陳澤衍 陳曉靜 鄭文斌 黃漢蓮 蘭希 吳云風(fēng) 馬雯

【摘要】 目的：探究微小核糖核酸146a（miR-146a）、微小核糖核酸375（miR-375）聯(lián)合甲胎蛋白（AFP）檢測(cè)在診斷原發(fā)性肝癌中的應(yīng)用價(jià)值。方法：選取2017年2月-2019年4月在本院治療的53例原發(fā)性肝癌患者作為肝癌組，將本院同期收治的53例肝臟良性疾病患者作為良性組。檢測(cè)所有患者的血清AFP含量及miR-146a、miR-375相對(duì)表達(dá)量。比較兩組血清AFP含量及miR-146a、miR-375相對(duì)表達(dá)量。對(duì)肝癌組miR-375、miR-146a及AFP檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行ROC曲線分析，根據(jù)ROC曲線得miR-375、miR-146a的最佳臨界值。對(duì)肝癌組進(jìn)行miR-375、miR-146a、AFP檢測(cè)及聯(lián)合檢測(cè)，比較各個(gè)檢測(cè)方法的敏感度、特異度和ROC曲線下面積（area under curve，AUC）。結(jié)果：肝癌組miR-146a、miR-375相對(duì)表達(dá)量及AFP含量均高于良性組（P<0.05）;聯(lián)合檢測(cè)敏感度均高于miR-146a與AFP檢測(cè)，且特異度高于miR-375檢測(cè)（P<0.05）;聯(lián)合檢測(cè)AUC大于AFP、miR-146a及miR-375檢測(cè)（P<0.05）。結(jié)論：miR-146a、miR-375聯(lián)合AFP檢測(cè)在診斷原發(fā)性肝癌中具有較高的敏感度、特異度。

【關(guān)鍵詞】 微小核糖核酸146a 微小核糖核酸375 甲胎蛋白 原發(fā)性肝癌

[Abstract] Objective： To explore the value of detection of microRNA 146a （miR-146a）， microRNA 375 （miR-375） and alpha fetoprotein （AFP） in the diagnosis of primary liver cancer. Method： A total of 53 patients with primary liver cancer treated in our hospital from February 2017 to April 2019 were selected as the liver cancer group， and the 53 patients with benign liver diseases admitted to our hospital during the same period were selected as the benign group. The serum AFP content and the relative expression of miR-146a and miR-375 were detected in all patients. The serum AFP content and relative expressions of miR-146a and miR-375 in the two groups were compared. ROC curve analysis was performed on the detection results of miR-375， miR-146a and AFP in the liver cancer group， and the optimal critical values of miR-375 and miR-146a were obtained according to the ROC curve. Result： The relative expressions and AFP content of miR-146a and miR-375 in the liver cancer group were higher than those in the benign group （P<0.05）. The sensitivity of combined detection were higher than those of miR-146a and AFP detection， and the specificity was higher than that of miR-375 detection （P<0.05）. The AUC of combined detection were higher than those of AFP， miR-146a and miR-375 detection （P<0.05）. Conclusion： The detection of miR-146a and miR-375 combined with AFP have high sensitivity and specificity in the diagnosis of primary liver cancer.

[Key words] miR-146a miR-375 AFP Primary liver cancer

First-authors address： Shenzhen Hospital of Southern Medical University， Shenzhen 518110， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.36.033

