馮金秋 陳惠琴 張宏蓮 孫輯凱

齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院 黑龍江 齊齊哈爾 161006

蒼術(shù)是一種應(yīng)用十分廣泛的傳統(tǒng)中藥,2015年版《中國藥典》規(guī)定其來源于茅蒼術(shù)(Atractylodeslancea(Thunb.)DC)和北蒼術(shù)(Atractylodeschinensis(DC.)Koidz.)[1],具有多項(xiàng)藥理作用[2～6]。前者主要生產(chǎn)于江蘇省、湖北省、河南省,其中,江蘇茅山所產(chǎn)的蒼術(shù)為道地藥材,被稱為茅蒼術(shù)；北蒼術(shù)主要產(chǎn)自內(nèi)蒙古、山西省以及東北等地區(qū)。蒼術(shù)的來源主要為野生采集,但由于近年來的挖掘現(xiàn)象毫無秩序,導(dǎo)致產(chǎn)量有所下降,資源十分匱乏,且不同產(chǎn)區(qū)的藥材質(zhì)量良莠不齊,以致消費(fèi)者在使用過程中難以辨別,且蒼術(shù)實(shí)際藥效參差不齊。

本實(shí)驗(yàn)依據(jù)2015版《中國藥典》一部正文蒼術(shù)“含量測定”項(xiàng)下規(guī)定,以化學(xué)指標(biāo)成分為評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn),對(duì)不同來源的北蒼術(shù)中蒼術(shù)素進(jìn)行含量測定,以初步掌握不同來源的北蒼術(shù)品質(zhì)的優(yōu)劣,為合理開發(fā)中草藥資源,合理控制中草藥市場提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 蒼術(shù)飲片**堂(批號(hào)：70100294,產(chǎn)自內(nèi)蒙古)、廣東**濟(jì)(批號(hào)：70100294,產(chǎn)自內(nèi)蒙古)、內(nèi)蒙古莫力達(dá)瓦旗、內(nèi)蒙古扎蘭屯。分別標(biāo)記為“1～4號(hào)”。

1.2 試劑蒼術(shù)素標(biāo)準(zhǔn)品(中國食品藥品檢定研究所,批號(hào)：???)、甲醇(天津市凱通化學(xué)試劑有限公司)、90%乙醇(天津福晨化學(xué)試劑廠)、石油醚(60～90℃)(天津福晨化學(xué)試劑廠)、丙酮(天津福晨化學(xué)試劑廠)、純化水(實(shí)驗(yàn)室自制)。以上試劑均為分析純。

1.3 儀器高速多功能粉碎機(jī)(永康市敏業(yè)工貿(mào)有限公司)、CPX3800H－C超聲波清洗機(jī)(BRANSONIC公司)、調(diào)節(jié)式手動(dòng)式中藥切片機(jī)(溫嶺市林大機(jī)械有限公司)、GR－240熱空氣消毒箱(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)、LC－1000型液相色譜儀(山東魯南瑞虹化工儀器有限公司)、PALL水純化系統(tǒng)(Pall Corporation公司)、AE－240型電子天平(梅特勒－－托利多上海有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件Diamonsil C18色譜柱(4.6mm×250mm,5μl)；流動(dòng)相甲醇：水＝(79：21)等度洗脫；流量1.0 ml/min；檢測波長340nm；進(jìn)樣量20μl。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液精密稱取蒼術(shù)素對(duì)照品適量,甲醇溶解,超聲處理10 min,制得20μg/ml的溶液,經(jīng)0.45μm的微孔濾膜濾過,取續(xù)濾液,備用。

