楊鴻玲

（四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，四川省人民醫(yī)院腎臟內(nèi)科，四川 成都 610072）

白細(xì)胞與腎小管上皮細(xì)胞均是尿液有形成分中的重要組成部分。腎盂腎炎患者、尿道炎患者和膀胱炎患者常表現(xiàn)為尿液中白細(xì)胞增多，而急性腎小管壞死患者、腎淀粉樣變性患者、間質(zhì)性腎炎患者則常表現(xiàn)為尿液中腎小管上皮細(xì)胞增多[1]。白細(xì)胞與腎小管上皮細(xì)胞在顯微鏡下的形態(tài)類似，因此尋找一種能夠快速、準(zhǔn)確地區(qū)分這兩類細(xì)胞的檢測方法對腎病患者的病情進(jìn)行鑒別診斷具有重要的意義。臨床上在進(jìn)行尿沉渣顯微鏡檢時(shí)主要采用染色法區(qū)分尿液中的有形 成 分。S-M（Sternheimer-Malbin） 法、S(Sternheimer)法和P-B(Prescott-Brodie)法均是進(jìn)行尿沉渣顯微鏡檢時(shí)的染色法。S-M法和S法均是利用超活體染色原理對尿液中的有形成分進(jìn)行染色，以區(qū)分不同類型的細(xì)胞的一種染色法。但這兩種染色法均不能特異性地區(qū)分出尿液中的白細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞。P-B法是利用白細(xì)胞特有的過氧化物酶的特異性原理對尿液中的白細(xì)胞進(jìn)行染色，以區(qū)分出白細(xì)胞與腎小管上皮細(xì)胞的一種染色法。但此染色法目前在臨床上并未得到廣泛的應(yīng)用[2]。另外，尿液自動(dòng)分析儀是目前臨床上應(yīng)用最為廣泛的尿液檢測儀器。但是，用此檢測儀對尿液中的有形成分進(jìn)行檢測，無法準(zhǔn)確地區(qū)分出其中的白細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞，這可能是因?yàn)槟蛞鹤詣?dòng)分析儀內(nèi)置數(shù)據(jù)庫的信息量有限[3]。本次研究主要是對比用S-M法、S法、P-B法和自動(dòng)分析儀對尿液標(biāo)本中的有形成分進(jìn)行同步檢測的結(jié)果，以明確用P-B法是否可以快速、簡單、可靠地區(qū)分出尿沉渣中的白細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次研究的對象為2013年9月至2014年9月期間在四川省人民醫(yī)院腎臟內(nèi)科住院治療的70例腎病患者的70份新鮮尿液標(biāo)本。在這70例患者中，尿路感染患者有50例，急性腎間質(zhì)損害患者有20例。

1.2 研究方法

對這70份新鮮尿液標(biāo)本分別采用S-M法、S法、P-B法和自動(dòng)分析儀進(jìn)行尿液有形成分檢測。具體的方法如下。

1.2.1 儀器與試劑 1）S-M染色法使用現(xiàn)有的商品化試劑S-M液（由BASO公司生產(chǎn)）。2）S染色法使用現(xiàn)有的商品化試劑S液（由BASO公司生產(chǎn)）。3）P-B染色法使用自配的染色劑，染色劑的成分包括2，7-二氨基芴、熒光桃紅B、乙醇、醋酸鈉、醋酸和雙氧水（上述試劑均購于南京化學(xué)試劑股份有限公司）。4）自動(dòng)分析儀為SYSMEX UF-1000I自動(dòng)分析檢測儀。

1.2.2 采集檢測標(biāo)本 收集患者的10 ml新鮮尿液作為檢測標(biāo)本。

1.3 檢測方法

1）使用S-M法、S法和P-B法進(jìn)行尿沉渣顯微鏡檢的方法是：⑴將檢測標(biāo)本置于離心管中，對其進(jìn)行10 min的離心處理，棄上清液，保留下層0.2 ml的尿沉渣。⑵將尿沉渣充分混勻后，分別使用S-M法、S法和P-B法對其進(jìn)行染色。⑶將染色后的尿沉渣充入計(jì)數(shù)板內(nèi)靜置3 min，在高倍顯微鏡下對其進(jìn)行計(jì)數(shù)，然后計(jì)算出每1 μL尿液中各類細(xì)胞的含量。2）使用尿液自動(dòng)分析檢測儀對尿液檢測標(biāo)本進(jìn)行檢測。⑴在進(jìn)行檢測前對尿液自動(dòng)分析檢測儀進(jìn)行質(zhì)控監(jiān)測，并檢查儀器的性能是否符合本次檢測的要求。⑵嚴(yán)格按照自動(dòng)分析檢測儀檢測的操作規(guī)程對檢測標(biāo)本進(jìn)行檢測。

