李熙建，何凌波，嚴(yán) 羽，張立營(yíng)，陳 樸

(四川省宜賓市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科 644000)

糖化血紅蛋白(HbA1c)是一項(xiàng)反映糖尿病病情進(jìn)展和評(píng)估慢性并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)的一項(xiàng)重要指標(biāo)[1]，對(duì)其相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)及影響因素的了解、分析和掌握，以保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、精密性和可比性，為臨床提供有質(zhì)量保障的檢驗(yàn)結(jié)果，是實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)人員的職責(zé)。HbA1c的檢測(cè)較傳統(tǒng)血糖檢測(cè)有較明顯的優(yōu)勢(shì)，包括分析前不穩(wěn)定小，生物變異小，無(wú)需空腹或特定的時(shí)間抽血等，所以在臨床上的應(yīng)用更廣泛。一些資料指出，嚴(yán)重的高三酰甘油血癥、高膽紅素血癥和尿毒癥均可引起HbA1c假性升高[2-4]。這幾種情況的影響應(yīng)當(dāng)視不同的檢測(cè)方法學(xué)而定，不同的檢測(cè)方法檢測(cè)原理不同，抗干擾性能也不同，所以受影響的程度也不一樣。本文用具體的試驗(yàn)數(shù)據(jù)來(lái)分析、驗(yàn)證高三酰甘油、高膽紅素和溶血對(duì)陽(yáng)離子交換高效液相色譜法(IE-HPLC)檢測(cè)HbA1c是否有影響及具體影響情況，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取本院門(mén)診、住院及健康體檢者標(biāo)本80份，其HbA1c水平在2.9%～17.2%。收集多天、多例患者標(biāo)本，混勻，進(jìn)行檢測(cè)，其三酰甘油(TG)水平為21.6 mmol/L、膽紅素(BiL)水平為306 μmol/L。

1.2方法

1.2.1儀器與試劑 Arkray HA8180全自動(dòng)糖化血紅蛋白分析儀及配套試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和配套耗材[愛(ài)科來(lái)國(guó)際貿(mào)易(上海)有限公司]，并按廠家要求更換防護(hù)片和分析柱，采用反相陽(yáng)離子交換層析法。其校準(zhǔn)品以國(guó)際臨床化學(xué)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)聯(lián)合會(huì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)作為溯源終點(diǎn)，確保溯源至美國(guó)國(guó)家糖化血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)劃值BW3626(低)、BW3625(高)，本次校準(zhǔn)品低值為5.3%，高值為10.4%。室內(nèi)質(zhì)控品測(cè)定值均符合質(zhì)控規(guī)則要求。

1.2.2精密度檢測(cè) 選取低、中、高值水平(4.6%、7.2%、12.1%)進(jìn)行精密度試驗(yàn)。不同水平每天不同時(shí)間測(cè)定5次，連續(xù)測(cè)定6 d，分別得出批內(nèi)和批間變異系數(shù)(CV)。

1.2.3TG干擾試驗(yàn) 將收集多天、多例患者得到的高TG混合血漿(水平為21.6 mmoL/L)，保留一部分原水平標(biāo)本(20 mL),然后將該水平用生理鹽水按3∶4、2∶4、1∶4的比例進(jìn)行稀釋，形成21.6、16.2、10.8、5.4 mmoL/L 4種不同的水平。然后分別加入到預(yù)先挑選出來(lái)的HbA1c試驗(yàn)標(biāo)本中(共80份)。將80份分為4組，每組20份，每組標(biāo)本均包括低、中、高不同水平，其水平范圍在2.9%～17.0%。在每一測(cè)定標(biāo)本中，分別加入上述水平的TG混合血漿1 mL，混勻，上機(jī)進(jìn)行檢測(cè)，對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行比較分析。

1.2.4BiL干擾試驗(yàn) 將收集多天、多例患者得到的BiL混合血漿(水平為306.0 μmoL/L)，按不同比例與生理鹽水進(jìn)行稀釋，使BiL形成306.0、229.0、153.0、76.5 μmoL/L 4種不同水平，然后采用與TG干擾試驗(yàn)相似的方法，分別加入到預(yù)先挑選出來(lái)的HbA1c試驗(yàn)標(biāo)本中(共80份)。80份標(biāo)本分為4組，每組20份，水平范圍3.9%～17.2%，包括低、中、高不同水平。在每一測(cè)定標(biāo)本中，分別加入上述水平的BiL混合血漿1 mL，混勻、檢測(cè)、分析。

