趙航 李廷利

(黑龍江省中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，哈爾濱，150040)

本項(xiàng)實(shí)驗(yàn)研究主要探究朱砂安神丸拮抗大鼠條件性恐懼及其睡眠障礙的作用?，F(xiàn)將方法及結(jié)果介紹如下。

1 研究方法

1.1 條件性恐懼大鼠的覺(jué)醒-睡眠時(shí)間及睡眠時(shí)相的變化

1.1.1 大鼠條件性恐懼習(xí)得記憶的模型復(fù)制 選取雄性SD大鼠20只，適應(yīng)7 d后，隨機(jī)分成空白組及模型組，每組10只。模型組進(jìn)行條件性恐懼模型的復(fù)制，空白組只給予聲信號(hào)。然后于模型復(fù)制次日，再次將2組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物放入條件性恐懼刺激箱中，只給予聲信號(hào)而不給予足底電刺激，進(jìn)行條件性恐懼習(xí)得測(cè)試，以70 s為周期，連續(xù)記錄5個(gè)周期內(nèi)2組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的僵直反應(yīng)時(shí)間。

1.1.2 大鼠條件性恐懼記憶消退模型的復(fù)制 選取雄性SD大鼠20只，適應(yīng)7 d后，隨機(jī)分成空白組及模型組，每組10只。隨后模型組進(jìn)行條件性恐懼模型的復(fù)制，空白組只給予聲信號(hào)。于模型復(fù)制次日，再次將2組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物依次放入條件性恐懼刺激箱中，進(jìn)行條件性恐懼消退，1次/d，連續(xù)6 d。記錄2組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的僵直反應(yīng)時(shí)間。

1.1.3 大鼠條件性恐懼習(xí)得過(guò)程中覺(jué)醒-睡眠時(shí)間及睡眠時(shí)相的變化 選取雄性SD大鼠20只，適應(yīng)7 d后，隨機(jī)分成空白組及模型組，每組10只。2組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別在麻醉和腦立體定位儀的條件下，進(jìn)行皮層腦電與肌電電極的埋置，術(shù)后恢復(fù)7 d。隨后模型組進(jìn)行條件性恐懼模型的復(fù)制，空白組只給予聲信號(hào)。模型復(fù)制后，將2組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別置于腦電描記室中，連續(xù)24 h記錄皮層腦電。以4 h為1個(gè)周期進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.1.4 大鼠條件性恐懼消退過(guò)程中覺(jué)醒-睡眠時(shí)間及睡眠時(shí)相的變化 選取雄性SD大鼠20只，適應(yīng)7 d后，隨機(jī)分成空白組及模型組，每組10只。2組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別在麻醉和腦立體定位儀的條件下，進(jìn)行皮層腦電與肌電電極的埋置，術(shù)后恢復(fù)7 d。隨后模型組進(jìn)行條件性恐懼模型的復(fù)制，空白組只給予聲信號(hào)。于模型復(fù)制次日再次將2組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物放入條件性恐懼刺激箱中，進(jìn)行條件性恐懼消退，1次/d，連續(xù)6 d。每次消退結(jié)束后，將2組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別置于腦電描記室中，連續(xù)12 h記錄皮層腦電。以4 h為1個(gè)周期進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 朱砂安神丸拮抗大鼠條件性恐懼及其睡眠障礙作用的研究

2.1 朱砂安神丸對(duì)大鼠條件性恐懼習(xí)得記憶的影響 選取雄性SD大鼠30只，適應(yīng)7 d后，隨機(jī)分成空白組、模型組和給藥組，每組10只。給藥組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予朱砂安神丸混懸液(經(jīng)灌胃給予，0.81 g/kg)?？瞻捉M、模型組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予等體積的1%CMC，1次/d，連續(xù)7 d。末次給藥后，模型組、給藥組進(jìn)行條件性恐懼模型的復(fù)制，空白組只給予聲信號(hào)。于模型復(fù)制次日進(jìn)行恐懼習(xí)得測(cè)試。以70 s為1個(gè)周期，連續(xù)記錄5個(gè)周期內(nèi)2組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的僵直反應(yīng)時(shí)間。

