孫雷 (山東中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355)

〔關(guān)鍵詞〕 補(bǔ)腎；中藥；植物雌激素；活血化瘀；內(nèi)皮細(xì)胞；血管平滑?。淮萍に厥荏w；G蛋白耦聯(lián)的雌激素受體

腎氣虧虛是血瘀的重要原因。血瘀多見(jiàn)于中老年人，而腎氣虛亦隨年齡加重。補(bǔ)腎活血化瘀法多用于中醫(yī)臨床治療。許多中藥含有植物雌激素，這類(lèi)物質(zhì)具有雌激素樣活性，能夠模擬雌激素功能，并可以規(guī)避雌激素副作用。近年來(lái)，藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，中藥植物雌激素可通過(guò)其補(bǔ)腎作用而活血化瘀。

1 中藥植物雌激素的補(bǔ)腎作用

雌激素有補(bǔ)腎的功效，其通過(guò)雌激素受體(ER)而發(fā)揮作用。經(jīng)典的ER有細(xì)胞內(nèi)的核受體ER-α及ER-β，并且，二者也見(jiàn)于細(xì)胞膜中。近年來(lái)，發(fā)現(xiàn)了新型的G蛋白耦聯(lián)雌激素受體(GPER)〔1～5〕；另外，雌激素與離子通道蛋白的相互結(jié)合也已見(jiàn)諸報(bào)道〔6〕。植物雌激素廣泛存在于中藥中，可以模擬雌激素的功效，從而起到一定的補(bǔ)腎功效。中藥植物雌激素可見(jiàn)于補(bǔ)虛藥、活血化瘀藥、清熱藥、解表藥、利水滲濕藥、收澀藥及溫里藥等。從分子結(jié)構(gòu)分析，中藥植物雌激素有黃酮類(lèi)、木脂素類(lèi)、香豆素類(lèi)、萜類(lèi)、甾體類(lèi)及其他類(lèi)(如二苯乙烯、真菌源的中藥雌激素、環(huán)肽類(lèi)、酚類(lèi))〔7〕。中藥植物雌激素作為雌激素的結(jié)構(gòu)類(lèi)似物，可與雌激素的各類(lèi)受體相作用，發(fā)揮補(bǔ)腎功效。

2 中藥植物雌激素補(bǔ)腎活血化瘀

雌激素表現(xiàn)中醫(yī)學(xué)的補(bǔ)腎功效，而雌激素在血管系統(tǒng)中的保健治療作用〔8,9〕已逐漸得到認(rèn)可。研究顯示，中藥植物雌激素對(duì)心血管系統(tǒng)有類(lèi)似于雌激素的作用〔10〕。中藥植物雌激素可模擬雌激素，發(fā)揮血管保護(hù)作用，表現(xiàn)一定的補(bǔ)腎活血化瘀功效。

2.1依賴(lài)于ER-α及ER-β的活血化瘀

2.1.1增強(qiáng)血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)的活性與表達(dá) 血管內(nèi)皮細(xì)胞合成的一氧化氮(NO)有舒張血管、抑制平滑肌增殖、抑制血小板凝集、抑制白細(xì)胞黏附血管內(nèi)皮、抗促動(dòng)脈粥樣硬化分子氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)的形成等作用。雌激素作用于ER，通過(guò)激活磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)等，提高eNOS的表達(dá)與活性水平。中藥植物雌激素可發(fā)揮類(lèi)似作用。

2.1.1.1增強(qiáng)eNOS的活性 人參皂苷Rg3快速(5 min)增強(qiáng)ECV304人內(nèi)皮細(xì)胞中eNOS的磷酸化水平。ER拮抗劑ICI182,780、PI3K抑制劑LY294002阻斷eNOS的磷酸化〔11〕。黃柏苷增強(qiáng)ECV304細(xì)胞的eNOS磷酸化，并增強(qiáng)Akt磷酸化，此二者的磷酸化被ER拮抗劑ICI182,780減弱，也為ER-α的siRNA或ER-β的siRNA所減弱，提示ER-α與ER-β都參與該過(guò)程，且貢獻(xiàn)相差不大〔12〕。對(duì)于苯腎上腺素預(yù)收縮的雄性大鼠主動(dòng)脈環(huán)，Rg3表現(xiàn)舒張作用，而ICI182,780、LY294002可將Rg3的舒張作用阻斷〔11〕。人參皂苷Rg3與黃柏苷的作用機(jī)制是有差異的：在黃柏苷激活的信號(hào)通路中，AMP依賴(lài)的蛋白激酶(AMPK)是PI3K的上游激酶；在人參皂苷Rg3激活ER后，AMPK與PI3K處在不同的通路中。

