黃慧雅，陸蔭英，謝 震

溶瘤病毒是指能通過(guò)不同的調(diào)控機(jī)制在腫瘤細(xì)胞內(nèi)復(fù)制進(jìn)而裂解腫瘤細(xì)胞，但不影響正常細(xì)胞生長(zhǎng)狀況的一類病毒。其在腫瘤細(xì)胞裂解的過(guò)程中會(huì)釋放腫瘤特異性抗原，進(jìn)而激活機(jī)體特異性免疫反應(yīng)。所以溶瘤病毒可以通過(guò)直接裂解和免疫作用兩種方式殺傷腫瘤細(xì)胞。溶瘤病毒在臨床上的應(yīng)用最早可以追溯到19世紀(jì)末，一名患有白血病的42歲女子在一次疑似感染流感病毒后腫瘤忽然痊愈。1912年意大利醫(yī)生報(bào)道了一個(gè)晚期的宮頸癌患者在注射狂犬病疫苗后病情明顯緩解的案例。溶瘤病毒臨床研究和治療在20世紀(jì)50年代和70年代出現(xiàn)過(guò)短暫的熱潮，但由于溶瘤病毒易于被人體免疫系統(tǒng)清除而導(dǎo)致療效不能持續(xù)的缺點(diǎn)，之后經(jīng)歷了一段研究低迷期。至20世紀(jì)90年代，重組病毒基因組改造技術(shù)逐漸成熟，大大提高了溶瘤病毒在腫瘤治療方面的效果、特異性和安全性，一批抗腫瘤溶瘤病毒藥物陸續(xù)成功上市。2015年，美國(guó)FDA批準(zhǔn)安進(jìn)公司的溶瘤單純皰疹病毒talimogene laherparepvec（T-VEC）用于治療黑色素瘤。同年12月T-VEC又獲得歐盟批準(zhǔn)用于治療未轉(zhuǎn)移至骨骼、腦部、肺部或其他臟器的不可切除的Ⅲb、Ⅲc、ⅣM1a期黑色素瘤。T-VEC的成功極大地推動(dòng)了溶瘤病毒在腫瘤治療領(lǐng)域的研發(fā)。本篇總結(jié)了溶瘤病毒在腫瘤治療領(lǐng)域的最新研究進(jìn)展，對(duì)溶瘤病毒種類變化、結(jié)構(gòu)改進(jìn)、參與腫瘤免疫治療的機(jī)制以及臨床應(yīng)用現(xiàn)狀及未來(lái)發(fā)展等方面進(jìn)行了詳細(xì)介紹，深入探討了合成生物學(xué)對(duì)優(yōu)化溶瘤病毒治療技術(shù)平臺(tái)的開(kāi)發(fā)潛能。

1 溶瘤病毒的種類及研發(fā)現(xiàn)狀

目前應(yīng)用于腫瘤臨床治療的溶瘤病毒種類很多，大致可以分為兩大類：一類是非基因編輯病毒，多為天然存在未經(jīng)基因編輯的病毒；另一類是經(jīng)過(guò)基因編輯改造，能夠特異性地在腫瘤細(xì)胞中包裝復(fù)制的病毒（表1）。

表1 溶瘤病毒抗腫瘤治療藥物信息匯總Table 1 Information summary of oncolytic viruses anti-tumor drug

1.1 非基因編輯型溶瘤病毒 非基因編輯病毒主要以M1病毒、呼腸孤病毒、新城疫病毒為代表[1]。M1病毒在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中對(duì)多種腫瘤有治療效果。通過(guò)尾靜脈將M1病毒注射到小鼠模型中，發(fā)現(xiàn)其顆粒主要集中在腫瘤組織，能有效抑制腫瘤生長(zhǎng)。并且與抗癌藥物含纈酪肽蛋白抑制劑聯(lián)用可顯著增強(qiáng)M1病毒的抗腫瘤活性，增幅高達(dá)3600倍[2]。

