崔文浩 鄭江程

（衢州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，浙江衢州324000）

黑牛肝菌（Phlebopus portentosus）又名暗褐網(wǎng)柄牛肝菌，隸屬于擔(dān)子菌門、傘菌綱牛肝菌目、小牛肝菌科、脈柄牛肝菌屬[1]。黑牛肝菌味道鮮美、營養(yǎng)價(jià)值高，是一種極具經(jīng)濟(jì)價(jià)值的食用菌品種。由于黑牛肝菌是一種高溫型食用菌，其菌絲在不當(dāng)?shù)蜏貤l件下保藏容易死亡，從而影響菌種的保藏效果和繼代繁殖[1]。筆者研究了不同保藏溫度對(duì)黑牛肝菌菌絲生物學(xué)特性的影響[2]，篩選出適合黑牛肝菌菌種保藏的溫度條件?，F(xiàn)將試驗(yàn)結(jié)果總結(jié)如下。

1 材料與方法

1.1 供試材料

菌株黑牛肝菌菌株是云南西雙版納地區(qū)引進(jìn)，在衢州當(dāng)?shù)厝斯ぴ耘嗟淖訉?shí)體分離得到。

1.2 培養(yǎng)基配方

菌種培養(yǎng)基配方：松樹葉200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，谷物8 g，K2HPO41 g，MgSO40.5 g，水1 L，pH 6。

栽培料配方：發(fā)酵木屑69%，谷物20%，玉米粉10%，糖1%。

1.3 試驗(yàn)方法

將長滿菌絲的斜面培養(yǎng)基分別放置于4℃、8℃條件下冷藏15 d，30 d，45 d（28℃常溫保藏45 d菌株作為對(duì)照組，下同）。試管樣品取出后在28℃下活化3 d，轉(zhuǎn)接到7 cm平板培養(yǎng)基上，在28℃恒溫培養(yǎng)箱中恢復(fù)培養(yǎng)。每個(gè)處理5個(gè)重復(fù)。觀察、測(cè)量各處理間菌絲的萌發(fā)率、菌絲生長速度、菌絲形態(tài)等。

將培養(yǎng)料基質(zhì)拌勻后分裝到直徑24 mm的試管中，滅菌2 h。將低溫處理的黑牛肝菌試管活化后轉(zhuǎn)接到7 cm平板培養(yǎng)基上，培養(yǎng)20 d后選取大小相同的牛肝菌菌絲塊轉(zhuǎn)接到試管中。每個(gè)處理接種5個(gè)重復(fù)。記錄牛肝菌菌絲的發(fā)菌速度。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同保藏溫度對(duì)黑牛肝菌菌株成活率和菌絲形態(tài)的影響

表1結(jié)果表明，黑牛肝菌菌株在4℃保藏15 d后活力下降，接種萌發(fā)率只有40%。當(dāng)保藏時(shí)間超過 30 d，菌株全部失去萌發(fā)能力。而在8℃條件下，菌株保藏超過45 d仍然有萌發(fā)能力。觀察平板培養(yǎng)基上的菌絲形態(tài)，如圖1。4℃保藏15 d和8℃保藏45 d的菌株氣生菌絲發(fā)達(dá)，菌落邊緣有一圈明顯的白色絨毛，菌絲后期容易分泌出褐色水珠。8℃保藏15 d與對(duì)照菌絲形態(tài)相似，菌絲貼于培養(yǎng)基生長，會(huì)形成一層緊實(shí)的菌皮，且生長后期少量分泌或不分泌褐色水珠。8℃保藏30 d的菌落氣生菌絲和匍匐菌絲相互混合，菌落形態(tài)較8℃保藏15 d濃密。

表1 不同保藏溫度對(duì)黑牛肝菌菌種的保藏效果

圖1 不同保藏溫度牛肝菌在平板培養(yǎng)基上的生長情況

2.2 不同保藏溫度對(duì)黑牛肝菌菌絲體生長速度的影響

對(duì)平板培養(yǎng)基內(nèi)所有萌發(fā)的菌株進(jìn)行十字交叉法測(cè)量菌絲生長速度，如表2。結(jié)果表明，菌株萌發(fā)生長的前期（10 d內(nèi)），4℃保藏15 d的菌絲生長速度與8℃保藏15 d、8℃保藏30 d有顯著差異。說明4℃保藏15 d的菌株活化、萌發(fā)速度最快，但菌絲生長10 d以后，菌絲生長速度下降，不同保藏溫度的菌絲生長速度沒有顯著差異。

表2 不同處理黑牛肝菌菌絲在平板培養(yǎng)基上的生長速度

2.3 黑牛肝菌菌株在培養(yǎng)料基質(zhì)上發(fā)菌情況

選取經(jīng)活化、大小相同的黑牛肝菌菌塊轉(zhuǎn)接到裝滿木屑培養(yǎng)料的試管中，觀察菌絲在基質(zhì)中的發(fā)菌速度，如表3。結(jié)果表明，在萌發(fā)生長前期（30～40 d），4℃保藏15 d的菌株菌絲和8℃保藏45 d及對(duì)照的菌株生長速度快且與8℃保藏15 d差異顯著。接種40 d后8℃保藏30 d的菌絲生長速度下降，4℃保藏15 d、4℃保藏45 d和對(duì)照三個(gè)處理的菌株發(fā)菌速度與8℃保藏15 d、8℃保藏30 d差異顯著。

表3 不同處理黑牛肝菌轉(zhuǎn)接在培養(yǎng)料基質(zhì)上的菌絲長速

3 小結(jié)與討論

試驗(yàn)研究了4℃和8℃兩種低溫對(duì)黑牛肝菌菌種活力的影響。結(jié)果表明，4℃低溫條件保藏15 d后黑牛肝菌菌種萌發(fā)率只有40%，保藏30 d后黑牛肝菌菌種全部失活，說明黑牛肝菌菌種不適合在4℃條件下保藏。而在8℃保藏超過45 d，黑牛肝菌菌種依然具有較好的活力，說明8℃可以作為長期保藏黑牛肝菌的溫度條件。

不同處理間菌落形態(tài)差別很大。在8℃保藏15 d和30 d的菌株在平板培養(yǎng)基上菌落以匍匐菌絲為主，且菌絲萌發(fā)速度較慢。這可能與黑牛肝菌菌絲在8℃下處于休眠狀態(tài)，活化萌發(fā)需要一定時(shí)間有關(guān)。4℃保藏15 d的黑牛肝菌菌落氣生菌絲發(fā)達(dá)，且容易分泌褐色水珠；同時(shí)轉(zhuǎn)接菌絲在平板培養(yǎng)基和培養(yǎng)料基質(zhì)上的發(fā)菌速度較快，與未冷藏的對(duì)照菌株沒有顯著差異。這可能與短時(shí)間4℃處理后黑牛肝菌菌絲表現(xiàn)出低溫抗氧化應(yīng)答，抗氧化酶活性提高有關(guān)[3]，需做進(jìn)一步的研究。