在內(nèi)皮細(xì)胞EA.hy926中，葛根素〔13〕、白樺脂酸〔14〕同樣快速誘導(dǎo)eNOS蛋白磷酸化，而ER的拮抗可減弱葛根素誘導(dǎo)的磷酸化、抑制白樺脂酸誘導(dǎo)的磷酸化。同時(shí)，PI3K的抑制可減弱二者誘導(dǎo)的磷酸化。人參皂苷Rg3、葛根素、白樺脂酸與黃柏苷通過(guò)ER激活PI3K/Akt途徑，誘導(dǎo)eNOS磷酸化的能力不同，這體現(xiàn)在ICI-182,780對(duì)eNOS磷酸化的抑制程度有別。在8～10周齡大鼠的腸系膜上動(dòng)脈環(huán)中，三七皂苷 Ft1作用于ER而增強(qiáng)eNOS磷酸化。經(jīng)Ft1誘導(dǎo)而舒張時(shí)，動(dòng)脈環(huán)的Akt和細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(ERK)1/2活化，引起eNOS發(fā)生磷酸化；ER-β的抑制劑PHTPP削減此三者的磷酸化水平?？梢?jiàn)，介導(dǎo)Ft1功能的是ER-β〔15〕。

2.1.1.2增強(qiáng)eNOS的表達(dá) 中藥植物雌激素可以誘導(dǎo)eNOS的表達(dá)。eNOS磷酸化是非基因的“快速”反應(yīng)，而eNOS表達(dá)的增加需要相對(duì)較長(zhǎng)的時(shí)間才可觀(guān)察到。人參皂苷Rg3對(duì)ECV304人內(nèi)皮細(xì)胞eNOS磷酸化水平的增強(qiáng)在5 min內(nèi)發(fā)生，而對(duì)eNOS表達(dá)的增強(qiáng)則在3～24 h觀(guān)察到〔12〕。丹參酮ⅡA可誘導(dǎo)大鼠心臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞NO合成升高，而此作用被ER拮抗劑ICI182,780所抑制。就eNOS的表達(dá)而言，在30 min到12 h的時(shí)段中，經(jīng)10 μmol/L丹參酮ⅡA誘導(dǎo)，eNOS mRNA 的豐度升高60%～70%。eNOS表達(dá)的增加為ICI-182,780完全抑制，故依賴(lài)于ER〔16〕。芒柄花黃素加強(qiáng)乙酰膽堿對(duì)5-羥色胺預(yù)收縮大鼠腸系膜動(dòng)脈的舒張時(shí)，血管中eNOS mRNA豐度提高，并且，免疫熒光染色顯示了內(nèi)皮細(xì)胞中eNOS蛋白質(zhì)水平相應(yīng)地升高，而ICI182,780、ERK1/2的抑制劑U0126、c-jun氨基末端激酶(JNK)的抑制劑SP600125可抑制這些變化〔17〕。經(jīng)24 h的誘導(dǎo)，丹參隱酮或漢黃芩素提高了EA.hy926細(xì)胞NO的合成，此作用可為ER-α的特異拮抗劑甲基哌啶吡唑(MPP)所阻斷。丹參隱酮、漢黃芩素誘導(dǎo)的eNOS表達(dá)增強(qiáng)也被觀(guān)察到。丹參隱酮、漢黃芩素還可誘導(dǎo)ER-α的表達(dá)升高〔18〕。

2.1.2舒張血管平滑肌 內(nèi)皮細(xì)胞合成的NO進(jìn)入血管平滑肌，激活游離的鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶，催化環(huán)鳥(niǎo)苷酸(cGMP)的生成，從而起到舒張血管作用。除此之外，膜結(jié)合的鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶亦可被中藥植物雌激素激活。雌二醇、白藜蘆醇均可分別激活人冠狀動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的膜結(jié)合鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶-A，增加cGMP的生成，從而起到舒張血管的作用。此作用為ICI182,780減弱。白藜蘆醇的作用大于雌二醇，而且，ICI182,780未能完全抑制白藜蘆醇的作用，這說(shuō)明白藜蘆醇激活膜結(jié)合鳥(niǎo)酸環(huán)化酶-A的作用與ER有關(guān)，但不完全依賴(lài)于ER〔19〕。其實(shí)，白藜蘆醇對(duì)心血管系統(tǒng)有多種保健作用，其作用機(jī)制是多方面的：雌激素樣活性是其中之一〔20,21〕。

