范凈 陳啟亮 楊曉平 張靖國(guó) 胡紅菊

摘要：為比較不同砂梨種質(zhì)資源葉片總酚含量的多樣性，對(duì)117份不同砂梨品種葉片的總酚含量進(jìn)行測(cè)定和分析。結(jié)果表明，不同砂梨品種鮮葉中總多酚含量為8.67～32.29 mg/g，平均總多酚含量20.44 mg/g，變異系數(shù)22.92%，遺傳多樣性指數(shù)2.09。不同種質(zhì)類型的平均變異系數(shù)為地方品種（23.81%）大于國(guó)內(nèi)選育品種（23.63%）大于國(guó)外引進(jìn)品種（19.03%），平均遺傳多樣性指數(shù)為地方品種（2.10）大于國(guó)內(nèi)選育品種（1.82）大于國(guó)外引進(jìn)品種（1.80）。

關(guān)鍵詞：砂梨葉片;總酚;遺傳多樣性

中圖分類號(hào)：S661.2;Q946.84? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（2019）23-0116-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.23.025? ? ? ? ? ?開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Diversity analysis of total polyphenols in leaves of sand pear germplasms

FAN Jing1，2，CHEN Qi-liang1，YANG Xiao-ping1，2，ZHANG Jing-guo1，HU Hong-ju1

（1.Research Institute of Fruit and Tea，Hubei Academy of Agriculture Sciences，Wuhan 430064，China;

2.Laboratory of Integrated Pest Management on Crop in Central China，Ministry of Agriculture，Wuhan 430064，China）

Abstract： In order to compare the diversity of total phenolic content in leaves of different sand pear germplasm resources， the total phenolic content of 117 leaves of different sand pear varieties was examined and analyzed. The results showed that the total polyphenol content in fresh leaves of different sand pear varieties ranged from 8.67-32.29 mg/g， the average total polyphenol content was 20.44 mg/g， the coefficient of variation was 22.92%， and the genetic diversity index was 2.09. The average coefficient of variation of different germplasm types was local breed （23.81%） larger than domestic breeds （23.63%） than foreign introduced varieties （19.03%）， and the average genetic diversity index is that the domestic varieties（1.82） of local varieties （2.10） are larger than the imported varieties （1.80）.

Key words： sand pear leaves; total polyphenols; genetic diversity

多酚類化合物是一類廣泛存在于植物體內(nèi)的次生代謝產(chǎn)物，在植物的根、皮、葉、果各部位都有分布。多酚是一類具有苯環(huán)并結(jié)合多個(gè)羥基化學(xué)結(jié)構(gòu)的物質(zhì)總稱，包括簡(jiǎn)單酚類、酚酸、類黃酮、香豆素、花青素、兒茶素和單寧類等[1]。酚類物質(zhì)在醫(yī)藥行業(yè)可以應(yīng)用于消炎、抗氧化、預(yù)防心血管疾病、預(yù)防和改善糖尿病及高血脂的脂質(zhì)代謝紊亂等方面[2-4]，在食品上可以應(yīng)用于抑菌保鮮[5]，參與植物的抗病反應(yīng)[6，7]。

梨是中國(guó)南北均可栽培的主要果樹，梨果具有潤(rùn)肺涼心、消痰降火等保健作用，梨的果實(shí)、果皮、葉片酚類物質(zhì)種類多樣、含量豐富[8-10]。砂梨種質(zhì)資源豐富，適應(yīng)性強(qiáng)，在全國(guó)各地均有栽培。為有效利用和開發(fā)砂梨葉片在醫(yī)藥保健品方面的應(yīng)用潛力，對(duì) 117份不同砂梨種質(zhì)資源成熟葉片的總多酚含量進(jìn)行分析，明確不同砂梨品種間葉片多酚含量的差異性，篩選出多酚含量高的特異資源。

1? 材料與方法

1.1? 材料

葉片采于湖北省武漢市江夏區(qū)湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院果樹茶葉研究所金水基地國(guó)家果樹種質(zhì)武昌砂梨圃（N 30.2931°，E 114.1486°），117份不同的砂梨種質(zhì)資源為8年生健壯樹，管理水平一致。梨樹新稍停長(zhǎng)后，隨機(jī)采集一年生枝條中部的成熟葉片，每份資源采集30片葉片，低溫冷藏送至實(shí)驗(yàn)室，液氮冷凍后置于-80 ℃保存。采集時(shí)間為2018年7月10日。

1.2? 葉片多酚提取

樣品液氮超低溫冷凍研磨均勻后稱取0.2 g置于50 mL離心管中，加入30 mL的70%乙醇，混合后超聲波提取45 min，9 000 r/min離心10 min，收集10 mL上清液待測(cè)。每份樣品3次重復(fù)。

1.3? 總酚含量檢測(cè)