呼腸孤病毒可以特異地在Ras信號(hào)通路激活的腫瘤細(xì)胞中包裝復(fù)制，且不影響人體正常細(xì)胞[3]，已被用于多種腫瘤的治療。多個(gè)臨床Ⅰ期和Ⅱ期的試驗(yàn)結(jié)果顯示，呼腸孤病毒可以有效控制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，并且在II期臨床試驗(yàn)中幾乎未觀察到3～4級(jí)不良反應(yīng)，患者出現(xiàn)最多的不良反應(yīng)為發(fā)熱（約86%），還有部分患者表現(xiàn)出寒顫、肌痛、疼痛、疲勞和惡心等癥狀[4-8]。2017年，一項(xiàng)利用Reolysin治療晚期轉(zhuǎn)移性乳腺癌患者的臨床II期研究數(shù)據(jù)表明，在與紫杉醇聯(lián)用治療的患者中，總生存期從10.4個(gè)月延長(zhǎng)到17.4個(gè)月，Reolysin獲得美國(guó)FDA快速通道批準(zhǔn)用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌聯(lián)合治療。作為一款可以通過(guò)靜脈注射的溶瘤病毒治療藥物，Reolysin的臨床應(yīng)用對(duì)溶瘤病毒抗腫瘤藥物的研發(fā)具有里程碑式的意義。

新城疫病毒是感染禽類神經(jīng)系統(tǒng)和呼吸系統(tǒng)的病毒，可特異性的在哺乳動(dòng)物的腫瘤細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，同時(shí)產(chǎn)生抗腫瘤細(xì)胞因子而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞壞死。目前已經(jīng)應(yīng)用于臨床試驗(yàn)研究的代表性藥物，主要有PV701和NDV-HUJ[9-10]。腫瘤細(xì)胞由于缺乏干擾素介導(dǎo)的抗病毒反應(yīng)，無(wú)法像正常細(xì)胞一樣清除病毒顆粒，而PV701可以特異性地在腫瘤細(xì)胞中復(fù)制進(jìn)而裂解腫瘤細(xì)胞。2002年在一項(xiàng)靜脈注射PV701治療79例實(shí)體瘤患者的Ⅰ期臨床試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，患者在第一次給藥后出現(xiàn)的流感樣癥狀隨著后續(xù)治療的延續(xù)，不良反應(yīng)次數(shù)和反應(yīng)程度均降低。在較高劑量水平時(shí)療效顯著，無(wú)進(jìn)展生存時(shí)間為4～31個(gè)月。治療11個(gè)月后通過(guò)電子顯微鏡觀察1例患者的腫瘤組織，發(fā)現(xiàn)了PV701顆粒從腫瘤細(xì)胞膜釋放的證據(jù)；同時(shí)通過(guò)組織學(xué)檢查觀測(cè)到腫瘤組織中有明顯的T淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞浸潤(rùn)[11]。在對(duì)11例惡性神經(jīng)性肉芽腫患者使用NDV-HUJ株治療的臨床試驗(yàn)中，有1例患者在3個(gè)月內(nèi)病情得到完全緩解，其余患者均未出現(xiàn)惡化現(xiàn)象，也沒(méi)有嚴(yán)重的不良反應(yīng)發(fā)生，在患者的尿、血液、唾液以及腫瘤切片上均能檢測(cè)到該病毒[9]。Schirrmacher等[12]開(kāi)發(fā)了一種雙特異性抗CD28融合蛋白（bsHN-CD28），并將之與疫苗ATV-NDV連接。這種病毒修飾的自體腫瘤細(xì)胞疫苗在結(jié)腸癌患者肝轉(zhuǎn)移切除后的Ⅰ期治療中顯示出治療效果。在對(duì)14例晚期結(jié)直腸癌患者進(jìn)行了以bsHN-CD 28為載體的ATV-NDV疫苗治療后無(wú)嚴(yán)重不良反應(yīng)記錄。所有患者在5次治療中至少有1次表現(xiàn)出抗腫瘤的T細(xì)胞免疫反應(yīng)。

1.2 基因編輯型溶瘤病毒 臨床試驗(yàn)網(wǎng)站（www.clinicaltrials.gov）的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示腺病毒、單純皰疹病毒（herpes simplex virus,HSV）、痘病毒等可通過(guò)基因改造而廣泛應(yīng)用于溶瘤病毒的抗腫瘤治療。