因0.1 μmol/L、1.0 μmol/L染料木素或大豆苷元可增加人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVEC)環(huán)氧合酶(COX)-2 mRNA與蛋白質(zhì)水平，前列環(huán)素的生成得以增加，血管平滑肌舒張。ICI182,780的預(yù)處理可降低這兩種植物雌激素的作用。不過(guò)，在更高的濃度下，染料木素與大豆苷元?jiǎng)t無(wú)此作用〔22〕。

2.1.3保護(hù)血管平滑肌 在大鼠平滑肌細(xì)胞中，報(bào)告基因分析顯示杜鵑素具有雌激素樣活性，且此活性被ICI182,780所阻斷，但不受ER-α特異性抑制劑MPP影響。結(jié)合受體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合試驗(yàn)，杜鵑素被證明是ER-β的激活劑。通過(guò)活化ER-β，杜鵑素可抑制5%胎牛血清(FBS)誘導(dǎo)的大鼠胸主動(dòng)脈平滑肌增殖(DNA合成)；ER-β拮抗劑PHTPP能消除杜鵑素的此抑制作用〔23〕。人參皂苷Rb1有效抑制胎牛血清誘導(dǎo)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖，而ICI182,780幾乎完全消除 Rb1的抑制效果。當(dāng)ER-β的表達(dá)因siRNA的敲減而降低時(shí)，Rb1對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖的抑制效果相應(yīng)地出現(xiàn)消減〔24〕。

去甲二氫愈創(chuàng)木酚(NDGA)減弱血管緊張素(Ang)Ⅱ誘發(fā)的血管平滑肌細(xì)胞增殖，而ER-α的敲減(siRNA技術(shù))或它莫昔芬可逆轉(zhuǎn)NDGA的作用。NDGA抗血管平滑肌細(xì)胞增殖的分子作用(被ER-α敲減或它莫昔芬逆轉(zhuǎn))有：肝激酶(LKB)表達(dá)及磷酸化水平的增加，AMPK的磷酸化增加，P21、P27、P53表達(dá)的增加，增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)表達(dá)的減少等。除此之外，其他兩個(gè)發(fā)現(xiàn)是，其一，NDGA誘導(dǎo)ER-α表達(dá)增加，這可以進(jìn)一步加強(qiáng)NDGA的雌激素樣活性；其二，將LBK的siRNA引入細(xì)胞后，ER-α的表達(dá)水平甚至降低到本底水平以下，這提示ER-α與LBK間存在雙向互動(dòng)關(guān)系〔25〕。

葛根素平抑血管平滑肌細(xì)胞向成骨細(xì)胞的分化，這有賴(lài)于ER/PI3K/Akt信號(hào)途徑，與雌激素樣活性有關(guān)。向分離自小鼠主動(dòng)脈鈣化血管平滑肌細(xì)胞(CVSMC)加入葛根素，Akt磷酸化快速出現(xiàn)，并在15 min左右達(dá)到峰值，而后下降。另外，經(jīng)葛根素處理48 h，堿性磷酸酶活性被抑制。在ICI182,780預(yù)處理的情況下，葛根素相關(guān)的堿性磷酸酶活性變化與Akt磷酸化幾乎消失〔26〕。7β-羥基膽固醇誘發(fā)大鼠血管平滑肌細(xì)胞中DNA的片段化與含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase)-3的活性增強(qiáng)，而山柰酚的預(yù)處理使得DNA的片段化與caspase-3的活性減弱。ICI182,780 (1 μmol/L)能夠逆轉(zhuǎn)山柰酚對(duì)caspase-3活性的抑制，并可去除山柰酚對(duì)DNA片段化的作用〔27〕。對(duì)于取自3月齡SD大鼠降主動(dòng)脈的血管平滑肌細(xì)胞，柚皮素有抑制其遷移的作用；該作用為ER-β的特異性抑制劑所阻斷。而且，柚皮素的這一作用未表現(xiàn)與大鼠性別的相關(guān)性〔28〕。在血管炎癥誘導(dǎo)因素脂多糖(LPS)的刺激下，A5r7平滑肌細(xì)胞的NO合成增強(qiáng)、誘導(dǎo)型一氧化氮合成酶(iNOS)表達(dá)增加；而以依賴(lài)ER-β的方式(受ER-β特異性抑制)，丹參隱酮或漢黃芩素能夠降低iNOS及NO升高的幅度。同時(shí)，ER-β的表達(dá)也因LPS升高，并由丹參隱酮或漢黃芩素的作用而回調(diào)〔18〕。