原發(fā)性肝癌是常見的惡性腫瘤之一，多發(fā)于40～50歲人群，男性多于女性，早期癥狀不明顯，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)已是中晚期。有研究指出，早期肝癌患者手術(shù)治療的效果及預(yù)后遠(yuǎn)高于中晚期，因此提高早期原發(fā)性肝癌的診斷準(zhǔn)確率至關(guān)重要[1]。臨床上常采用血清甲胎蛋白（alpha fetoprotein，AFP）診斷原發(fā)性肝癌，但AFP診斷的敏感性僅為40%～60%[2]。微小核糖核酸146a（miR-146a）、微小核糖核酸375（miR-375）屬于非編碼RNA，可調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖、分化，與腫瘤細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。目前，國內(nèi)雖有關(guān)于miR-146a、miR-375診斷原發(fā)性肝癌的報(bào)道，但對(duì)miR-146a、miR-375聯(lián)合AFP診斷原發(fā)性肝癌的報(bào)道較少。因此本研究采用miR-146a、miR-375聯(lián)合AFP檢測(cè)診斷原發(fā)性肝癌，旨在探究聯(lián)合檢測(cè)在原發(fā)性肝癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年2月-2019年4月在本院治療的53例原發(fā)性肝癌患者作為觀察組，將本院同期收治的53例肝臟良性疾病患者作為良性組。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）符合《原發(fā)性肝癌規(guī)范化病理診斷指南》中關(guān)于原發(fā)性肝癌的診斷[3];（2）均屬于首次發(fā)病;（3）臨床資料完整者;（4）未接受過化療及放療治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）存在其他惡性腫瘤及轉(zhuǎn)移癌者;（2）嚴(yán)重心、腎功能異常者;（3）妊娠期或哺乳期婦女;（4）酒精肝及其他類型肝臟疾病者。所有患者及家屬均知情同意并簽署知情同意書，本研究已經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法 于清晨抽取患者靜脈血3 mL，對(duì)血樣進(jìn)行離心處理，取血清標(biāo)本。（1）miR-375、miR-146a檢測(cè)：用Rneasy MiNi Kit（50）總RNA提取試劑盒取血清中總RNA，用試劑盒合成cDNA，以GAPDH抗體為內(nèi)參，采用2-△△Ct表示miR-375、miR-146a相對(duì)表達(dá)量，采用熒光定量PCR法檢測(cè)兩組血清miR-375、miR-146a相對(duì)表達(dá)量[4]。（2）AFP檢測(cè)：采用放射免疫法檢測(cè)血清AFP含量，據(jù)《原發(fā)性肝癌規(guī)范化病理診斷指南（2015年版）》中顯示，AFP≥400 μg/L即可診斷為原發(fā)性肝癌。（3）聯(lián)合檢測(cè)：三種指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)時(shí)其中任何一種指標(biāo)大于正常參考上限即可診斷為原發(fā)性肝癌。

1.3 觀察指標(biāo)（1）比較兩組血清miR-375、miR-146a相對(duì)表達(dá)量及AFP含量。（2）對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行ROC曲線分析，比較miR-375、miR-146a、AFP單獨(dú)檢測(cè)及聯(lián)合檢測(cè)的敏感度、特異度和ROC曲線下面積（AUC）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，比較采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗(yàn);對(duì)三種檢測(cè)方法及聯(lián)合檢測(cè)制作ROC曲線，進(jìn)行ROC曲線分析，計(jì)算AUC，AUC>0.5代表該檢測(cè)方法具有檢測(cè)價(jià)值;采用Z檢驗(yàn)比較AUC的差異性。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較 肝癌組男27例，女26例;年齡40～75歲，平均（61.74±5.39）歲;腫瘤直徑平均（4.21±1.05）cm。良性組男33例，女20例;年齡42～78歲，平均（59.32±6.08）歲。兩組性別、年齡一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

2.2 兩組血清miR-375、miR-146a相對(duì)表達(dá)量及AFP含量比較 肝癌組miR-375、miR-146a相對(duì)表達(dá)量及AFP含量均高于良性組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.3 各檢測(cè)方法對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值比較 據(jù)ROC曲線得miR-375、miR-146a的最佳臨界值分別為12.55、3.86;AFP檢測(cè)的AUC均低于聯(lián)合檢測(cè)（P<0.05）;聯(lián)合檢測(cè)敏感度均高于miR-146a、AFP檢測(cè)，特異度高于miR-375檢測(cè)（P<0.05），見表2、圖1。

