李文凱，李新敏，艾亮

鄭州市婦幼保健院超聲診斷科，鄭州 4500120

乳腺癌是目前常見的一種女性惡性腫瘤，其發(fā)病率在女性惡性腫瘤中居首位，而且近年來由于女性面臨壓力的增加以及環(huán)境因素的改變等綜合因素使乳腺癌的發(fā)病率有升高趨勢(shì)[1-2]。如能在發(fā)病早期采取積極的治療措施，能顯著提高臨床治療效果，改善患者預(yù)后。目前，臨床對(duì)乳腺癌的診斷方法較多，如超聲影像、免疫組化、基因檢測(cè)等，但由于各種主觀因素的影響，其結(jié)果很難標(biāo)準(zhǔn)化[3-5]。腫瘤標(biāo)志物是臨床常用的早期篩查乳腺癌的重要手段之一，一種惡性腫瘤可以釋放多種腫瘤標(biāo)志物，而一種腫瘤標(biāo)志物可以反映多種腫瘤。目前，科學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，多種腫瘤標(biāo)志物都與乳腺癌有關(guān)，但任何一種單獨(dú)檢測(cè)時(shí)的靈敏度均較低，尤其是對(duì)于早期患者非常容易漏診[6-8]。此外，腫瘤標(biāo)志物檢測(cè)不能直觀地反映病灶的大小、形態(tài)，對(duì)指導(dǎo)臨床治療意義較小。為此，本研究探討彩色多普勒超聲聯(lián)合低氧誘導(dǎo)因子-1α（hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α）、STAT4激活蛋白抑制劑（protein inhibitor of activated STAT 4，PIASY）檢測(cè)用于乳腺癌診斷的效能，為臨床更加準(zhǔn)確、及時(shí)地診斷乳腺癌提供參考。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2015年3月至2016年11月在鄭州市婦幼保健院就診的103例乳腺腫塊患者作為研究組。納入標(biāo)準(zhǔn)：有乳腺腫塊；均在手術(shù)前采集血清標(biāo)本且行超聲檢查。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他惡性腫瘤、肝腎功能異常、婦科炎癥、結(jié)核以及內(nèi)科合并癥者。研究組患者均為女性，年齡31～72歲，平均（42.3±3.2）歲；腫塊直徑7～104 mm，平均（48.2±11.2）mm；左側(cè)病變59例，右側(cè)病變42例，雙側(cè)病變2例。另選擇同期在鄭州市婦幼保健院進(jìn)行健康體檢的30例女性作為對(duì)照組，年齡30～71歲，平均（41.8±2.3）歲。兩組研究對(duì)象的年齡比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，入組研究對(duì)象及家屬均對(duì)本研究知情同意，并簽署知情同意書。

1.2 檢查方法

1.2.1 多普勒超聲檢查 采用Sequia512型彩色多普勒超聲診斷儀，探頭頻率為10～13 MHz。按常規(guī)檢查方法先檢查腫塊的形態(tài)、大小、邊界、位置、內(nèi)方及后方回聲、鈣化情況、縱橫比、與周邊組織的關(guān)聯(lián)、腋窩淋巴結(jié)是否腫大等二維超聲特征。在此基礎(chǔ)上，探測(cè)腫塊內(nèi)部及周圍血流狀況。血流狀況選擇最高流速處實(shí)行頻譜檢測(cè)，參數(shù)包括阻力指數(shù)（resistance index，RI）、搏動(dòng)指數(shù)（pulsatility index，PI）、最大血流速度（maximum blood flow velocity，Vmax），共檢測(cè)3次，取平均值。

1.2.2 腫瘤標(biāo)志物檢測(cè) 采用微創(chuàng)乳腺活檢技術(shù)，通過免疫組化方法評(píng)估乳腺組織標(biāo)本中HIF-1α和PIASY的表達(dá)情況。鼠抗人單克隆抗體購自上海麥莎公司，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色試劑盒購自南京建成公司。采集的標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋，切片、染色，采用免疫組化方法進(jìn)行檢測(cè)，所有操作均根據(jù)說明書進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判定