如上所述，植物雌激素阻止血管病理過(guò)程中iNOS的表達(dá)，防止NO的負(fù)面作用。有研究〔29〕發(fā)現(xiàn)，植物雌激素提高血管平滑肌iNOS的活性，引起NO合成增加，從而降低血管平滑肌的增殖。在分離自大鼠動(dòng)脈降支的血管平滑肌細(xì)胞中，白藜蘆醇不改變iNOS的蛋白表達(dá)，但提升iNOS的活性，使NO生成增多，以抑制細(xì)胞的增殖。白藜蘆醇通過(guò)提高NOS激活的輔因子四氫生物蝶蛉(BH4)的水平及BH4合成的限速酶GIP環(huán)化水解酶-Ⅰ(GTCPH)表達(dá)提升iNOS活性。白藜蘆醇的作用與激活ER密切相關(guān)，因?yàn)镮CI182,780大幅消減細(xì)胞增殖、iNOS活性、NO生成、BH4的水平及GTCPH表達(dá)。

2.1.4保護(hù)血管內(nèi)皮 白藜蘆醇提高NO合成，能夠減輕血管損傷小鼠中新內(nèi)膜的增生；而在血管損傷的ER-α-/-小鼠中，白藜蘆醇對(duì)NO的生成無(wú)影響，減輕新內(nèi)膜增生的作用很小。如此差別的原因有三。其一，就NOS活性的本底水平而言，ER-α-/-小鼠已經(jīng)遠(yuǎn)低于野生型小鼠：提示了ER在NO生成中的地位。其二，在白藜蘆醇誘導(dǎo)下，就eNOS和iNOS的蛋白水平的提高而言，野生型小鼠的升高勝于ER-α-/-小鼠。其三，白藜蘆醇顯著增加野生型小鼠動(dòng)脈組織中的BH4濃度和BH4合成的限速酶GTP環(huán)化水解酶-1(GCH-1)的mRNA水平，但對(duì)ER-α-/-小鼠沒(méi)有作用〔30〕。

在體外平行平板流室模擬血管層流剪切的條件下，白藜蘆醇誘導(dǎo)男性主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(HAEC)增殖和損傷修復(fù)，增強(qiáng)ERK的磷酸化；而當(dāng)ER-α的表達(dá)因siRNA敲減而降低 (減少約70.1%)時(shí)，白藜蘆醇的作用不再有。不過(guò)，白藜蘆醇的這些作用與eNOS未見(jiàn)明顯的相關(guān)性〔31〕。

當(dāng)晚期糖基化終產(chǎn)物(AGE)損傷HUVEC內(nèi)皮細(xì)胞，導(dǎo)致ERK1/2磷酸化、核因子(NF)-κB磷酸化及核定位增加時(shí)，毛蕊異黃酮、毛蕊異黃酮的衍生物毛蕊異黃酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(CG)對(duì)其有逆轉(zhuǎn)作用，而該逆轉(zhuǎn)作用又為ICI182,780所阻斷。對(duì)于A(yíng)GE刺激HUVEC而引起的炎癥分子高表達(dá)，毛蕊異黃酮能逆轉(zhuǎn)細(xì)胞間黏附分子(ICAM)-1、晚期糖基化終產(chǎn)物受體(RAGE)的過(guò)度表達(dá)，CG能下調(diào)單核細(xì)胞趨化蛋白(MCP)-1、白細(xì)胞介素(IL)-6的過(guò)度表達(dá)；ICI182,780對(duì)毛蕊異黃酮、CG起到拮抗作用。另外，毛蕊異黃酮可增加ER-α的表達(dá)，ICI182，780則能阻止ER-α的表達(dá)增加〔32，33〕。