腺病毒作為溶瘤病毒藥物具有十分顯著的優(yōu)勢(shì)：①易于制備和純化產(chǎn)生較高的病毒滴度，最高可達(dá)到1010～1012pfu；②基因組長(zhǎng)度為36 kb，易于進(jìn)行基因改造；③腺病毒DNA不會(huì)整合到感染的細(xì)胞基因組中，安全性比較高；④可以感染除血細(xì)胞外的多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞。但腺病毒自身免疫原性比較高，人體內(nèi)存在腺病毒的中和抗體，溶瘤腺病毒只能通過(guò)瘤內(nèi)注射方式治療腫瘤，限制了其在臨床上的應(yīng)用。

目前溶瘤腺病毒主要有以下幾種調(diào)控方式：①刪除E1A CR2區(qū)或E1B55K基因，通過(guò)互補(bǔ)腫瘤細(xì)胞的P53基因表達(dá)缺陷，調(diào)控腺病毒在腫瘤細(xì)胞中特異表達(dá)[13]；②利用腫瘤特異性啟動(dòng)子調(diào)控E1A基因在腫瘤細(xì)胞中特異表達(dá)[14-16]；③通過(guò)基因編輯改造腺病毒衣殼蛋白結(jié)構(gòu)，特異性識(shí)別腫瘤細(xì)胞表面受體實(shí)現(xiàn)對(duì)腫瘤細(xì)胞的特異性感染[17]。1987年Barker等[18]構(gòu)建基因重組溶瘤腺病毒ONYX-015（d11520），并且通過(guò)瘤內(nèi)注射的方式嘗試治療頭頸癌、胰腺癌和再發(fā)性肉芽腫瘤等，臨床試驗(yàn)中患者表現(xiàn)出感冒樣癥狀和局部注射疼痛，但沒(méi)有發(fā)現(xiàn)嚴(yán)重的不良反應(yīng)。在頭頸癌的臨床試驗(yàn)中，注射部位在注射后10 d內(nèi)可檢測(cè)到腺病毒DNA，但并未在周圍組織中觀測(cè)到病毒增殖。單用ONYX-015（d11520）治療客觀緩解率并不理想（＜20%），而聯(lián)用順鉑等化療藥物后客觀緩解率提高到63%[19-20]。安柯瑞是在中國(guó)獲批上市的人5型基因重組腺病毒，結(jié)構(gòu)類似于ONYX-015（d11520），主要用于頭頸癌的治療[21]。CG7060和CG7870利用前列腺特異性抗原（prostate specific antigen,PSA）啟動(dòng)子調(diào)控腺病毒E1A基因在前列腺癌細(xì)胞中特異性表達(dá)。在局部再發(fā)性前列腺癌的I期臨床試驗(yàn)中，未發(fā)現(xiàn)受試者有嚴(yán)重的不良反應(yīng)。聯(lián)用多西他賽，36%的患者PSA水平下降，27%的患者6個(gè)月內(nèi)觀測(cè)到無(wú)腫瘤進(jìn)展，但之后的研究并沒(méi)有提供更好的結(jié)果[22]。由于腺病毒復(fù)制速度有限，并且人體內(nèi)存在大量腺病毒中和抗體，單獨(dú)依賴腺病毒的溶瘤作用治療腫瘤效果十分有限。大量研究嘗試通過(guò)利用溶瘤腺病毒表達(dá)免疫效應(yīng)因子來(lái)提高抗癌效果，部分研究在小鼠實(shí)驗(yàn)水平已經(jīng)取得了不錯(cuò)的進(jìn)展，目前處于臨床試驗(yàn)的不同階段[23-25]。但由于目前溶瘤腺病毒的主要調(diào)控機(jī)制仍然以單一機(jī)制為主，在臨床可以觀測(cè)到病毒在正常組織泄露的現(xiàn)象。因此如何實(shí)現(xiàn)溶瘤腺病毒在臨床水平的嚴(yán)謹(jǐn)控制仍然是一個(gè)值得研究的重大課題。