1.3.1 陽性結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)[4]1）對尿沉渣進(jìn)行顯微鏡檢陽性結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)是：尿液中白細(xì)胞的正常范圍為0～5個(gè)/每高倍鏡視野，腎小管上皮細(xì)胞的正常范圍為0個(gè)/每高倍鏡視野。若檢測結(jié)果超過上述范圍即可判定標(biāo)本的檢測結(jié)果為陽性。2）對尿液進(jìn)行自動(dòng)分析檢測儀檢測陽性結(jié)果的判定標(biāo)準(zhǔn)是：尿液中白細(xì)胞的正常范圍為0～30個(gè)/μL，腎小管上皮細(xì)胞的正常范圍為0個(gè)/μL。若檢測結(jié)果超過上述范圍即可判定標(biāo)本的檢測結(jié)果為陽性。

1.3.2 檢測準(zhǔn)確度、靈敏度和特異度的判定方法 將白細(xì)胞的陽性檢出結(jié)果作為陽性結(jié)果，將腎小管上皮細(xì)胞的陽性檢出結(jié)果作為陰性結(jié)果。準(zhǔn)確度=（真陽性檢出結(jié)果+真陰性檢出結(jié)果）/總數(shù)。靈敏度=真陽性檢出結(jié)果/（真陽性檢出結(jié)果+假陰性檢出結(jié)果）。特異度=真陰性檢出結(jié)果/（真陰性檢出結(jié)果+假陽性檢出結(jié)果）。

1.4 觀察指標(biāo)

觀察使用這四種檢測方法區(qū)分這些尿液標(biāo)本中白細(xì)胞與腎小管上皮細(xì)胞的準(zhǔn)確度、靈敏度和特異度。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

將本次研究中的數(shù)據(jù)錄入到SPSS23.0軟件中進(jìn)行處理，計(jì)量資料用（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料用%表示，采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 用這四種檢測方法對這70份檢測標(biāo)本中白細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞進(jìn)行檢測結(jié)果的比較

對這70份檢測標(biāo)本進(jìn)行檢測的結(jié)果顯示，用這四種檢測方法對標(biāo)本中白細(xì)胞進(jìn)行檢查的陽性檢出率相比，P＞0.05；用這四種檢測方法對標(biāo)本中腎小管上皮細(xì)胞進(jìn)行檢查的陽性檢出率相比，P＞0.05。詳見表1。

表1 用這四種檢測方法對這70份檢測標(biāo)本中白細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞進(jìn)行檢測結(jié)果的比較

2.2 用這四種檢測方法區(qū)分尿液標(biāo)本中白細(xì)胞與腎小管上皮細(xì)胞的準(zhǔn)確度、靈敏度和特異度的比較

與使用S-M法、S法和自動(dòng)分析儀相比，使用P-B法對這些尿液標(biāo)本中的白細(xì)胞與腎小管上皮細(xì)胞進(jìn)行區(qū)分的準(zhǔn)確度、靈敏度和特異度均更高，P＜0.05。詳見表2。

