賈博 張少華 劉建軍

(1北京市垂楊柳醫(yī)院心內(nèi)科，北京 100022；2河北省老年病醫(yī)院內(nèi)科)

慢性阻塞性肺疾病(COPD)主要表現(xiàn)為氣流受限，發(fā)病機(jī)制以炎癥反應(yīng)為病理基礎(chǔ)〔1，2〕。白細(xì)胞介素(IL)-18、IL-6和高敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)參與COPD的炎癥過(guò)程，肺表面活性蛋白(SP-D)可直接反映氣道及肺的損傷程度〔3〕。IL-6是聯(lián)系T淋巴細(xì)胞與炎癥因子的橋梁〔4〕。CD83可反映肺組織免疫調(diào)節(jié)狀態(tài)，進(jìn)而推斷肺部的穩(wěn)態(tài)平衡程度，組蛋白乙酰化酶(HAT)/去乙?；?HDAC)2失衡是COPD炎癥反應(yīng)的重要因素〔5〕。本文擬進(jìn)一步探究COPD的抗炎機(jī)制。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2016年3月至2017年4月在北京市垂楊柳醫(yī)院接受治療的老年COPD患者90例，男50例，女40例，年齡65～82〔平均(73.52±3.41)〕歲，病程5～10〔平均(7.32±1.01)〕年。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合COPD的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)無(wú)其他呼吸系統(tǒng)疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)臨床資料不全者；(2)合并免疫功能障礙者。對(duì)照組90人為體檢正常的健康老年人，男45人，女45人，年齡65～85〔平均(73.55±3.63)〕歲。兩組年齡、性別差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)評(píng)審?fù)ㄟ^(guò)，且研究對(duì)象均知情同意。

1.2方法 外周單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)分離得外周血沉淀物加入等量生理鹽水混勻，滴加適量淋巴細(xì)胞分離液3 000 r/min離心15 min，離心后分3層，用毛細(xì)管吸取上中層交界處的白色云霧層即單核細(xì)胞層，置于離心管中，加入5倍生理鹽水，10 000 r/min離心1 min洗滌2次。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定PBMC中HDAC2的含量，所需儀器購(gòu)自Abnova公司，批號(hào)為KA2744，操作步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。采用Jaegar公司生產(chǎn)的呼氣冷凝液收集器，患者用口平靜呼氣15 min呼出氣體，遇冷凝結(jié)成液體收集，保存于-80℃采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定CRP、IL-17、IL-6、IL-18、SP-D、CD83肺功能測(cè)定，采用Maste Screen PFT型肺功能儀購(gòu)自德國(guó)Jaeger公司測(cè)定肺功能相關(guān)指標(biāo)：1 s用力呼氣容積(FEV1)、用力肺活量(FVC)、FEV1/FVC、呼氣峰流速值(PEF)、最大呼氣中期流量(MMEF)。

1.3評(píng)價(jià)指標(biāo) 觀察兩組CD83、IL-17、SP-D、HDAC2 mRNA水平及細(xì)胞因子和肺功能的差異，分析老年COPD患者CD83、IL-17、SP-D、HDAC2 mRNA水平與肺功能和細(xì)胞因子的相關(guān)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS11.5軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)及Pearson相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1兩組CD83、IL-17、SP-D、HDAC2 mRNA水平比較 COPD組CD83和HDAC2 mRNA水平明顯低于對(duì)照組，IL-17和SP-D水平明顯高于對(duì)照組(均P<0.001)，見(jiàn)表1。

2.2兩組細(xì)胞因子水平比較 COPD組IL-18、IL-6和hs-CRP水平均明顯高于對(duì)照組(均P<0.001)。見(jiàn)表2。

2.3兩組肺功能水平比較 COPD組FVC、FEV1/FVC、MMEF和PEF水平均明顯低于對(duì)照組(均P<0.001)。見(jiàn)表3。

表1 兩組CD83、IL-17、SP-D、HDAC2 mRNA水平比較

表2 兩組細(xì)胞因子水平比較

表3 兩組肺功能水平比較

2.4COPD患者CD83、IL-17、SP-D、HDAC2 mRNA與肺功能和細(xì)胞因子的相關(guān)性 COPD組CD83 和HDAC2 mRNA水平與IL-18(r=-0.613、-0.618，P=0.041、0.005)、IL-6(r=-0.605、-0.603，P=0.035、0.023)、hs-CRP(r=-0.598、-0.615，P=0.021、0.029)水平呈負(fù)相關(guān)，與FVC(r=0.621、0.624，P=0.017、0.032)、FEV1/FVC(r=0.615、0.633，P=0.011，0.041)、MMEF(r=0.603、0.608，P=0.008、0.001)和PEF(r=0.587、0.599，P=0.002、0.014)呈正相關(guān)；COPD患者IL-17和SP-D水平與IL-18(r=0.632、0.615，P=0.003、0.011)、IL-6(r=0.615、0.623，P=0.015、0.008)、hs-CRP(r=0.627、0.617，P=0.027、0.042)水平呈正相關(guān)，與FVC(r=-0.608、-0.624，P=0.033、0.037)、FEV1/FVC(r=-0.617、-0.631，P=0.002、0.022)、MMEF(r=-0.624、-0.622，P=0.012、0.016)和PEF(r=-0.595、-0.608，P=0.027、0.001)呈負(fù)相關(guān)。