2015年美國(guó)FDA批準(zhǔn)T-VEC用于黑色素瘤的治療。T-VEC去除了HSV-1型的感染細(xì)胞蛋白（infected cell protein,ICP）34.5和ICP47，并可在腫瘤細(xì)胞內(nèi)特異表達(dá)集落刺激因子（granulocytemacrophage colony-stimulating factor,GM-CSF），進(jìn)而特異性殺傷腫瘤細(xì)胞。HSV-1作為溶瘤病毒有以下幾個(gè)特征：①可以感染包括血細(xì)胞在內(nèi)的大多數(shù)細(xì)胞；②不需要很高的感染復(fù)數(shù)就可以有效殺死腫瘤細(xì)胞；③基因組長(zhǎng)152 kb，可攜帶較大片段外源基因[26]。HSV-1的ICP34.5可以與宿主的蛋白磷酸酶1結(jié)合，解除蛋白激酶R（protein kinase R,PKR）的抗病毒作用。在正常細(xì)胞中，缺失ICP34.5的HSV-1不能阻止磷酸化PKR的抗病毒作用，無(wú)法復(fù)制；而在腫瘤細(xì)胞中由于PKR含量低，病毒仍可復(fù)制[27]。除了去除ICP34.5因子，T-VEC還刪除了ICP47基因。ICP47特異結(jié)合與抗原加工相關(guān)的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，使外源肽無(wú)法與主要組織相容性復(fù)合物（major histocompability complex,MHC）I類分子結(jié)合，因此去除HSV-1的ICP47后，可以提高宿主免疫反應(yīng)，增強(qiáng)對(duì)腫瘤的殺傷作用。另外，T-VEC還表達(dá)了GM-CSF，吸引樹(shù)突狀細(xì)胞（dendritic cell,DC）提高機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)[28]。除T-VEC外，處于不同階段臨床試驗(yàn)的多種溶瘤HSV被廣泛應(yīng)用于腫瘤治療中，如惡性腦膠質(zhì)腫瘤、乳腺癌、大腸癌、直腸癌、前列腺癌、頭頸癌、膀胱癌、胃癌、卵巢癌、肝癌及惡性黑色素瘤等[29-32]。

JX-594（也稱為Pexa-Vec）是由托馬斯杰斐遜大學(xué)的Edmund Lattime博士實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的溶瘤痘病毒，由SillaJen公司進(jìn)一步開(kāi)發(fā)，隨后在黑色素瘤患者中進(jìn)行臨床研究[33]。由于缺失胸苷激酶基因，JX-594可以在高水平表達(dá)胸苷激酶如具有RAS或P53基因突變的癌細(xì)胞中表達(dá)復(fù)制，但不會(huì)對(duì)正常細(xì)胞產(chǎn)生影響。同時(shí)，JX-594可在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)GM-CSF，引發(fā)機(jī)體抗腫瘤免疫反應(yīng)。

在一項(xiàng)針對(duì)轉(zhuǎn)移性黑色素瘤的臨床試驗(yàn)中，7例瘤內(nèi)注射JX-594病毒的患者中未被觀察到嚴(yán)重的不良反應(yīng)。2號(hào)和6號(hào)患者因?yàn)槟[瘤過(guò)大未響應(yīng)病毒治療。另外5例（71%）腫瘤出現(xiàn)明顯反應(yīng)，其中1、4、5號(hào)患者的病毒注射部位腫瘤和遠(yuǎn)端腫瘤都有響應(yīng)；3號(hào)通過(guò)聯(lián)合外科手術(shù)切除腫瘤后完全治愈；7號(hào)患者完全響應(yīng)，注射部位腫瘤和遠(yuǎn)端腫瘤完全消失。所有患者的腫瘤組織中都可以檢測(cè)到GM-CSF表達(dá)，T細(xì)胞和B細(xì)胞浸潤(rùn)。3號(hào)患者7個(gè)月后仍能在腫瘤組織中檢測(cè)出病毒[33]。Cripe等[34]在5例兒科患者中進(jìn)行了多達(dá)3個(gè)腫瘤部位的一次性注射JX594（每千克腫瘤重量對(duì)應(yīng)106～107pfu的病毒）的臨床試驗(yàn)，入組患者的年齡為4～21歲，他們的癌癥診斷包括神經(jīng)母細(xì)胞瘤，肝細(xì)胞癌和尤文肉瘤等，所有患者毒性反應(yīng)均≤3級(jí)，最常見(jiàn)的不良反應(yīng)是鼻竇發(fā)熱和竇性心動(dòng)過(guò)速；高劑量組共3例患者，均出現(xiàn)無(wú)癥狀的1級(jí)治療相關(guān)皮膚膿皰，并在3～4周內(nèi)消退，1例患者的影像學(xué)檢測(cè)數(shù)據(jù)證實(shí)了病毒抗腫瘤生物活性：磁共振成像顯示注射病毒后腫瘤組織出現(xiàn)壞死變化，以及在首次注射病毒后第22 d正電子發(fā)射斷層掃描的標(biāo)準(zhǔn)攝取值下降。這項(xiàng)研究證實(shí)JX594通過(guò)腫瘤內(nèi)給藥對(duì)兒科患者的安全性，并且可以在該患者群體中展開(kāi)進(jìn)一步研究。截至2018年6月JX594已有多項(xiàng)單獨(dú)或聯(lián)合治療臨床試驗(yàn)在肝細(xì)胞癌、實(shí)體瘤、腎癌和結(jié)直腸癌的治療試驗(yàn)中進(jìn)行。