3 討論

早期原發(fā)性肝癌患者一般無明顯不適感，等患者感受到疼痛時(shí)已進(jìn)入中晚期，但中晚期治療效果不佳，晚期肝癌患者5年存活率不足10%，因此，提高原發(fā)性肝癌的早期確診率是延長患者存活時(shí)間的關(guān)鍵[5]。AFP是一種糖蛋白，主要由胎兒肝細(xì)胞及卵黃囊合成，AFP在胎兒血清中具有較高的濃度，胎兒分娩后AFP含量迅速下降，到出生后2～3月AFP會(huì)完全被白蛋白替代，故在成人血清中含量極低。AFP因與多種腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)，并在肝臟腫瘤中含量較高，是臨床上診斷原發(fā)性肝癌的檢測(cè)標(biāo)志物[6-8]。有研究指出，大多數(shù)原發(fā)性肝癌患者體內(nèi)AFP含量遠(yuǎn)高于正常個(gè)體及其他肝臟疾病患者[9]。本研究中，肝癌組血清AFP值高于良性組（P<0.05），說明原發(fā)性肝癌患者體內(nèi)AFP含量遠(yuǎn)高于其他肝臟疾病患者，與上述研究一致[10]。微小核糖核酸是一條長約22nt的非編碼RNA，能與mRNA相結(jié)合，阻礙蛋白編碼基因的表達(dá)，抑制蛋白翻譯過程miR-375、miR-146a基因?qū)儆诨蜷g型的miRNA，其位于Cryba2基因和Ccdc108基因之間，與腫瘤的增殖分化密切相關(guān)，并參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展等過程[11-12]。有研究顯示，miR-146a、miR-375與肝癌等惡性腫瘤關(guān)系密切，能進(jìn)入線粒體控制其基因表達(dá)，且肝癌患者體內(nèi)miR-146a、miR-375表達(dá)水平均高于正常個(gè)體[13]。本研究中，肝癌組miR-375、miR-146a相對(duì)表達(dá)量高于對(duì)良性組（P<0.05），說明原發(fā)性肝癌患者體內(nèi)miR-375、miR-146a表達(dá)水平高于肝臟良性疾病患者。

國外有研究指出，miR-375、miR-146a檢測(cè)對(duì)多種惡性腫瘤疾病均具有較高的敏感度，但仍存在原發(fā)性肝癌患者體內(nèi)miR-375、miR-146a表達(dá)呈正常水平的情況[14-15]。有相關(guān)研究表明，AFP對(duì)早期原發(fā)性肝癌患者的敏感度較低，有近40%的早期肝癌患者AFP檢測(cè)呈陰性，因此尋求對(duì)早期原發(fā)性肝癌敏感度高的血清診斷方法越來越有必要[16-18]。較為理想的腫瘤標(biāo)志物不僅對(duì)晚期腫瘤具有較高的特異度，并能將早期肝癌與肝炎等肝臟良性疾病區(qū)分開。有研究表明，采用AFP檢測(cè)及微小RNA聯(lián)合診斷原發(fā)性肝癌敏感度、特異度較高[19]。本研究中，聯(lián)合檢測(cè)敏感度均高于miR-146a、AFP檢測(cè)，特異度高于miR-375檢測(cè)（P<0.05），說明聯(lián)合檢測(cè)診斷原發(fā)性肝癌具有較高的敏感度和特異度。黃述婧等[20]采用miR-375、miR-146a聯(lián)合AFP診斷原發(fā)性肝癌，證實(shí)了聯(lián)合診斷具有較高的敏感度和特異度，與本研究結(jié)果相同。在ROC曲線分析中，聯(lián)合檢測(cè)的AUC均大于miR-375、miR-146a、AFP單獨(dú)檢測(cè)，可認(rèn)為在對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷中，聯(lián)合檢測(cè)價(jià)值高于單獨(dú)檢測(cè)，與文獻(xiàn)[21]研究一致。

綜上所述，采用miR-375、miR-146a聯(lián)合AFP診斷原發(fā)性肝癌敏感度、特異度高，具有較高的臨床價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

[1]於琳，張開炯，柴利，等.原發(fā)性肝癌患者癌組織、血清miR-202表達(dá)變化及其意義[J].山東醫(yī)藥，2017，57（7）：1-4.

[2]王攀，莫經(jīng)剛，朱杰，等.微滴數(shù)字PCR檢測(cè)血清miR-21和miR-4429在肝癌診斷中的應(yīng)用[J].浙江醫(yī)學(xué)，2017，39（3）：170-172.

[3]叢文銘，步宏，陳杰，等.原發(fā)性肝癌規(guī)范化病理診斷指南（2015年版）[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2015，21（6）：833-839.