在10 mL離心管中加入上層清液0.2 mL，空白對(duì)照加入0.2 mL 70%乙醇。再加入1 mL Folin Ciocalteu（Solarbio，Beijing）顯色劑，3 mL 7.5%碳酸鈉溶液，5.8 mL純水，混合均勻，40 ℃水浴20 min后冷卻，770 nm測(cè)定樣品吸光值。以沒食子酸為基準(zhǔn)物質(zhì)，計(jì)算梨葉多酚含量?；貧w方程為y=6.566 4x+0.131 1，R2=0.999 7。多酚含量（mg/g）=ρ×V×N/m，式中，ρ為上樣液中多酚質(zhì)量體積比（mg/mL），V為粗提液體積（mL），N為稀釋倍數(shù)，m為梨葉片鮮重（g）。

1.4? 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)用Microsoft Office Excel 2010和SPSS 21.0處理，計(jì)算117份多酚含量的平均值、最大值、最小值、變異系數(shù)、遺傳多樣性Shannon's信息指數(shù)（H'），作分布直方圖，采用組內(nèi)歐式平方距離法對(duì)不同砂梨葉片多酚含量進(jìn)行聚類分析。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 不同砂梨資源葉片多酚含量的分布情況

117份砂梨鮮葉中總多酚含量為8.67～32.29 mg/g，平均值為20.44 mg/g，變異系數(shù)為22.92%，遺傳多樣性指數(shù)為2.09。分布直方圖顯示117份砂梨種質(zhì)資源的總酚含量呈正態(tài)分布（圖1）。葉片中多酚含量較高的有柳城鳳山梨（32.29 mg/g）、金吊子（31.18 mg/g）。

2.2? 不同種質(zhì)類型砂梨葉片總酚含量的遺傳多樣性

按照地方品種、國(guó)外引進(jìn)品種和國(guó)內(nèi)選育品種（品系）的不同種質(zhì)類型分析117份砂梨種質(zhì)資源葉片多酚含量變化的多樣性（表1）。結(jié)果顯示地方品種葉片中平均總酚含量高，變異系數(shù)大，多樣性指數(shù)高。國(guó)內(nèi)選育品種（品系）的葉片平均總酚含量低;國(guó)外引進(jìn)品種變異系數(shù)小，多樣性指數(shù)低。

2.3? 砂梨種質(zhì)資源葉片多酚含量的聚類分析

組內(nèi)歐式平方距離的聚類分析表明，在遺傳距離為5的水平可將117份砂梨種質(zhì)資源份為5個(gè)類群（圖2），各類群對(duì)比數(shù)據(jù)見表2。其中聚類1中9份種質(zhì)資源為葉片總酚含量偏低的種質(zhì)資源，聚類5中為葉片總酚含量偏高的種質(zhì)資源。聚類5中葉片為高酚含量的種質(zhì)資源中有13份為地方品種，1份國(guó)內(nèi)選育品種，1份國(guó)外引進(jìn)品種。

3? 小結(jié)與討論

多酚物質(zhì)在不同的植物中含量和成分不同，在同一作物的不同組織部位亦有差異。本研究分析117份砂梨種質(zhì)資源成熟葉片中的總酚，表現(xiàn)出豐富的遺傳多樣性。地方品種表現(xiàn)出平均總酚含量高、選擇潛力大、遺傳豐富的特點(diǎn)，說明地方品種遺傳多樣性豐富可能更容易挖掘高多酚含量的特異資源。不同砂梨品種葉片多酚含量多樣性分析為梨葉片保健功能的開發(fā)利用提供依據(jù)，為梨屬植物抗逆抗病研究積累數(shù)據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 董? 科，冷? 云，何方婷，等.植物多酚及其提取方法的研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)科技，2019，40（2）：326-330.

[2] 王? 佳，王? 菊，李亞欣，等.植物多酚的皮膚保護(hù)作用機(jī)制研究進(jìn)展[J].中藥材，2017，40（3）：733-737.

[3] WILLIAMSON G. The role of polyphenols in modern nutrition[J].Nutrition bulletin，2017，42（3）：226-235.

[4] 代燕麗，鄒宇曉，劉? 凡，等.植物多酚干預(yù)脂質(zhì)代謝紊亂作用機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國(guó)中藥雜志，2015，40（21）：4136-4141.

[5] 符莎露，吳甜甜，吳春華，等.植物多酚的抗氧化和抗菌機(jī)理及其在食品中的應(yīng)用[J].食品工業(yè)，2016，37（6）：242-246.

[6] 王? 欣，靳麗梅，徐鵬飛，等.野生大豆接種大豆疫霉根腐病菌后總多酚含量的變化[J].作物雜志，2012（4）：78-82.

[7] ANDREOTTI C，COSTA G，TREUTTER D. Composition of phenolic compounds in pear leaves as affected by genetics，ontogenesis and the environment[J].Scientia horticulturae，2006，109（2）：130-137.

[8] 曾少敏，楊? 健，王? 龍，等.梨果實(shí)酚類物質(zhì)含量及抗氧化能力[J].果樹學(xué)報(bào)，2014，31（1）：39-44.

[9] KOLNIAK-OSTEK J. Identification and quantification of polyphenolic compounds in ten pear cultivars by UPLC-PDA-Q/TOF-MS[J].Journal of food composition and analysis，2016，49：65-77.

[10] LIN L Z，HARNLY J M. Phenolic compounds and chromatographic profiles of pear skins （Pyrus spp.）[J].Journal of agricultural and food chemistry，2008，56（19）：9094-9101.