2 溶瘤病毒高效參與腫瘤免疫治療

有效的免疫治療依賴于腫瘤微環(huán)境中的免疫反應(yīng)，主要涉及以下幾個(gè)方面：①高密度的腫瘤浸潤(rùn)細(xì)胞（tumor-in filtrating lymphocytes,TIL）可以保證較強(qiáng)的腫瘤免疫殺傷作用；②浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞有效識(shí)別腫瘤特異性抗原；③解除腫瘤微環(huán)境中對(duì)腫瘤免疫治療的抑制作用[35-37]。腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞組成了復(fù)雜的腫瘤微環(huán)境，主要包括以下幾個(gè)區(qū)域：有豐富TIL浸潤(rùn)的免疫浸潤(rùn)區(qū)，完全沒(méi)有免疫細(xì)胞浸潤(rùn)的免疫荒蕪區(qū)和有部分免疫細(xì)胞浸潤(rùn)的免疫排斥區(qū)。將TIL高效募集到腫瘤微環(huán)境，同時(shí)阻斷免疫抑制途徑是保證免疫治療效果的關(guān)鍵因素。

溶瘤病毒可以參與腫瘤免疫治療的多個(gè)階段（圖1），有效招募淋巴細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境富集：①直接裂解腫瘤細(xì)胞，進(jìn)而釋放腫瘤特異性抗原和免疫相關(guān)因子，誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生系統(tǒng)的抗腫瘤免疫反應(yīng)；②表達(dá)外源治療基因，吸引淋巴細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境中的募集；③通過(guò)交叉提呈感染腫瘤細(xì)胞作為新抗原疫苗原位源，促使機(jī)體產(chǎn)生特異的抗腫瘤免疫反應(yīng)，進(jìn)而殺傷遠(yuǎn)端未受感染的腫瘤細(xì)胞[38]。

圖1 溶瘤病毒參與腫瘤細(xì)胞殺傷的途徑Figure 1 Oncolytic viruses affect multiple key steps in cancer immunity therapy

2.1 溶瘤病毒參與腫瘤免疫反應(yīng)的途徑 溶瘤病毒通過(guò)參與多種腫瘤進(jìn)展相關(guān)機(jī)制、介導(dǎo)機(jī)體抗腫瘤免疫過(guò)程，發(fā)揮抗腫瘤活性。首先，溶瘤病毒可通過(guò)溶瘤作用直接殺死腫瘤細(xì)胞，導(dǎo)致可溶性腫瘤相關(guān)抗原釋放，這些分子募集并激活抗原呈遞細(xì)胞，如BATF3+DC。BATF3+DC吞噬可溶性腫瘤抗原并遷移至區(qū)域性淋巴結(jié)，進(jìn)而引發(fā)針對(duì)腫瘤的適應(yīng)性T細(xì)胞應(yīng)答[39]。其次，病毒介導(dǎo)的干擾素和趨化因子表達(dá)釋放導(dǎo)致抗原加工和表達(dá)因子水平增加如MHC I類分子的表達(dá)，同時(shí)加強(qiáng)腫瘤特異性浸潤(rùn)C(jī)D8+T細(xì)胞的募集，這些細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（cytotoxicity T lymphocytes,CTLs）識(shí)別并殺死腫瘤細(xì)胞，遠(yuǎn)端位點(diǎn)的腫瘤細(xì)胞也是CTLs的靶標(biāo)[40]。同時(shí)干擾素的反調(diào)節(jié)作用可以增加免疫檢查點(diǎn)的表達(dá)如程序性細(xì)胞死亡配體1，細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4,CTLA4）和半乳凝集素9，使得腫瘤經(jīng)過(guò)溶瘤病毒治療后更容易響應(yīng)免疫檢查點(diǎn)阻斷藥物的治療[41]。