染料木素、大豆苷元能夠保護(hù)HUVEC，阻止因過(guò)氧化氫(H2O2)而出現(xiàn)的HUVEC凋亡及HUVEC增殖抑制，而ICI182,780可消除染料木素、大豆苷元的保護(hù)作用。染料木素還有誘導(dǎo)ER-β高表達(dá)的作用，而在ICI182,780的拮抗下，ER-β的表達(dá)不再被染料木素誘導(dǎo)增高?？梢?jiàn)，染料木素、大豆苷元提升內(nèi)皮細(xì)胞ER-β的表達(dá)，并作用于ER-β而防止過(guò)氧化物誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷〔34〕。在雄性大鼠外傷性出血模型中，白藜蘆醇降低血管超氧化物的產(chǎn)生。早于白藜蘆醇30 min注射ICI182,780，該保護(hù)作用消失。模型大鼠的肺損傷、主動(dòng)脈的NADPH氧化酶亞基p22phox、p47phox、gp91phox、NADPH氧化酶(NOX)1、NOX4與血紅素加氧酶(HO)-1 mRNA表達(dá)的增加、血漿谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)及谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)水平的升高，均因白藜蘆醇的作用得以回復(fù)，而ICI182,780的拮抗則破壞白藜蘆醇的作用〔35〕。

絞股藍(lán)皂苷(GP-17)可保護(hù)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞，減少Ox-LDL誘發(fā)的損傷。其一，GP-17可一定程度地回調(diào)因Ox-LDL而降低的ER-α表達(dá)。其二，GP-17 可提高因Ox-LDL而降低的Akt磷酸化。其三，GP-17可增強(qiáng)Ox-LDL對(duì)HO-1及NF-E2相關(guān)因子(Nrf)2表達(dá)的誘導(dǎo)。其四，GP-17可提高因Ox-LDL而降低的抗氧化酶超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)與過(guò)氧化氫酶(CAT)的活性，降低因Ox-LDL而升高的丙二醛(MDA)。其五，GP-17可糾正由Ox-LDL引起的Bcl-2表達(dá)下降、Bax表達(dá)升高及caspase-3的裂解增強(qiáng)。這些保護(hù)作用可為ICI182,780所消減〔36〕。丹參酮ⅡA給予去卵巢的apoE-/-動(dòng)脈硬化雌性小鼠后，雌鼠血清中SOD增加,MDA減少，NF-κB、激活子蛋白(AP)-1、可溶性細(xì)胞間黏附分子(sICAM)-1及E-選擇素(selectin)水平下降，血管ERK1/2的磷酸化水平降低。這些變化因ER拮抗劑 ICI182,780而逆轉(zhuǎn)〔37〕。

2.1.5抗血小板凝集 對(duì)于靜息的血小板及膠原激活的血小板，丹參酮ⅡA能夠調(diào)節(jié)淀粉樣前體蛋白(APP)的裂解方式，從而更多產(chǎn)生可溶性APP(sAPP)α肽，而減少與動(dòng)脈硬化密切相關(guān)的Aβ肽的生成。ER拮抗劑ICI182,780、ER-α特異拮抗劑MPP或PI3K抑制劑LY294002能夠阻斷丹參酮ⅡA的上述效果；在MPP拮抗ER-α的作用存在時(shí)，丹參酮ⅡA對(duì)PI3K活性及其下游信號(hào)分子Akt磷酸化的上調(diào)作用減弱，說(shuō)明丹參酮ⅡA激活ER-α/PI3K/Akt信號(hào)途徑，實(shí)現(xiàn)對(duì)APP裂解的調(diào)節(jié)〔38〕。

根據(jù)Polini等〔39〕的研究，在大鼠動(dòng)脈條的存在下，染料木素能夠抗腺苷二磷酸(ADP)誘導(dǎo)的血小板凝集；以ICI182,780預(yù)處理動(dòng)脈條，染料木素的抗凝集作用被破壞，提示染料木素作用于動(dòng)脈條的ER而發(fā)揮抗血小板凝集作用。另外，如前所述，染料木素、大豆苷元依賴(lài)于ER誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞COX-2表達(dá)，促進(jìn)前列環(huán)素生成〔22〕。由此可見(jiàn)，染料木素抗血小板凝集的作用可能有兩方面：染料木素依賴(lài)膜ER的“快速”作用，提高NO的生成、前列環(huán)素(PGI2)的合成，降低凝血噁烷的生成〔39〕：染料木素依賴(lài)ER調(diào)節(jié)基因表達(dá)，合成更多的COX-2〔22〕。