1.2.5對(duì)溶血的影響 選取不同水平標(biāo)本20份，HbA1c水平范圍4.1%～16.2%，然后對(duì)標(biāo)本中的紅細(xì)胞進(jìn)行破壞，致使其溶血，再進(jìn)行檢測(cè)和數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，分析當(dāng)有外在條件造成溶血時(shí)，其檢驗(yàn)結(jié)果是否受到影響及具體影響。

2 結(jié) 果

2.1不同HbA1c水平時(shí)批內(nèi)和批間精密度比較 見(jiàn)表1。通過(guò)對(duì)不同水平各30個(gè)精密度數(shù)據(jù)的分析發(fā)現(xiàn)，批內(nèi)、批間CV均小于1%，說(shuō)明該儀器的精密度性能優(yōu)良。

表1 儀器精密度性能檢測(cè)情況

2.2不同水平TG對(duì)HbA1c檢測(cè)結(jié)果的影響 將4種不同水平(5.4～21.6 mmoL/L)的TG加入到不同水平(2.9%～17.0%)的HbA1c標(biāo)本管中，采用IE-HPLC檢測(cè)HbA1c結(jié)果無(wú)明顯影響(P>0.05)，其數(shù)據(jù)的分布也是隨機(jī)波動(dòng)，并未受到因加入水平的不同而出現(xiàn)趨勢(shì)性變化，見(jiàn)表2。

表2 不同水平TG對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響(n=20)

2.3不同水平BiL對(duì)HbA1c檢測(cè)結(jié)果的影響 將4種不同水平的BiL加入到不同水平(3.9%～17.2%)的HbA1c標(biāo)本中進(jìn)行測(cè)定，見(jiàn)表3。通過(guò)配對(duì)計(jì)量資料t檢驗(yàn)示t值較低，均小于1，按t臨界值表示t0.05/2.19=2.093,得P>0.05，說(shuō)明其檢測(cè)結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。從對(duì)數(shù)據(jù)的觀察分析可知，HbA1c未受不同水平BiL的干擾而出現(xiàn)趨勢(shì)變化。

2.4同一標(biāo)本在溶血前后檢測(cè)結(jié)果的變化情況 通過(guò)對(duì)20例HbA1c不同水平(4.1%～16.2%)標(biāo)本進(jìn)行溶血前后檢測(cè)的數(shù)據(jù)顯示，其結(jié)果波動(dòng)范圍為-0.2～0.2，差值均數(shù)0.02，差值、標(biāo)本標(biāo)準(zhǔn)差0.083 4，提示IE-HPLC對(duì)HbA1c的檢測(cè)不受是否溶血的影響(t=1.073 1,P>0.05)。

表3 不同水平BiL對(duì)HbA1c檢測(cè)結(jié)果的影響(n=20)

3 討 論

HbA1c作為糖尿病最新篩查、診斷、血糖控制和療效考核的有效檢測(cè)指標(biāo)，發(fā)揮著較重要的作用。實(shí)驗(yàn)室工作人員致力于儀器的優(yōu)化和了解各種因素對(duì)檢測(cè)方法的影響，以減小臨床誤診或漏診，來(lái)提高檢測(cè)結(jié)果的正確度是檢驗(yàn)工作人員做好本職工作的重點(diǎn)之一。

通過(guò)試驗(yàn)分析高三酰甘油、高膽紅素及溶血對(duì)IE-HPLC檢測(cè)HbA1c時(shí)的影響情況，目的在于監(jiān)測(cè)該檢測(cè)方法的性能，了解檢驗(yàn)過(guò)程中是否存在問(wèn)題，以達(dá)到掌握、控制系統(tǒng)穩(wěn)定性的目的。

本研究的初衷是驗(yàn)證文獻(xiàn)[2-4]中報(bào)道的一些觀點(diǎn)，文中提到的嚴(yán)重高三酰甘油血癥、高膽紅素血癥對(duì)HbA1c的檢測(cè)結(jié)果有影響。作者查閱了較長(zhǎng)一段時(shí)間的資料，均未發(fā)現(xiàn)相關(guān)影響的具體數(shù)據(jù)。而本文作者認(rèn)為，檢測(cè)方法不同，其抗干擾的性能也會(huì)有所不同，于是才進(jìn)行本研究的試驗(yàn)設(shè)計(jì)和得出了一系列具體試驗(yàn)數(shù)據(jù)，證明了就IE-HPLC檢測(cè)HbA1c而言，BiL、TG、溶血這幾項(xiàng)影響因素均不會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果造成統(tǒng)計(jì)學(xué)意義上的影響，其檢測(cè)值是可信的，符合臨床要求。