2.2.2 供試品溶液分別取“1.1”中飲片,用粉碎機(jī)粉碎,分別過三號(hào)篩,精密稱取0.2g,置具塞錐形瓶中,精密量取甲醇50ml加入錐形瓶,用封口膜密封后,稱定重量,超聲處理(功率250W,頻率40KHz)1 h,取出錐形瓶冷卻至室溫后,稱定重量,用甲醇補(bǔ)足缺失的重量,搖勻后,用0.45μm過濾膜過濾,取續(xù)濾液,備用。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察精密稱取蒼術(shù)素對(duì)照品6mg,甲醇定容至10ml,標(biāo)記為1號(hào),按照稀釋倍數(shù)為2計(jì),制備濃度范圍為300～18.75μg/ml的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。依照“2.1”項(xiàng)下色譜條件,以峰面積為縱坐標(biāo)(Y),對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X),得到蒼術(shù)素回歸方程為Y＝2715.1X－9.6694(r＝0.9998),線性關(guān)系良好。

2.3.2 精密度試驗(yàn)精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下對(duì)照品溶液20μl,依照“2.1”項(xiàng)下色譜條件,連續(xù)進(jìn)樣6次,測定峰面積,計(jì)算RSD值為0.49%,表明儀器精密度良好。

2.3.3 重復(fù)性試驗(yàn)按“2.2.2”項(xiàng)下方法平行制備6份供試品溶液,在“2.1”項(xiàng)下色譜條件下進(jìn)樣20μl測定,測得蒼術(shù)素峰面積RSD為1.79%,表明該方法重復(fù)性良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取“2.3.3”項(xiàng)下供試品溶液20μl,在“2.1”項(xiàng)下色譜條件下,分別在0h、2h、4h、6h、8h、10h進(jìn)樣。測定蒼術(shù)素峰面積RSD為1.7%,表明溶液在10h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.5 加樣回收率試驗(yàn)精密稱取4號(hào)粉末0.1000g,共6份。每份樣品中加入蒼術(shù)素標(biāo)準(zhǔn)品0.5mg,置于50ml錐形瓶中,用甲醇定容。超聲處理1h后過0.45μm微孔濾膜,取續(xù)濾液。按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件采集圖譜,計(jì)算回收率1.5%。

2.4 樣品含有量測定分別1～4號(hào)蒼術(shù)樣品,分別制備三份平行樣,依“2.2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液,按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件采集圖譜,計(jì)算含量,結(jié)果見表1。

表1 不同來源蒼術(shù)中蒼術(shù)素含量測定結(jié)果(n＝3)

3 討論

北蒼術(shù)中所含有的化學(xué)物質(zhì)種類雜多,其中蒼術(shù)素是蒼術(shù)藥材中的活性成分之一,由于蒼術(shù)素的化學(xué)結(jié)構(gòu)較為穩(wěn)定,2015版《中國藥典》中含量測定項(xiàng)把蒼術(shù)素的含量作為蒼術(shù)藥材的質(zhì)量指標(biāo)。

通過HPLC法測定蒼術(shù)素含量可發(fā)現(xiàn),購于**堂的北蒼術(shù)中蒼術(shù)素含量最高,為1.167%,購于內(nèi)蒙古莫力達(dá)瓦旗的北蒼術(shù)中蒼術(shù)素含量次之,為0.837%,品質(zhì)良好；購于內(nèi)蒙古扎蘭屯對(duì)的北蒼術(shù)質(zhì)量較好,其中蒼術(shù)素含量為0.7611%；購于廣東**濟(jì)的北蒼術(shù)在四個(gè)樣品中蒼術(shù)素含量最低,為0.7326%。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,不同來源的北蒼術(shù)中蒼術(shù)素的含量不盡相同,存在明顯的地域差別。

長久以來,人們通過觀察北蒼術(shù)的外觀、斷面顏色、油室的數(shù)量、藥材的氣味等方式來判定北蒼術(shù)的品質(zhì)優(yōu)劣,在本實(shí)驗(yàn)中,我們采用了HPLC法,相對(duì)客觀地對(duì)北蒼術(shù)中有效成分的含量進(jìn)行檢測,以直觀的了解所測樣品的品質(zhì)優(yōu)劣,在以后的研究中,我們將繼續(xù)致力于蒼術(shù)質(zhì)量評(píng)價(jià)的工作,為建立更加完善的質(zhì)量評(píng)價(jià)體系貢獻(xiàn)一份力量。