肖文霞,王會(huì)芝,周廣杰,欒艷秋

(北京市東城區(qū)第一婦幼保健院婦產(chǎn)科,北京 100007)

稽留流產(chǎn)是指胚胎或胎兒發(fā)育停止,超聲檢查提示空妊娠囊或胚胎(胎兒)沒有胎心[1]?；袅鳟a(chǎn)的發(fā)生率大約為15%,稽留流產(chǎn)可給家庭帶來(lái)經(jīng)濟(jì)及心理負(fù)擔(dān),尤其是復(fù)發(fā)患者,往往給孕婦帶來(lái)焦慮、緊張、沮喪與不安等。因此,積極尋找稽留流產(chǎn)的發(fā)病原因,減少其發(fā)生,對(duì)于臨床工作及社會(huì)發(fā)展具有重要意義。目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者主要從基因、子宮異常、內(nèi)分泌與免疫異常、感染、營(yíng)養(yǎng)與環(huán)境、心理及子宮內(nèi)膜異位癥等多種因素進(jìn)行研究[2],然而稽留流產(chǎn)的確切病因尚未完全明確。本研究從細(xì)胞焦亡角度探討稽留流產(chǎn)的病因及發(fā)病機(jī)制,為臨床預(yù)防與治療稽留流產(chǎn)提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2017-05～2018-02之間本院門診就診的稽留流產(chǎn)婦女35例作為稽留流產(chǎn)組,另外選取同時(shí)期在本院門診就診的正常早孕要求人工流產(chǎn)婦女35例作為正常早孕組。兩組婦女年齡均為20-42歲。稽留流產(chǎn)組年齡為(26.5±1.1)歲,正常早孕組年齡為(27.1±1.2)歲,兩組年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。孕周均為8-10周,稽留流產(chǎn)組孕周為(8.3±0.3)周,正常早孕組孕周為(8.6±0.5)周,兩組孕周差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。兩組孕婦均無(wú)妊娠合并癥及內(nèi)外科合并癥,無(wú)宮內(nèi)感染及其他臨床發(fā)熱征象。經(jīng)超聲檢查證實(shí)稽留流產(chǎn)組宮內(nèi)孕未見胎心,正常早孕組為宮內(nèi)孕可見胎心。本研究由本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 標(biāo)本制備

①兩組婦女均在完善術(shù)前化驗(yàn)時(shí)，抽取清晨空腹靜脈血2-3 ml，室溫下充分凝血，2 000 r/min離心10 min，分離血清，置于-80 ℃冰箱待測(cè)。②稽留流產(chǎn)婦女清宮后或早孕婦女人工流產(chǎn)后，取蛻膜組織0.5-1.0 g，以冷生理鹽水漂洗至內(nèi)含血塊洗凈，吸干，稱重，置于-20 ℃冰箱備用。

1.3 實(shí)驗(yàn)步驟

①將已稱重的蛻膜組織加9倍的生理鹽水,倒入放置于冰塊中的玻璃管內(nèi),勻漿,以3 000 r/min離心15 min,取上清液分裝待測(cè)。②用ELISA法檢測(cè)血清及蛻膜組織中caspase-1和IL-1β和IL-18的水平,測(cè)量的步驟嚴(yán)格按照說(shuō)明書進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

2 結(jié)果

2.1 稽留流產(chǎn)與正常早孕婦女蛻膜中caspase-1、IL-1β和IL-18含量比較

與正常早孕組相比,稽留流產(chǎn)組蛻膜組織中caspase-1、IL-1β和IL-18均明顯升高,兩者差異均有統(tǒng)計(jì)意義(見表1)。

表1 兩組婦女蛻膜中caspase-1、IL-1β和IL-18水平比較Table 1 Comparison of caspase-1,IL-1β and IL-18 in decidua between two

2.2 稽留流產(chǎn)與正常早孕婦女血清中caspase-1、IL-1β和IL-18含量比較

與正常早孕婦女相比,稽留流產(chǎn)婦女血清中caspase-1、IL-1β和IL-18均明顯升高,兩者差異均有統(tǒng)計(jì)意義(見表2)。

表2 兩組婦女血清中caspase-1、IL-1β和IL-18測(cè)定結(jié)果Table 2 Result of caspase-1,IL-1β and IL-18 in serum of two

2.3 稽留流產(chǎn)婦女血清和蛻膜組織中caspase-1、IL-1β及IL-18相關(guān)性

稽留流產(chǎn)婦女血清和蛻膜中caspase-1呈正相關(guān)(r=0.422,P<0.01),IL-1β呈正相關(guān)(r=0.567,P<0.01),IL-18也呈正相關(guān)(r=0.376,P<0.01)。

3 討論

3.1 細(xì)胞焦亡

細(xì)胞焦亡(pyroptosis)是一種程序性細(xì)胞壞死形式,也稱細(xì)胞炎性壞死[3]?！凹?xì)胞焦亡”最早由華盛頓大學(xué)學(xué)者Cookson等[4]在2001年首次提出。pyroptosis一詞來(lái)源于希臘詞根“pyro”,意思是“火”或“熱”;“ptosis”,意味著“降落”,二者組合起來(lái)用以描述炎性程序性細(xì)胞死亡[5]。

細(xì)胞焦亡作為細(xì)胞死亡的一種形式,可被多種危險(xiǎn)因素所觸發(fā)。目前研究表明細(xì)胞焦亡可通過兩種途徑觸發(fā):經(jīng)典途徑及非經(jīng)典途徑[5]。經(jīng)典途徑可由炎性小體啟動(dòng)。炎性小體由識(shí)別分子、接頭蛋白ASC(凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白)及caspase-1(半胱氨酸蛋白酶-1)前體組成[6]。炎性小體是caspase-1的激活平臺(tái),當(dāng)機(jī)體受到刺激時(shí),可觸發(fā)caspase-1前體自我催化切割,形成P10/P20四聚體,變成具有活性的caspase-1。激活的caspase-1可促進(jìn)炎性細(xì)胞因子IL-1β(白介素-1β)和IL-18(白介素-18)從未成熟的前體形式轉(zhuǎn)化成為活性形式;激活的caspase-1也能引起細(xì)胞焦亡[7]。