1.3.1 多普勒超聲診斷 惡性判斷標(biāo)準(zhǔn)：①邊緣呈毛刺狀；②形態(tài)不規(guī)則；③內(nèi)部回聲不均勻；④后方回聲減弱；⑤邊界不清楚；⑥縱橫比＞1；⑦存在腋下淋巴結(jié)腫大；⑧RI≥0.7。

1.3.2 腫瘤標(biāo)志物診斷 HIF-1α主要定位于細(xì)胞核，PIASY主要定位于細(xì)胞膜、細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)。每張切片在光鏡下隨機(jī)選取10個(gè)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，根據(jù)陽性細(xì)胞所占比例及染色程度分別計(jì)分。按陽性細(xì)胞所占比例：無陽性細(xì)胞為0分，1%～10%為1分，11%～50%為2分，51%～80%為3分，＞80%為4分；按染色強(qiáng)度：基本不著色為0分，呈淺黃色為1分，呈棕黃色為2分，呈棕褐色為3分；陽性細(xì)胞所占比例評(píng)分與染色強(qiáng)度評(píng)分相乘后得出綜合評(píng)分，綜合評(píng)分＞4分為陽性表達(dá)[9]。

1.3.3 乳腺癌診斷 多普勒超聲、HIF-1α及PIASY 3項(xiàng)診斷指標(biāo)中有任何一項(xiàng)診斷為惡性或陽性則判定為乳腺癌，3項(xiàng)均為良性或陰性方可排除乳腺癌。診斷價(jià)值分析：以病理診斷結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，靈敏度=真陽性例數(shù)（/真陽性+假陰性）例數(shù)×100%，特異度=真陰性例數(shù)（/真陰性+假陽性）例數(shù)×100%，準(zhǔn)確度=（真陰性+真陽性）例數(shù)（/真陽性+真陰性+假陽性+假陰性）例數(shù)×100%。Kappa值為診斷方法與金標(biāo)準(zhǔn)的一致性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 22.0統(tǒng)-計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)及率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 病理組織檢查結(jié)果

103例乳腺腫塊患者中，經(jīng)病理組織檢查確診乳腺增生患者32例，良性腫瘤患者47例，乳腺癌患者24例。

2.2 HIF-1α、PIASY陽性表達(dá)情況的比較

研究組患者 HIF-1α、PIASY 陽性表達(dá)率均明顯高于對(duì)照組健康人群，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。（表1）

表1 研究組患者與對(duì)照組健康人群HIF-1α、PIASY陽性表達(dá)情況的比較[n（%）]

2.3 彩色多普勒超聲單獨(dú)及聯(lián)合腫瘤標(biāo)志物診斷乳腺癌與病理診斷結(jié)果的對(duì)照

彩色多普勒超聲診斷結(jié)果表明有41例乳腺癌患者，62例乳腺良性疾病患者；彩色多普勒超聲聯(lián)合HIF-1α、PIASY診斷結(jié)果表明有32例乳腺癌患者，71例乳腺良性疾病患者（表2）。彩色多普勒超聲聯(lián)合HIF-1α、PIASY對(duì)乳腺癌診斷的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確度及Kappa值均高于單獨(dú)采用彩色多普勒超聲（表3）。