[4]趙文淘，韓留鑫，夏加偉，等.血清miR-26a、miR-122、AFP聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肝癌的診斷效能[J].山東醫(yī)藥，2018，58（7）：73-75.

[5]何伯圣，石偉湘，龔沈初，等.外周血miR-122檢測(cè)聯(lián)合MRI擴(kuò)散加權(quán)成像評(píng)價(jià)肝癌射頻治療的療效[J].中華實(shí)用診斷與治療雜志，2017，31（10）：998-1001.

[6]劉沖，唐浩，鄧霖，等.血清miRNA-186，miRNA-30 c在肝細(xì)胞性癌中診斷價(jià)值的研究[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2016，31（6）：44-47.

[7]陳浩宇，嘉紅云，吳曉蔓.肝細(xì)胞癌患者外周血中miR-26b的表達(dá)及意義[J].中華實(shí)用診斷與治療雜志，2016，30（12）：1215-1216.

[8]任雪維，張吉才.肝細(xì)胞肝癌患者血漿miR-29a水平的變化及其臨床意義[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2017，32（32）：35-36.

[9]毛玉環(huán)，譚黎明，李建英，等.血清殼多糖酶3樣蛋白1和甲胎蛋白及鐵蛋白檢測(cè)在原發(fā)性肝癌診斷中的應(yīng)用評(píng)價(jià)[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2018，25（4）：401-404.

[10]黃裔程.AFP、AFU、GGT、D-D聯(lián)合檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2018，15（10）：38-40.

[11]鄭園園，郭傳勇，周瑩群，等.微小核糖核酸調(diào)控通路基因多態(tài)性與原發(fā)性肝癌相關(guān)性的研究進(jìn)展[J].世界臨床藥物，2017，40（7）：489-495.

[12]楊永飛，孫運(yùn)秀，蔡鈞.肝細(xì)胞癌患者血清miR-301表達(dá)變化及意義[J].山東醫(yī)藥，2018，58（24）：72-74.

[13]郜艷芳，尹金明，王進(jìn).磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3和AFP聯(lián)合檢測(cè)對(duì)原發(fā)性肝癌的診斷價(jià)值[J].河北醫(yī)學(xué)，2015，21（4）：687-689.

[14] He X X，Chang Y，Meng F Y，et al.MicroRNA-375 targets AEG-1 in hepatocellular carcinoma and suppresses liver cancer cell growth in vitro and in vivo[J].Oncogene，2012，31（28）：3357-3369.

[15] Zhang Q，Zhi Y，Shan J，et al.MicroRNA-449a maintains self-renewal in liver cancer stem-like cells by targeting Tcf3[J].Oncotarget，2017，8（66）：110187-110200.

[16]吳存造，王涌，彭承宏.甲胎蛋白信使核糖核酸與原發(fā)性肝癌（文獻(xiàn)綜述）[J].國際外科學(xué)雜志，2002，29（5）：265-267.

[17]趙之聰，王健東.微小RNA與肝癌肝移植術(shù)后腫瘤復(fù)發(fā)的研究進(jìn)展[J].器官移植，2017，8（3）：238-241.

[18]翟璐.血清AFP聯(lián)合GP73、Vimentin、SCCA-IgM IC對(duì)HBV相關(guān)早期HCC的診斷價(jià)值[D].天津：天津醫(yī)科大學(xué)，2014.

[19]馬軍朋，盧偉，陳軍麗，等.數(shù)字減影血管造影與超聲對(duì)微小肝癌診斷價(jià)值的比較研究[J].醫(yī)療衛(wèi)生裝備，2019，40（1）：66-68.

[20]黃述婧，姜菲菲，王穎，等.AFP與PIVKA-Ⅱ聯(lián)合檢測(cè)在原發(fā)性肝癌診斷中的應(yīng)用研究[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2016，23（10）：1134-1138，1128.

[21]甘雨，于新發(fā)，周成宇，等.甲胎蛋白在原發(fā)性肝癌的診斷和預(yù)后判斷中的臨床價(jià)值[J].海南醫(yī)學(xué)，2016，27（6）：891-894.

（收稿日期：2019-6-19）（本文編輯：田婧）