2.1.6血管再生與重塑 通過(guò)成骨細(xì)胞，薯蕷皂苷元間接誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增殖。在體外實(shí)驗(yàn)中，薯蕷皂苷元提高小鼠MC3T3-E1培養(yǎng)細(xì)胞的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)-A表達(dá)，從而，經(jīng)薯蕷皂苷元誘導(dǎo)后的MC3T3-E1細(xì)胞培養(yǎng)基得以促進(jìn)人臍帶內(nèi)皮細(xì)胞增殖。薯蕷皂苷元的誘導(dǎo)有賴(lài)于ER的作用(為ICI182,780所抑制)，通過(guò)激酶src、PI3K/Akt和P38，激活低氧誘導(dǎo)因子(HIF)-1α而實(shí)現(xiàn)〔40〕。

通過(guò)ER-α/Rho激酶(ROCK)-Ⅱ信號(hào)途徑，芒柄花素誘導(dǎo)HUVEC的遷移及應(yīng)力纖維的形成：這可被ER-α的siRNA或ICI182,780減弱。芒柄花素誘導(dǎo)的ER-α與ROCK-Ⅱ結(jié)合也被ICI182,780所破壞。在ER-α的表達(dá)被siRNA敲減后，芒柄花素誘導(dǎo)的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)2、MMP9表達(dá)降低，芒柄花素誘導(dǎo)的肌球蛋白磷酸酶靶亞基(MYPT)1、LIM激酶(LIMK)1、絲切蛋白(cofilin)及肌球蛋白輕鏈(MLC)2的磷酸化降低。在轉(zhuǎn)基因的斑馬魚(yú)模型之腸下血管區(qū)域，芒柄花素(50 μmol/L)增加芽體生成和內(nèi)皮細(xì)胞增殖。ICI182,780對(duì)芽體生成有一定的抑制作用〔41〕。毛蕊異黃酮促進(jìn)斑馬魚(yú)腸下血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，也促進(jìn)體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖。在促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖時(shí)，毛蕊異黃酮提高了內(nèi)皮細(xì)胞中ERK1/2的磷酸化水平。對(duì)于毛蕊異黃酮的誘導(dǎo)作用，ICI182,780可消除ERK1/2的磷酸化，而部分減少HUVEC的增殖〔42〕。

如上所述，通過(guò)特異性抑制或敲除、敲減等技術(shù)，可以將中藥植物雌激素的活血化瘀作用與ER的活性相聯(lián)系。近年來(lái)，隨著GPER研究的進(jìn)展，中藥植物雌激素補(bǔ)腎活血化瘀的內(nèi)容得以更加豐富。

2.2中藥植物雌激素補(bǔ)腎活血化瘀中的GPER 中藥植物雌激素作用于GPER而實(shí)現(xiàn)的活血化瘀作用不為ICI182,780所抑制,而且，有研究顯示，ICI182,780可以活化GPER的作用(有種屬特性)〔43〕?，F(xiàn)多以G1特異性激活GPER，而以G15、G36為GPER的特異性抑制劑。

與G1的作用機(jī)制相類(lèi)似，原兒茶醛(PCA)通過(guò)GPER，改善內(nèi)皮細(xì)胞功能。PCA可提高內(nèi)皮細(xì)胞環(huán)腺苷酸(cAMP)水平，減少活性氧，降低由腫瘤壞死因子(TNF)-α誘發(fā)的CD-40、血管細(xì)胞黏附分子(VCAM)-1、ICAM-1、HIF-1α高表達(dá)及NF-κB、P38的磷酸化。在球囊損傷的動(dòng)脈中，PCA增強(qiáng)再內(nèi)皮化。同時(shí)，PCA還可誘導(dǎo)GPER表達(dá)加強(qiáng)。G15表現(xiàn)與PCA、G1相反的作用〔44〕。GPER活化后，反式激活表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)，通過(guò)src，Akt、ERK途徑，磷酸化eNOS。Rowlands等〔45〕研究雌馬酚誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞eNOS磷酸化，分別以百日咳毒素(PTX)、AG-1478、PP2對(duì)G蛋白、EGFR、src進(jìn)行抑制，觀(guān)察到Akt、ERK、eNOS的磷酸化被阻斷或減弱；Rowlands等〔45〕由此認(rèn)為，雌馬酚的作用是通過(guò)GPER實(shí)現(xiàn)的。TNF-α誘導(dǎo)eNOS及MMP9的表達(dá)，成為內(nèi)皮細(xì)胞的損傷因素。在內(nèi)皮細(xì)胞EAhy926中，芹菜素對(duì)二者表達(dá)的阻斷與其雌激素樣活性密切相關(guān)。芹菜素的此功能既可被ICI182,780逆轉(zhuǎn)，又因PTX而消減。TNF-α增強(qiáng)蛋白激酶B(PKB)活性而誘導(dǎo)eNOS及MMP9表達(dá)增加，芹菜素則降低了TNF-α誘導(dǎo)的PKB磷酸化，而ICI182,780或PTX均有效地消除芹菜素的此作用。ICI182,780對(duì)芹菜素作用的逆轉(zhuǎn)說(shuō)明了ER的參與；而且，PTX的抑制作用說(shuō)明了GPER的參與〔46〕。不過(guò)，Gi有參與ER的信號(hào)傳遞的可能〔47〕；芹菜素并非雌激素，也不能排除芹菜素激活ER及GPER之外的受體而激活Gi/o。若如此，PTX的抑制作用或不能明確GPER參與了芹菜素的功能。