表2 彩色多普勒超聲單獨(dú)及聯(lián)合腫瘤標(biāo)志物診斷乳腺癌與病理診斷結(jié)果的對(duì)照

表3 彩色多普勒超聲單獨(dú)及聯(lián)合腫瘤標(biāo)志物對(duì)乳腺癌的診斷價(jià)值

3 討論

女性乳腺癌是目前威脅女性健康及生命安全的惡性腫瘤。近年來由于社會(huì)環(huán)境的劇烈改變，乳腺癌的發(fā)病率呈逐漸升高的趨勢(shì)。對(duì)于多數(shù)腫瘤而言，在其發(fā)病早期進(jìn)行確診，采取積極有效的治療措施，往往能夠顯著延長生存期，改善患者預(yù)后。因此，如何有效提高乳腺癌早期診斷的準(zhǔn)確度已成為近年來的熱點(diǎn)課題。越來越多的研究表明腫瘤標(biāo)志物水平的升高通常會(huì)在患者表現(xiàn)出較為明顯的臨床癥狀之前的幾個(gè)月出現(xiàn)，因此以腫瘤標(biāo)志物作為腫瘤早期診斷的指標(biāo)具有較高的研究價(jià)值[10]。但由于多種腫瘤均會(huì)導(dǎo)致腫瘤標(biāo)志物水平的升高，使腫瘤標(biāo)志物用于特定腫瘤診斷時(shí)的特異度較低。在此背景下，本研究旨在探討彩色多普勒超聲聯(lián)合HIF-1α、PIASY檢測(cè)用于乳腺癌診斷的靈敏度與準(zhǔn)確度，為臨床更早期診斷乳腺癌提供參考。

HIF-1α是一種腫瘤標(biāo)志物，當(dāng)細(xì)胞或組織內(nèi)的氧含量下降時(shí)，會(huì)抑制機(jī)體對(duì)HIF-1α的降解，從而使其在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)積聚，同時(shí)可發(fā)生核轉(zhuǎn)位，并與β亞基結(jié)合形成二聚體，通過該二聚體激活目標(biāo)基因的轉(zhuǎn)錄，發(fā)揮生物學(xué)活性[11-12]。研究分析表明其在良性腫瘤及正常組織中基本處于正常水平，而在惡性腫瘤組織中的表達(dá)水平顯著升高[13]。PIASY是一種能夠抑制信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及轉(zhuǎn)錄激活蛋白（signal transducer and activator of transcription，STAT）轉(zhuǎn)錄活性的蛋白質(zhì)，在缺氧的環(huán)境下，其能通過抑制SIRT1基因轉(zhuǎn)錄而促進(jìn)腫瘤的轉(zhuǎn)移[14]。本研究結(jié)果也表明，研究組患者HIF-1α、PIASY陽性表達(dá)率均明顯高于對(duì)照組健康人群，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），與上述研究結(jié)果基本相符。

本研究103例乳腺腫塊患者中，經(jīng)病理組織檢查確診乳腺增生患者32例，良性腫瘤患者47例，乳腺癌患者24例。術(shù)前彩色多普勒超聲診斷結(jié)果表明有41例乳腺癌患者，多普勒超聲聯(lián)合HIF-1α、PIASY診斷結(jié)果表明有32例乳腺癌患者。通過分析表明，彩色多普勒超聲聯(lián)合HIF-1α、PIASY對(duì)乳腺癌診斷的靈敏度、特異度及準(zhǔn)確度分別為87.50%、86.08%和86.41%，均高于單獨(dú)采用彩色多普勒超聲，且與金標(biāo)準(zhǔn)具有更高的一致性。其原因可能是由于彩色多普勒超聲能夠清楚顯示乳腺腫塊的形態(tài)和組織結(jié)構(gòu)，根據(jù)聲像學(xué)特征對(duì)腫瘤的良惡性做出初步判斷，而且能夠顯示腫塊有無毛刺、鋸齒樣結(jié)構(gòu)改變，邊緣的光滑程度，實(shí)質(zhì)內(nèi)有無細(xì)小的鈣化灶。而腫瘤標(biāo)志物的檢測(cè)具有較高的靈敏度，因此二者聯(lián)合應(yīng)用可顯著提高對(duì)乳腺癌診斷的準(zhǔn)確度、特異度以及靈敏度。

綜上所述，彩色多普勒超聲聯(lián)合HIF-1α、PIASY檢測(cè)對(duì)乳腺癌診斷的靈敏度與準(zhǔn)確度均較高，具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。