任健 王澤

宮頸病變系宮頸區(qū)域發(fā)生的各種病變，其包括腫瘤、癌前病變等，宮頸癌前病變是導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生的前提條件，宮頸上皮內(nèi)瘤變（Cervical intraepithelial neoplasia，CIN）是與子宮頸浸潤癌密切相關(guān)的一組宮頸病變，大多數(shù)CIN I患者可自然消退，少數(shù)會進一步發(fā)展，最終極少數(shù)可發(fā)展為浸潤癌，因此，及時有效篩查CIN是預(yù)防宮頸癌的有效措施[1-3]。近年來研究發(fā)現(xiàn)P63和ki-67蛋白表達在不同宮頸病變程度上具有差異，不過相關(guān)報道尚少[4-5]。為進一步證實上述結(jié)論，本研究擇取2015年2月—2017年8月行宮頸活檢患者200例，分析P63與ki-67蛋白在宮頸病變組織的表達及與病變程度的關(guān)系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

對廣元市第一人民醫(yī)院2015年2月—2017年8月行宮頸活檢患者200例的病理資料進行分析。200例行宮頸活檢患者年齡35～71歲，平均年齡（48.21±4.57）歲；CIN I級37例，CIN II級46例，CIN III級47例，浸潤癌70例。70例浸潤癌患者病理分級為G1級15例，G2級43例，G3級12例；依照國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）分期標(biāo)準(zhǔn)進行分期包括：Ia期9例，Ib期29例，IIa期18例，IIb期14例。另選取40例正常宮頸上皮組織者作為對照，年齡36～72歲，平均年齡（48.37±5.16）歲。兩組臨床資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），存在可比性。

1.2 方法

采用SP法進行免疫組化染色，DAB顯色。石蠟切片脫蠟水化后進行微波抗原修復(fù)，采用過氧化酶阻斷劑滅活內(nèi)源性過氧化物酶活性，以免疫組化封閉液封閉，滴加第一抗體，并在4℃溫度下處理，然后滴加生物素標(biāo)記的二抗，滴加鏈親和素-過氧化物酶溶液。采用DAB進行顯色，蘇木素復(fù)染。陽性對照采用已知陽性組織切片，陰性對照采用PBS代替一抗。試劑采用鼠抗人P63單克隆抗體和鼠抗人ki-67單克隆抗體，DAB試劑盒來自于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司，SP試劑盒購自于北京中杉生物技術(shù)開發(fā)公司。

1.3 結(jié)果評價

通過顯微鏡觀察細(xì)胞核，發(fā)現(xiàn)棕黃色顆粒，即為P63和ki-67陽性細(xì)胞。對每張切片隨機觀察5個高倍視野，每個視野計數(shù)100個腫瘤細(xì)胞，以此進行陽性病例判斷。無棕黃色染色或染色陽性細(xì)胞數(shù)低于10%為陰性（-）；陽性細(xì)胞數(shù)在10%～25%為弱陽性（+）；陽性細(xì)胞數(shù)在26%～50%為中等陽性（++）；陽性細(xì)胞書在50%及以上為強陽性（+++）；陽性細(xì)胞數(shù)在10%及以上即可判定為陽性病例。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 20.0軟件分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料采用χ2檢驗，采用（%）表示，采用Pearson相關(guān)性分析法進行分析，P＜0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同類型宮頸病變組織中P63和ki-67表達情況

CIN、宮頸癌患者的P63、ki-67表達陽性率高于正常組織，而宮頸癌患者的P63、ki-67表達陽性率較CIN患者高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；CIN I、CIN II、CIN III、宮頸癌患者的P63、ki-67表達陽性率差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表 1。

表1 不同類型宮頸病變組織中P63和ki-67表達情況

2.2 P63和ki-67在宮頸組織中表達的相關(guān)性分析

經(jīng)Pearson相關(guān)性分析表明，P63與ki-67蛋白表達與宮頸病變程度呈正相關(guān)性（r=0.642、r=0.721，P均＜0.05），提示隨著宮頸病變的進展，P63與ki-67蛋白陽性表達率也逐漸增強。

3 討論

宮頸病變的篩查診斷一直是臨床重要研究課題，及時明確診斷有助于預(yù)防宮頸癌，近年來研究發(fā)現(xiàn)P63基因，P63是P53基因家族新成員，主要于染色體3q27～3q29區(qū)，其存在于許多上皮組織基底層中，且表現(xiàn)為高表達，再經(jīng)過轉(zhuǎn)錄之后產(chǎn)生TAp63和△Np63兩種產(chǎn)物，其中△Np63可能存在癌基因作用，通過將同源野生型P53活性下調(diào)來參與腫瘤形成及對相關(guān)細(xì)胞凋亡進行抑制[6-8]。Ki-67是與增殖細(xì)胞相關(guān)的一種核抗原，存在于增殖細(xì)胞之中，參與細(xì)胞周期調(diào)控，由于其具有半衰期短的特性，且陽性表達可覆蓋于整個有絲分裂期，因此能夠?qū)⒓?xì)胞增殖活性較好反映出來[9-10]。

P63和ki-67蛋白是近年來在宮頸病變診斷中受到廣泛關(guān)注的指標(biāo)，已有研究發(fā)現(xiàn)兩者在不同宮頸病變類型中表達不同[11]。有學(xué)者研究中顯示[12]，CIN I、CIN II、CIN III及宮頸癌患者中P63和ki-67蛋白的陽性表達率高于正常組織，CIN III和宮頸癌陽性表達率高于CIN I和CIN II，宮頸癌陽性表達率比CIN III高。而本研究結(jié)果顯示，CIN、宮頸癌患者的P63、ki-67表達陽性率高于正常組織，CIN I、CIN II、CIN III、宮頸癌患者的P63、ki-67表達陽性率均有差異，提示P63和ki-67隨著宮頸病變的進展其陽性表達率逐漸上升，經(jīng)相關(guān)性分析顯示，P63與ki-37與宮頸病變呈正相關(guān)性，與上述研究結(jié)果相符。

綜合上述，P63與ki-67蛋白的陽性表達可預(yù)測宮頸病變，且P63與ki-67蛋白陽性表達與宮頸病變嚴(yán)重程度呈正相關(guān)性。