高小寬

（衡水學(xué)院生命科學(xué)系，河北衡水 053000）

梨黑斑病是由絲孢綱絲孢目鏈格孢屬真菌（Alternaria kikuchiana）引起的梨樹主要病害之一，采收期發(fā)病最為嚴(yán)重，貯運(yùn)期還可能繼續(xù)發(fā)病。采前爛果率可達(dá)30%～50%，在貯藏后期該病的發(fā)病率可達(dá)37%[1]。

大蒜提取液中的抑菌活性成分是大蒜在粉碎過程中產(chǎn)生的，主要為大蒜酶酶解蒜氨酸產(chǎn)生的大蒜素和大蒜素進(jìn)一步分解產(chǎn)生的其他含硫化合物，其成分多達(dá)18種以上，且易揮發(fā)成分抑菌活性最好[2]。目前，采用大蔥、大蒜提取物對梨黑斑病的抑制尚未見報道。

本試驗(yàn)選用不同濃度的大蒜、大蔥粗提取液，分別通過體內(nèi)提取物對梨黑斑病抑制的最佳濃度，以期為大蒜、大蔥提取物防治梨黑斑病提供依據(jù)，為新型生物防腐劑的開發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

梨黑斑病菌為梨儲藏期黑斑病，采自衡水舊城村梨園帶病梨果，經(jīng)儲藏15d后取病組織分離得到梨黑斑病菌，40℃保存。新鮮的大蒜、大蔥從市場購買獲得。

將從室外購回的大蒜、大蔥（去外表皮）分別在無菌的環(huán)境中，用75%的酒精棉球擦拭其表面，晾干。用滅菌的解剖刀和鑷子去除表皮（注意不要污染內(nèi)部組織），挑取內(nèi)部組織0.1g，放入滅菌的研缽中加1mL無菌水充分研磨，靜置。

1.2 方法

1.2.1 孢子懸浮液制備。取出預(yù)先培養(yǎng)好的備用病原菌參照方中達(dá)方法[3]，在無菌條件下，往培養(yǎng)好的菌種培養(yǎng)基上加入含有0.01%Tween80的無菌水10mL，用已消毒的毛筆將互隔交鏈孢孢子從培養(yǎng)皿上輕輕刮下，制成濃度為1×106CFU/mL的孢子懸浮液，懸浮液孢子計(jì)數(shù)采用在10×10倍顯微鏡下每視野30～35個分生孢子。

1.2.2 體內(nèi)損傷接種試驗(yàn)。在無菌條件下，分別量取4、8、12、16、20mL蔥、蒜粗提取液，分別加入100mL的PDA培養(yǎng)基中（PDA培養(yǎng)基制備參照方中達(dá)方法[3]進(jìn)行），震蕩搖勻后趁熱倒入直徑90mm的培養(yǎng)皿內(nèi)。用滅過菌的直徑為6mm的打孔器在菌落邊緣鉆取菌餅，用接種環(huán)挑取菌餅接種于含有殺菌劑的PDA培養(yǎng)基的中央，菌絲面向下，每個處理3次。把接好的培養(yǎng)皿倒置放在25℃光照培養(yǎng)箱中，共連續(xù)培養(yǎng)觀察6d，記錄并分析試驗(yàn)結(jié)果。

1.3 處理已經(jīng)記錄的試驗(yàn)數(shù)據(jù)

采用Microsoft Excel2010軟件處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 離體條件下兩種植物粗提取物對梨黑斑病菌生長的影響

2.1.1 兩種植物提取物對梨黑斑病菌絲的抑制作用。由表1可知，大蒜粗提取液對菌絲生長速率的影響大，在40mL/L濃度下菌落直徑生長約20mm，在最大200mg/L濃度下僅生長約7mm。大蔥粗提取液對菌絲生長速率的影響小，在最大200mg/L濃度下生長約45mm。

在濃度200mL/L蒜粗提取液的抑制率高達(dá)90.65%，同時在 40、80、120、160mg/L 的質(zhì)量濃度下，抑制率均大于70%。而蔥粗提取液在處理濃度下抑制率均小于40%，抑制效果不顯著，不同濃度之間抑制率差異不顯著。

表1 2種植物粗提取液對梨黑斑病菌絲生長的影響

2.1.2 2種植物粗提取液對病原菌絲的的毒力測定。由表2可知，大蒜粗提取液對病原菌的毒力最強(qiáng)EC50為6.304mg/L，大蔥粗提取液對病原菌的毒力最強(qiáng)EC50為669.031mg/L，抑制作用最明顯的是大蒜粗提取液。

表2 2種植物粗提取液對蘋果斑點(diǎn)落葉病菌絲的室內(nèi)毒力測定

綜上所述，大蒜粗提取液對梨黑斑病菌絲生長的抑制率明顯高于大蔥粗提取液的抑制率。

2.2 大蒜粗提取液對貯藏期梨黑斑病的抑制

2.2.1 體內(nèi)損傷接種試驗(yàn)的抑菌率。由表3可知，大蒜粗提取液在各個濃度下抑制率均大于50%。濃度為200 mL/L時抑制率最高為70.97%。

表3 大蒜粗提取液對梨黑斑病病斑生長的影響

通過表1和表3可知，大蒜粗提取液對梨黑斑病菌有直接抑制作用，大蒜粗提取液體內(nèi)損傷接種試驗(yàn)抑制率相比離體培養(yǎng)試驗(yàn)的抑制率降低。

2.2.2 體內(nèi)損傷接種的毒力測定。大蒜粗提取液的EC50為47.319 mg/L。

表4 大蒜粗提取液對梨黑斑病菌菌絲生長的毒力值

3 結(jié)論與討論

大蔥粗提取液和大蒜粗提取液對梨黑斑病的菌落生長、菌絲伸長和梨果實(shí)病斑擴(kuò)展均具有不同程度的抑制作用，隨著濃度的增加抑制作用越強(qiáng)。其中，對菌落生長抑菌效果最好的為200mL/L大蒜粗提取液的抑制率高達(dá)90.65%，對病原菌的毒力最強(qiáng)EC50為6.304mg/L。大蒜粗提取液體內(nèi)損傷接種試驗(yàn)中200 mL/L的大蒜粗提取液抑菌作用最好，抑菌率為70.97%，毒力最強(qiáng)EC50為47.319mg/L。而大蔥粗提取液在試驗(yàn)所選濃度下抑制率均小于40%，抑制效果不顯著。

大蔥粗提取液的抑制效果不如大蒜粗提取液的抑制效果明顯，主要原因可能是大蔥中大蒜素其類似物的含量不及大蒜中大蒜素的含量，或者是二者的最適溫度不同（該試驗(yàn)是在相同的溫度下進(jìn)行的）。大蔥和大蒜中能抑制梨黑斑病的有效成分及其作用環(huán)境（溫度，pH值等因素）目前尚不明確，有待深入研究。