染料木素與GPER有相對(duì)較高的親和力(相對(duì)親和力約為雌二醇的13%)〔48〕，作用于GPER的可能性較大。染料木素可加強(qiáng)A23187舒張自發(fā)性高血壓大鼠主動(dòng)脈環(huán)的作用，染料木素的作用因G蛋白(Gi/G0)、ER-α或表皮生長(zhǎng)因子受體的抑制而消減〔49〕。由此分析，ER-α(研究人員認(rèn)為可能為ER-46)參與了此過(guò)程，GPER也有可能參與其中，GPER與ER間或存在協(xié)作關(guān)系〔50〕。與分離自正常大鼠的肺動(dòng)脈相比較，從缺氧14 d大鼠分離得到的肺動(dòng)脈在經(jīng)苯腎上腺素收縮后，對(duì)卡巴膽堿的舒張反應(yīng)受損。17β-雌二醇、染料木素或大豆苷元均可恢復(fù)此舒張反應(yīng)性，并且，三者的作用同樣被NOS抑制劑阻斷。ICI182,780又對(duì)三者的作用均無(wú)影響〔51〕。那么，雌二醇的此作用不依賴(lài)ER，很有可能是依賴(lài)于GPER；染料木素、大豆苷元的作用機(jī)制或是類(lèi)同的。與此相似的研究發(fā)現(xiàn)有，在乙酰膽堿誘導(dǎo)苯腎上腺素預(yù)收縮的高血壓模型大鼠血管環(huán)舒張時(shí)，17β-雌二醇、染料木素或大豆苷元也以不受ICI182,780抑制的方式，增強(qiáng)血管舒張〔52〕。

白藜蘆醇誘導(dǎo)豬視網(wǎng)膜小動(dòng)脈的舒張，有賴(lài)于血管內(nèi)皮合成的NO的作用及不依賴(lài)血管內(nèi)皮的平滑肌自身舒張，而平滑肌的自身舒張因大電導(dǎo)Ca2+激活K+通道的阻斷而被抑制〔53〕。后者與G-1激活GPER而舒張冠狀動(dòng)脈平滑肌的機(jī)制相似〔54〕。雌激素不止作用于熟知的ER，很多的離子通道蛋白可以與雌激素結(jié)合〔6〕?？梢酝茰y(cè)，通過(guò)激活這些雌激素“新受體”，雌激素、中藥植物雌激素或者也可發(fā)揮補(bǔ)腎活血化瘀的功效。探討中藥雌激素的雌激素樣活性、雌激素“新受體”與活血化瘀間的聯(lián)系，研究成果可期。

氣為血之帥，中藥植物雌激素通過(guò)補(bǔ)腎而活血化瘀，提示中藥植物雌激素在瘀血證相關(guān)疾病中的治療作用〔55〕，從而補(bǔ)腎活血化瘀，降低循環(huán)系統(tǒng)的外周阻力。中藥植物雌激素可模擬雌激素的作用，實(shí)現(xiàn)補(bǔ)腎活血化瘀的功能，其機(jī)制的研究為在中醫(yī)理論指導(dǎo)下的新型中藥開(kāi)發(fā)提供了可能。同時(shí)，中藥植物雌激素的補(bǔ)腎活血化瘀作用或可為減緩衰老，養(yǎng)生保健提供新的思路。