表2 用這四種檢測方法區(qū)分尿液標(biāo)本中白細(xì)胞與腎小管上皮細(xì)胞的準(zhǔn)確度、靈敏度和特異度的比較（%）

3 討論

尿液中的有形成分是指尿液中通過泌尿系統(tǒng)以可見的形式排出、滲出、脫落和結(jié)晶形成的物質(zhì)的總稱。對受檢者尿液中的有形成分進(jìn)行檢測，是對其泌尿系統(tǒng)各部位病變進(jìn)行診斷及判斷其預(yù)后的重要環(huán)節(jié)[5]。白細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞均是尿液中有形成分的重要組成部分。尿液中完整白細(xì)胞的形態(tài)與外周血中完整白細(xì)胞的形態(tài)基本一致，其均呈圓形，直徑為10～14 μm。人體白細(xì)胞在未染色時(shí)呈現(xiàn)灰白色，其細(xì)胞核模糊，胞漿內(nèi)可見清晰顆粒。人體腎小管上皮細(xì)胞是由腎遠(yuǎn)曲小管上皮及近曲小管上皮脫落的細(xì)胞，其形態(tài)表現(xiàn)不一，多為圓形[6]。進(jìn)行尿沉渣顯微鏡檢是對尿液中有形成分進(jìn)行形態(tài)學(xué)臨床檢驗(yàn)的主要方法，具有操作簡便、快捷、特異性高、經(jīng)濟(jì)實(shí)用等特點(diǎn)。目前，臨床上主要是通過鏡檢染色法區(qū)分尿沉渣中的白細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞或使用尿液自動(dòng)分析儀區(qū)分尿液中的白細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞。S-M法是1951年開始使用的根據(jù)超活體染色原理區(qū)分尿沉渣中有形成分的一種染色法。此染色法主要是利用結(jié)晶紫和沙黃進(jìn)行超活體染色，可在使中性粒細(xì)胞顯色的同時(shí)，將細(xì)菌、上皮細(xì)胞、管型等多種類型的有形成分染成鮮明的顏色。用此染色法對尿沉渣進(jìn)行染色后，白細(xì)胞的細(xì)胞核為紫色，其細(xì)胞質(zhì)為紫色或淡藍(lán)色；上皮細(xì)胞的細(xì)胞核多為紫色-紅褐色，其細(xì)胞質(zhì)多為淡紫色[7]。S法是1975年開始使用的根據(jù)超活體染色原理區(qū)分尿沉渣中有形成分的一種染色法。此染色法可清晰地顯示出細(xì)胞核與胞漿，對尿液中的各類有形成分均有明顯的顯色作用。用此染色法對尿沉渣進(jìn)行染色后，白細(xì)胞的細(xì)胞核為藍(lán)色，其細(xì)胞質(zhì)為紅紫色；腎小管上皮細(xì)胞的細(xì)胞核為藍(lán)色，其胞質(zhì)呈淺紅色[8]。這兩種染色法均是臨床上使用頻率較高的尿沉渣染色法，目前已有商業(yè)化的試劑產(chǎn)品，使用較為方便。但是，這兩種染色法受其染色原理的限制，并不能顯著地區(qū)分出尿液中的白細(xì)胞與腎小管上皮細(xì)胞。近年來，尿液自動(dòng)分析儀在臨床上得到了廣泛的使用。用此分析儀對尿液中的這兩種細(xì)胞進(jìn)行檢測和分析具有快速、簡單、自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，極大地提高了臨床檢驗(yàn)工作的效率。但是，尿液中有形成分的形態(tài)可因疾病的關(guān)系發(fā)生較大的變化，當(dāng)尿液標(biāo)本中細(xì)胞形態(tài)的變化超過儀器內(nèi)置的數(shù)據(jù)庫庫存時(shí)，儀器在識別其中的有形成分時(shí)就會(huì)產(chǎn)生誤差。另外，尿液自動(dòng)分析儀并不能單獨(dú)用于檢測尿液中的腎小管上皮細(xì)胞，達(dá)不到區(qū)分尿液中白細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞的目的。P-B法是1964年開始使用的根據(jù)白細(xì)胞中含有特有的過氧化物酶原理區(qū)分尿沉渣中的有形成分的一種染色法。此染色法主要是通過白細(xì)胞中特有的過氧化物酶在過氧化氫條件下將色原體氧化顯色，可特異性地區(qū)分尿沉渣中的白細(xì)胞和其他細(xì)胞。用此染色法對尿沉渣進(jìn)行染色后，白細(xì)胞的胞漿立即呈現(xiàn)藍(lán)色，隨后全部變成深藍(lán)色-黑色；腎小管上皮細(xì)胞則被染成紅色。本次研究的結(jié)果顯示，與使用S-M法、S法和自動(dòng)分析儀相比，使用P-B法對這些尿液標(biāo)本中的白細(xì)胞與腎小管上皮細(xì)胞進(jìn)行區(qū)分的準(zhǔn)確度、靈敏度和特異度均更高，P＜0.05。這說明，P-B法在進(jìn)行尿沉渣檢測時(shí)區(qū)分白細(xì)胞和腎小管上皮細(xì)胞中的應(yīng)用價(jià)值較高，可作為鑒別診斷各類腎病的首選檢測方法。