非經(jīng)典途徑是通過非炎性小體途徑觸發(fā)。在鼠類,激活的caspase-11可直接觸發(fā)細(xì)胞焦亡。在人類caspase-4、caspase-5具有與鼠類caspase-11相同的功能[5]。caspase-11(人的caspase-4/5)不能切割I(lǐng)L-1β和IL-18前體而形成活性形式,但可以促進(jìn)炎性小體的組裝,從而激活caspase-1,間接誘導(dǎo)IL-1β和IL-18前體的成熟[8]。因此caspase-1激活是兩種途徑中的關(guān)鍵[9]。

最近研究表明:gasderminD(GSDMD)(消化道皮膚素D)是細(xì)胞焦亡的執(zhí)行者。GSDMD可被caspase-1/11/4/5切割,形成31 kD的N末端(GSDMDNterm)和22 kD的C末端(GSDMDcterm)片段,N末端可錨定細(xì)胞膜上的脂質(zhì)及其他成分,組裝成弧形、裂隙形及環(huán)形的寡聚體,每個(gè)寡聚體都可形成穿透細(xì)胞膜的小孔[10],這些小孔直徑大約10-16 nm,而成熟的IL-1β和IL-18分子直徑大約為4 nm,這種孔的直徑足以允許成熟的IL-1β和IL-18通過[11];這種孔可使陽(yáng)離子特別是Ca2+內(nèi)流,破壞了細(xì)胞的滲透壓和電化學(xué)梯度,使水分內(nèi)流,增加了細(xì)胞內(nèi)的壓力,導(dǎo)致細(xì)胞腫脹和溶解,引起細(xì)胞焦亡,隨后細(xì)胞內(nèi)的大量炎癥介質(zhì)包括尚未分泌到細(xì)胞外的活性IL-1β和IL-18釋放到細(xì)胞外[12]。目前caspase-1、IL-1β和IL-18是常用的研究細(xì)胞焦亡的指標(biāo)[13]。

3.2 細(xì)胞焦亡與稽留流產(chǎn)

本研究結(jié)果顯示:與正常早孕組相比,稽留流產(chǎn)組蛻膜組織中caspase-1、IL-1β和IL-18均明顯升高,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這說(shuō)明稽留流產(chǎn)婦女的蛻膜組織中存在著細(xì)胞焦亡,提示蛻膜細(xì)胞焦亡與稽留流產(chǎn)具有相關(guān)性。蛻膜具有多種功能:可以保護(hù)胚胎免受母體的免疫排斥;可在胎盤形成前給發(fā)育中的胚胎提供營(yíng)養(yǎng)[14,15];可調(diào)節(jié)滋養(yǎng)細(xì)胞的侵入和胎盤形成,還具有生物合成和分泌功能。蛻膜可以分泌催乳素(PRL)和胰島素生長(zhǎng)因子樣蛋白-1(IGFBP-1),在蛻膜-胎盤界面上,這兩種蛋白可以刺激滋養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)和侵入,可以防止免疫排斥,可以調(diào)節(jié)uNK細(xì)胞(子宮自然殺傷細(xì)胞)的生存以及促進(jìn)血管生成。因此蛻膜在妊娠建立時(shí)及整個(gè)孕期都起到支持妊娠的作用[16]。因此本研究推測(cè):稽留流產(chǎn)的發(fā)生是由于蛻膜細(xì)胞發(fā)生了細(xì)胞焦亡,蛻膜細(xì)胞死亡,不能給胚胎提供營(yíng)養(yǎng),不能保護(hù)胚胎免受母體排斥,不能促進(jìn)滋養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)與侵入,也不能分泌激素促進(jìn)胚胎發(fā)育及血管生成,因而導(dǎo)致胚胎失去蛻膜支持而死亡引起。本研究結(jié)果還顯示:與正常早孕組相比,稽留流產(chǎn)組血清中caspase-1、IL-1β和IL-18均明顯升高,差異均有統(tǒng)計(jì)意義,更進(jìn)一步證明細(xì)胞焦亡與稽留流產(chǎn)具有相關(guān)性。

通過對(duì)稽留流產(chǎn)婦女蛻膜和血清中caspase-1、IL-1β和IL-18的相關(guān)性分析,發(fā)現(xiàn)蛻膜和血清中的caspase-1、IL-1β及IL-18均呈正相關(guān)。這說(shuō)明蛻膜組織和血清中的細(xì)胞焦亡具有一致性。

總之,稽留流產(chǎn)是常見的妊娠并發(fā)癥,對(duì)孕婦及家庭影響較大。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外對(duì)稽留流產(chǎn)研究頗多,并已證實(shí)稽留流產(chǎn)是多個(gè)因素引起并相互作用的結(jié)果。本研究證實(shí)細(xì)胞焦亡與稽留流產(chǎn)具有相關(guān)性,因此,深入研究細(xì)胞焦亡的發(fā)病機(jī)制,積極尋找級(jí)聯(lián)反應(yīng)中的靶點(diǎn),從而抑制細(xì)胞焦亡,有望成為預(yù)防和治療稽留流產(chǎn)的新途徑。關(guān)于細(xì)胞焦亡與稽留流產(chǎn)的關(guān)系及分子機(jī)制仍待進(jìn)一步深入研究。