2.2 朱砂安神丸對(duì)大鼠條件性恐懼記憶消退的影響 選取雄性SD大鼠30只，適應(yīng)7 d后，隨機(jī)分成空白組、模型組及給藥組，每組10只。隨后模型組、給藥組進(jìn)行條件性恐懼模型的復(fù)制，空白組只給予聲信號(hào)。于模型復(fù)制次日，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥。給藥組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予朱砂安神丸混懸液(經(jīng)灌胃給予，0.81 g/kg)?？瞻捉M、模型組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給予等體積的1%CMC，1次/d，連續(xù)6 d。每次給藥后，將各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行條件性恐懼消退。記錄各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的僵直反應(yīng)時(shí)間。

2.3 朱砂安神丸對(duì)大鼠條件性恐懼習(xí)得過(guò)程覺(jué)醒-睡眠時(shí)間及睡眠時(shí)相的影響 選取雄性SD大鼠30只，適應(yīng)7 d后，隨機(jī)分成空白組、模型組與給藥組。每組10只。3組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別在麻醉和腦立體定位儀的條件下，進(jìn)行皮層腦電與肌電電極的埋置，術(shù)后恢復(fù)7 d。隨后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥，給藥方法如上述“朱砂安神丸對(duì)大鼠條件性恐懼習(xí)得記憶的影響”。末次給藥后，模型組、給藥組進(jìn)行條件性恐懼模型的復(fù)制，空白組只給予聲信號(hào)。模型復(fù)制后，將2組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別置于腦電描記室中，連續(xù)24 h記錄皮層腦電。以4 h為1個(gè)周期進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2.4 朱砂安神丸對(duì)大鼠條件性恐懼記憶消退過(guò)程中覺(jué)醒-睡眠時(shí)間及睡眠時(shí)相的影響 選取雄性SD大鼠30只，適應(yīng)7 d后隨機(jī)分成空白組、模型組及給藥組，每組10只。各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別在麻醉和腦立體定位儀的條件下，進(jìn)行皮層腦電與肌電電極的埋置，術(shù)后恢復(fù)7 d。隨后模型組、給藥組進(jìn)行條件性恐懼模型的復(fù)制，空白組只給予聲信號(hào)。模型復(fù)制次日進(jìn)行實(shí)驗(yàn)動(dòng)物給藥，給藥方法如上述“朱砂安神丸對(duì)大鼠條件性恐懼消退記憶的影響”。每次給藥結(jié)束后將各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物依次放入條件性恐懼刺激箱中，重復(fù)恐懼習(xí)得測(cè)試操作。每次恐懼消退結(jié)束后將各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別置于腦電描記室中，連續(xù)12 h記錄皮層腦電。

3 結(jié)果

3.1 條件性恐懼大鼠的覺(jué)醒-睡眠時(shí)間及睡眠時(shí)相的變化

3.1.1 大鼠條件性恐懼習(xí)得記憶的模型復(fù)制 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與空白組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物比較，模型組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在條件性恐懼習(xí)得過(guò)程中，第1～5個(gè)周期內(nèi)僵直反應(yīng)時(shí)間明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。

3.1.2 大鼠條件性恐懼記憶消退模型的復(fù)制 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在條件性恐懼消退階段，各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物僵直反應(yīng)時(shí)間隨消退時(shí)間增加而逐漸減少；與空白組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物比較，模型組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在第2～5天的僵直反應(yīng)時(shí)間增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。

