤因肉瘤(ES)中為高度過表達，利用siRNA技術(shù)沉默ES細胞TRIP6表達可促進ES細胞的增殖和侵襲。Pavlíková等[10]報道，MCF-7乳腺癌細胞TRIP6表達上調(diào)，特異性沉默TRIP6表達可導(dǎo)致生長的抗性MCF-7細胞數(shù)量減少。Lin等[11]報道，膠質(zhì)母細胞瘤TRIP6表達上調(diào)，且與臨床預(yù)后相關(guān)，沉默TRIP6表達可抑制核p27KIP1的表達，阻礙膠質(zhì)母細胞瘤的增殖。此外TRIP6還介導(dǎo)了多種腫瘤細胞的遷移，包括鼻咽癌[12]、尤因肉瘤[13]、卵巢腫瘤[11]等。由此可見，TRIP6在改變癌細胞生物學(xué)特性、促進腫瘤進展中發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。

表1PDAC組織TRIP6蛋白表達與臨床病理特征的關(guān)系[例(%)]

臨床病理特征例數(shù)TRIP6蛋白低表達高表達P值性別0.747 男2719(70.4)8(29.6) 女2318(78.3)5(23.7)年齡(歲)0.521 <601913(68.4)6(31.6) ≥603124(77.4)7(22.6)CA19-9(KU/L)0.000 ≤373130(96.8)1(3.2) >37197(36.8)12(63.2)腫瘤大小(cm)0.734 <41411(78.6)3(21.4) ≥43626(72.2)10(27.8)腫瘤部位0.445 胰頭3930(76.9)9(23.1) 胰體尾117 (63.6)4(36.4)分化程度0.019 高2018(90.0)2(10.0) 中1713(76.5)4(23.5) 低136(46.2)7(53.8)神經(jīng)浸潤0.000 有198(42.1)11(57.9) 無3129(93.5)2(64.5)血管浸潤0.332 有2718(66.7)9(33.3) 無2319(82.6)4(17.4)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移0.013 有72(28.6)5(71.4) 無4335(81.4)8(18.6)遠處轉(zhuǎn)移0.018 有51(25.0)4(75.0) 無4536(80.0)9(20.0)浸潤深度0.120 T2129(75.0)3(25.0) T33125(80.6)6(19.4) T473(42.9)4(57.1)TNM分期0.928 Ⅰ+Ⅱ3828(73.7)10(23.6) Ⅲ+Ⅳ129(75.0)3(25.0)

然而國內(nèi)外對于TRIP6與胰腺癌的研究卻鮮有報道，且無有關(guān)于其在胰腺癌前病變中表達的研究。本研究結(jié)果顯示，正常胰腺組織無TRIP6表達或僅有少量表達；而各級別PanINs、PDAC中呈不同程度的陽性表達，且隨著組織異型程度增加，TRIP6的表達逐漸增強，組間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，表明TRIP6表達增加可能是PDAC發(fā)生的早期事件，且可能參與了PDAC的演進全過程。通過PDAC的TRIP6表達與臨床病理特征關(guān)系的分析，顯示TRIP6表達與PDAC神經(jīng)浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、分化程度、血清CA19-9水平明顯相關(guān)。神經(jīng)浸潤是胰腺癌的主要特征，發(fā)生率高達80%～100%[14-15]，可導(dǎo)致腫瘤擴散及產(chǎn)生癌性疼痛。本課題組既往研究已證實TRIP6在具有高神經(jīng)浸潤能力的人胰腺癌Capan-2細胞株中表達強于低神經(jīng)浸潤能力的PANC1細胞株[16]，表明TRIP6在胰腺癌神經(jīng)浸潤的過程中發(fā)揮一定作用。CA19-9是目前公認且用于胰腺癌診斷及判斷預(yù)后的實驗室指標。本研究發(fā)現(xiàn)CA19-9升高的PDAC患者TRIP6的IHCS較高，CA19-9有望成為胰腺癌預(yù)后的評估指標。TRIP6表達與其他臨床病理特征無相關(guān)性，可能與病例選擇、病例數(shù)量及TRIP6高低表達的臨界值選擇等方面的因素有關(guān)。

利益沖突所有作者聲明不存在利益沖突