2.2 溶瘤病毒治療引發(fā)腫瘤微環(huán)境免疫反應(yīng) 正常細(xì)胞具有比較完整的抗病毒機(jī)制，其可以通過(guò)環(huán)裝GMP-AMP合成酶-干擾素基因刺激因子系統(tǒng)或者其他因子如PKR，NLRP3，干擾素-γ誘導(dǎo)蛋白16和寡腺苷酸合成酶等識(shí)別DNA病毒；通過(guò)維甲酸誘導(dǎo)基因，黑色素瘤分化相關(guān)蛋白5，Toll樣受體3和7識(shí)別RNA病毒；這些識(shí)別因子可以促進(jìn)干擾素-I表達(dá)介導(dǎo)病毒清除，增強(qiáng) MHC I類分子表達(dá)和募集固有淋巴細(xì)胞。導(dǎo)致溶瘤病毒很難在正常細(xì)胞中復(fù)制包裝。而腫瘤細(xì)胞中則普遍缺失抗病毒功能，因此溶瘤病毒可以在腫瘤細(xì)胞中順利的復(fù)制包裝[42-43]。另外，腫瘤細(xì)胞更容易受到病毒溶瘤作用的影響，從而導(dǎo)致局部釋放病毒來(lái)源的病原體相關(guān)分子模式、細(xì)胞衍生的損傷相關(guān)分子模式以及干擾素-I，以誘導(dǎo)抗原遞呈增加， MHC I類分子表達(dá)，BATF3+DC細(xì)胞募集，先天淋巴細(xì)胞和腫瘤特異性T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)等抗病毒免疫反應(yīng)，而這些反應(yīng)都是通過(guò)溶瘤病毒裂解腫瘤細(xì)胞釋放的病毒及腫瘤特異性抗原的遞呈引起的。所以溶瘤病毒具有增強(qiáng)新抗原遞呈和腫瘤特異性T淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)的雙重抗腫瘤免疫效應(yīng)[44]。

3 溶瘤病毒聯(lián)合靶向藥物增效腫瘤治療

溶瘤病毒在腫瘤治療過(guò)程中的多功能特性使其具有與其他藥物聯(lián)用增效的巨大潛力。與化學(xué)治療藥物順鉑、5 -氟尿嘧啶和ONYX–015聯(lián)用，客觀緩解率可達(dá)65%，相較于單獨(dú)使用ONYX-015的15%的反應(yīng)率有了顯著提高[20]。在一項(xiàng)三陰性乳腺癌的臨床前研究模型中，溶瘤馬拉巴病毒可以提高難治性腫瘤對(duì)免疫檢查點(diǎn)抑制劑的敏感性[45]。T-VEC（瘤內(nèi)注射）與CTLA4抗體ipilimumab（靜脈注射）聯(lián)用治療晚期黑色素瘤的客觀緩解率為50%，其中44%患者的有效率持續(xù)6個(gè)月以上，并且沒(méi)有觀察到劑量限制性毒性。另外在一項(xiàng)針對(duì)黑色素瘤患者的I期臨床研究中，對(duì)21例患者聯(lián)合應(yīng)用T-VEC和PD1 單克隆抗體 pembrolizumab治療的結(jié)果顯示，患者的客觀緩解率為62%，完全緩解率為33%。另外，在聯(lián)合ipilimumab與T-VEC的一項(xiàng)Ib期臨床試驗(yàn)中，19例患者均未發(fā)現(xiàn)劑量限制性毒性，但3～4級(jí)不良反應(yīng)的發(fā)生率為26.3%，其中15.8%為T-VEC相關(guān)，21.1%為ipilimumab相關(guān)，客觀緩解率為50%，44%的患者有超過(guò)6個(gè)月的持續(xù)響應(yīng)，18個(gè)月無(wú)進(jìn)展生存率為50%，18個(gè)月總生存率為67%。T-VEC與ipilimumab聯(lián)合用藥具有較好的安全性，治療效果明顯優(yōu)于T-VEC或ipilimumab的單藥治療[46]。另外，部分研究已經(jīng)表明溶瘤病毒與放射性療法和細(xì)胞治療聯(lián)合也可以提高治療效果[47-51]。