3.1.3 大鼠條件性恐懼習(xí)得過(guò)程中覺(jué)醒-睡眠時(shí)間及睡眠時(shí)相的變化 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與空白組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物比較，模型組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在條件性恐懼刺激結(jié)束后第1～3個(gè)周期內(nèi)，Wake時(shí)間延長(zhǎng)，百分比增加比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；睡眠總時(shí)間延長(zhǎng)，百分比降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；REMS和NREM時(shí)間縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；REMS與NREM的睡眠時(shí)間百分比無(wú)明顯變化。

3.1.4 大鼠條件性恐懼消退過(guò)程中覺(jué)醒-睡眠時(shí)間及睡眠時(shí)相的變化 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與空白組比較，模型組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在第2～5天，Wake時(shí)間延長(zhǎng)，百分比增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；睡眠總時(shí)間縮短，百分比降低比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；REMS時(shí)間縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；NREM時(shí)間縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；REMS與NREM的睡眠時(shí)間百分比無(wú)明顯變化。

3.2 朱砂安神丸拮抗大鼠條件性恐懼及其睡眠障礙作用的研究

3.2.1 朱砂安神丸對(duì)大鼠條件性恐懼習(xí)得記憶的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與空白組比較，模型組及給藥組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在條件性恐懼習(xí)得的過(guò)程中，第1～5個(gè)周期內(nèi)僵直反應(yīng)時(shí)間明顯高于空白組(P<0.01)；與模型組比較，給藥組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在第1～5個(gè)周期內(nèi)的僵直反應(yīng)時(shí)間無(wú)差異。

3.2.2 朱砂安神丸對(duì)大鼠條件性恐懼記憶消退的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：在條件性恐懼消退階段，各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物僵直反應(yīng)時(shí)間隨消退時(shí)間增加而逐漸減少；與空白組比較，模型組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在消退第2～5天的僵直反應(yīng)時(shí)間增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型組比較，給藥組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在第4天和第5天的僵直反應(yīng)時(shí)間降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3.2.3 朱砂安神丸對(duì)大鼠條件性恐懼習(xí)得過(guò)程覺(jué)醒-睡眠時(shí)間及睡眠時(shí)相的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與空白組比較，模型組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在第1～3個(gè)周期，Wake時(shí)間延長(zhǎng)，百分比增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；睡眠總時(shí)間縮短，百分比降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；REMS時(shí)間縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；NREM時(shí)間縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，REMS與NREM的睡眠時(shí)間百分比無(wú)明顯變化。與模型組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物比較，給藥組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在第1個(gè)周期和第2個(gè)周期Wake時(shí)間縮短，百分比降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；第1～3個(gè)周期內(nèi)睡眠總時(shí)間延長(zhǎng)，百分比增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；REMS時(shí)間延長(zhǎng)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；NREM時(shí)間延長(zhǎng)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；REMS與NREM的睡眠時(shí)間百分比無(wú)明顯變化。

3.2.4 朱砂安神丸對(duì)大鼠條件性恐懼記憶消退過(guò)程中覺(jué)醒-睡眠時(shí)間及睡眠時(shí)相的影響 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：與空白組比較，模型組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在第2～5天，Wake時(shí)間延長(zhǎng)，百分比增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；睡眠總時(shí)間延長(zhǎng)，百分比降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；REMS時(shí)間縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；NREM時(shí)間縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；REMS與NREM的睡眠時(shí)間百分比無(wú)明顯變化。與模型組比較，給藥組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在第4天和第5天Wake時(shí)間縮短，百分比降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；睡眠總時(shí)間延長(zhǎng)，百分比增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；NREM時(shí)間增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。第4天REM時(shí)間增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；REMS與NREM的睡眠時(shí)間百分比無(wú)明顯變化。

4 結(jié)論

條件性恐懼能夠引起覺(jué)醒時(shí)間延長(zhǎng)，睡眠時(shí)間縮短而對(duì)REM及NREM的睡眠比例無(wú)影響；朱砂安神丸能夠促進(jìn)條件性恐懼消退；朱砂安神丸能夠拮抗由條件性恐懼引起的睡眠障礙。