HA8181分析儀檢測(cè)HbA1c是通過(guò)反相陽(yáng)離子交換層析法檢測(cè)，通過(guò)溶血，洗滌液稀釋的血液標(biāo)本送到層析柱，層析柱根據(jù)HPLC將此標(biāo)本分離為多種血紅蛋白成分，通過(guò)雙波長(zhǎng)比色法檢測(cè)從層析柱洗脫的各成分，用微型計(jì)算機(jī)處理所得結(jié)果，從而獲得峰鑒別和水平。它的計(jì)算公式采用HbA1c峰面積/ΣHbA峰面積[5]，由于HbA1c的檢測(cè)與傳統(tǒng)空腹血糖和餐后2 h血糖比較，它有生物變異小，分析前不穩(wěn)定小，無(wú)需空腹或特定時(shí)間抽血，受應(yīng)激性(如應(yīng)激、疾病相關(guān))血糖波動(dòng)的影響較小，能反映長(zhǎng)期血糖和慢性并發(fā)癥風(fēng)險(xiǎn)，可用于指導(dǎo)糖尿病的管理和治療方案的調(diào)整，且已根據(jù)美國(guó)糖尿病控制和并發(fā)癥試驗(yàn)或英國(guó)前瞻性糖尿病研究方法標(biāo)準(zhǔn)化和校準(zhǔn)等優(yōu)點(diǎn)[5]，越來(lái)越受到更多的歡迎與采用。所以，對(duì)其影響因素的探討和具體影響情況的分析，乃至更為全面的了解，就顯得尤為重要。

本研究顯示，總CV為0.77%～0.82%，而B(niǎo)ARGA等[6]根據(jù)生物學(xué)變異數(shù)據(jù)推薦的HbA1c測(cè)定分析質(zhì)量目標(biāo)為日間CV<2%。我國(guó)衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)CV應(yīng)不超過(guò)3%，且盡量控制在2%以內(nèi)[7]。說(shuō)明本儀器的精密度達(dá)到了比較優(yōu)秀的水平，這是本研究進(jìn)行其他試驗(yàn)與分析的前提與基礎(chǔ)。檢驗(yàn)質(zhì)量的全面掌控涉及檢驗(yàn)分析過(guò)程的前、中、后多個(gè)階段。采血順利與否，標(biāo)本抗凝與保存，以及離心力與離心時(shí)間等原因，極易造成檢測(cè)標(biāo)本溶血；而患者的飲食及身體狀況，以及一些臨床治療，也容易使標(biāo)本出現(xiàn)脂血等情況；肝功能受損時(shí)引起糖代謝紊亂，出現(xiàn)糖耐量異常，甚至顯性糖尿病，長(zhǎng)期血糖波動(dòng)會(huì)進(jìn)一步促進(jìn)肝纖維化形成，影響肝病預(yù)后，以及其他疾病或相關(guān)并發(fā)癥的出現(xiàn)，均可造成BiL升高[8]。這也是本研究選取溶血、脂血、BiL作為監(jiān)控和此次分析的重點(diǎn)和目標(biāo)的原因，同時(shí)，這幾種影響因素也是在檢驗(yàn)分析中最常見(jiàn)的影響因素。

通過(guò)本研究的數(shù)據(jù)分析，明確了對(duì)IE-HPLC，尤其對(duì)Arkray HA8180分析儀而言檢測(cè)HbA1c，當(dāng)BiL<306 μmoL/L、TG<21.6 mmol/L，以及在采血、運(yùn)輸過(guò)程中造成細(xì)胞外溶血，這些影響因素對(duì)檢測(cè)結(jié)果差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，其精密度、抗干擾性、準(zhǔn)確性均較好，完全滿足臨床對(duì)HbA1c檢測(cè)的需求。同時(shí)也說(shuō)明不同檢測(cè)方法的抗干擾能力有差別，有的抗干擾能力較強(qiáng)，幾乎不受其干擾因素的影響。只有對(duì)檢測(cè)方法作出正確的方法學(xué)評(píng)價(jià)，才能對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和檢驗(yàn)質(zhì)量的提高做到心中有數(shù)，更好地為患者和臨床提供服務(wù)。