盡管有溶瘤病毒的聯(lián)合治療方案已經(jīng)表現(xiàn)出了良好的臨床應(yīng)用前景，但治療細(xì)節(jié)還需要大量的研究進(jìn)行探索，比如不同療法組合方式、劑量選擇、順序選擇以及時(shí)間選擇等。同時(shí)不同溶瘤病毒免疫聯(lián)用療法適用患者的選擇標(biāo)準(zhǔn)以及療法評(píng)價(jià)時(shí)間點(diǎn)的確定都有待深入研究。

4 總結(jié)與展望

溶瘤病毒種類多、調(diào)控手段多樣、可以作為載體表達(dá)不同功能的外源基因，這些是溶瘤病毒治療腫瘤的優(yōu)勢(shì)。另外，溶瘤病毒可以整合到腫瘤免疫治療的多個(gè)環(huán)節(jié)，募集腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞以及增強(qiáng)腫瘤新抗原遞呈引起的腫瘤特異性免疫反應(yīng)等特性為溶瘤病毒聯(lián)用其他療法奠定了基礎(chǔ)。大量的臨床研究結(jié)果已經(jīng)顯示了溶瘤病毒療法尤其溶瘤病毒聯(lián)用療法在腫瘤治療領(lǐng)域良好的應(yīng)用前景。

但溶瘤病毒療法仍然存在著很多須要解決的問(wèn)題，這些問(wèn)題是未來(lái)溶瘤病毒大規(guī)模應(yīng)用要面對(duì)的挑戰(zhàn)。首先從病毒選擇和調(diào)控機(jī)制角度來(lái)講，現(xiàn)有的溶瘤病毒的調(diào)控機(jī)制較為單一，無(wú)法精準(zhǔn)識(shí)別腫瘤細(xì)胞，由此造成的脫靶效應(yīng)所引起的不良反應(yīng)會(huì)嚴(yán)重影響腫瘤的治療效果。合成生物學(xué)以工程化的設(shè)計(jì)理念，構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)化的元器件和模塊，搭建邏輯線路，改造天然存在的生命體如細(xì)菌、真菌和細(xì)胞等，實(shí)現(xiàn)特殊的生理功能[52]。人們利用合成生物學(xué)手段對(duì)生命系統(tǒng)進(jìn)行編輯，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)生命系統(tǒng)的精準(zhǔn)調(diào)控。利用合成生物學(xué)手段設(shè)計(jì)構(gòu)建系統(tǒng)的分子開(kāi)關(guān)，調(diào)控溶瘤病毒在腫瘤細(xì)胞中的復(fù)制，通過(guò)多水平、多輸入信號(hào)的應(yīng)用提高溶瘤病毒安全性的最優(yōu)路徑。其次，溶瘤病毒、腫瘤細(xì)胞微環(huán)境和免疫系統(tǒng)共同構(gòu)成的復(fù)雜系統(tǒng)對(duì)溶瘤病毒療法的療效起著決定性作用。通過(guò)生物信息學(xué)手段分析治療過(guò)程中三者的相互關(guān)系，確定溶瘤病毒的有效劑量和給藥方式可以保證腫瘤治療的效果。此外，在聯(lián)用其他藥物方面，最佳的病毒、聯(lián)用方法藥物劑量的選擇，以及治療順序與時(shí)間等都須要進(jìn)一步地研究。再者，環(huán)境、飲食和宿主自生腸道微生物菌群等如何參與影響溶瘤病毒治療過(guò)程也是一個(gè)值得深入探討的科學(xué)問(wèn)題?？傊?，溶瘤病毒的多樣性、可編輯性和多效性使它成為優(yōu)化聯(lián)合免疫治療的理想平臺(tái)。