3 討 論

COPD發(fā)病機(jī)制多種，長(zhǎng)期吸煙、其他有害顆粒吸入致肺部慢性炎癥反應(yīng)是其主要原因。多種炎癥細(xì)胞、細(xì)胞因子介質(zhì)參與的炎癥反應(yīng)，不僅破壞肺實(shí)質(zhì)、肺血管，造成氣管重塑，還對(duì)肺損傷修復(fù)防御機(jī)制造成一定程度破損〔6，7〕。肺部蛋白酶-抗蛋白酶失衡，凋亡、抗凋亡及氧化、抗氧化系統(tǒng)的失衡仍是重要原因。

本研究結(jié)果顯示，COPD患者血漿中IL-17、IL-18濃度升高。其原因可能是中性粒是COPD炎癥反應(yīng)過(guò)程中的主要炎癥細(xì)胞，其數(shù)量決定病情的嚴(yán)重程度。IL-17、IL-18可調(diào)控中性粒在呼吸道中的募集、激活能力，是聯(lián)系T淋巴細(xì)胞和中性粒細(xì)胞的重要介質(zhì)，通過(guò)募集中性粒細(xì)胞實(shí)現(xiàn)炎癥反應(yīng)的持續(xù)性進(jìn)行〔8〕。

COPD誘發(fā)因素如長(zhǎng)期吸煙、有害顆粒、細(xì)菌病毒的反復(fù)侵入等，可刺激上述細(xì)胞分泌IL-6。增多的IL-6不僅能提高募集、激活中性粒細(xì)胞的能力，還可抑制中性粒細(xì)胞凋亡，延長(zhǎng)其壽命。局部蓄積造成持續(xù)效應(yīng)-放大炎癥反應(yīng)。IL-6與中性粒細(xì)胞結(jié)合，可以使細(xì)胞變形，通過(guò)脫顆粒、呼吸爆發(fā)反應(yīng)，釋放大量超氧化物，促進(jìn)炎癥反應(yīng)的進(jìn)行，誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞釋放彈性蛋白酶是蛋白酶-抗蛋白酶失衡的主要原因。肺組織、肺泡壁損傷誘發(fā)肺氣腫。袁玉亮〔9〕發(fā)現(xiàn)IL-16水平與FVC、FEV1/FVC、MMEF、PEF水平下降程度呈負(fù)相關(guān)，與本研究結(jié)果一致，說(shuō)明IL-16降低小氣道功能，且能反映其下降程度。

hs-CRP是一種急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，可由感染、炎癥狀態(tài)下產(chǎn)生的IL-6等細(xì)胞因子刺激肝臟細(xì)胞合成，以調(diào)節(jié)控制炎癥反應(yīng)〔10〕。作為炎癥狀態(tài)組織損傷標(biāo)準(zhǔn)，本研究結(jié)果顯示COPD患者中血清hs-CRP濃度升高。SP-D由肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞合成并分泌，可降低吸氣阻力，維持肺泡容積相對(duì)穩(wěn)定，COPD患者肺損傷，肺血管壁通透性增加，SP-D與連接不緊密的肺表面磷脂分離，通過(guò)肺氣-血屏障進(jìn)入血液，使血液中SP-D水平升高〔11〕。

HDAC2 mRNA轉(zhuǎn)錄表達(dá)HDAC2為糖皮質(zhì)激素介導(dǎo)的具有抗炎作用的組蛋白去乙酰化酶〔12〕。COPD誘發(fā)因素香煙煙霧通過(guò)激活肺部氧化應(yīng)激，釋放過(guò)氧化物可使HDAC2活性降低，甚至是失去活性〔13〕。本研究結(jié)果顯示，COPD患者通過(guò)下調(diào)HDAC2 mRNA抑制HDAC2的釋放及其活性的發(fā)揮。尚東等〔14〕實(shí)驗(yàn)證明，長(zhǎng)期使用香煙提取物使CD83表達(dá)水平下降。姚倫凱等〔5〕報(bào)道老年COPD組CD83和HDAC2 mRNA水平與IL-18、IL-6、hs-CRP水平呈負(fù)相關(guān)，與FVC、FEV1/FVC、MMEF和PEF呈正相關(guān)，與本研究結(jié)果一致。綜上，老年COPD患者CD83、HDAC2 mRNA水平較低，IL-17、SP-D較高，可作為臨床監(jiān)測(cè)的重要指標(biāo)。