教 瑞 萬(wàn)義增 陳素賢

(錦州醫(yī)科大學(xué)病理教研室，遼寧 錦州 121000)

結(jié)直腸癌是世界范圍內(nèi)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，死亡率高達(dá)53%〔1〕，其浸潤(rùn)、侵襲和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移成為影響患者生存的最大問(wèn)題。去整合素-金屬蛋白酶(ADAM17)是新近被發(fā)現(xiàn)的具有蛋白剪切酶樣作用的基因，眾多研究表明該基因在多種惡性腫瘤組織中過(guò)表達(dá)〔2〕。人表皮生長(zhǎng)因子受體(HER)-2與瘤周血管生成、侵襲轉(zhuǎn)移等瘤細(xì)胞活動(dòng)密切相關(guān)，參與腫瘤進(jìn)展過(guò)程〔3〕。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的高表達(dá)與許多腫瘤的發(fā)生、侵襲轉(zhuǎn)移都相關(guān)，在結(jié)直腸癌中的高表達(dá)可能提示預(yù)后不良，但也有Cao等〔4〕有不同的觀點(diǎn)，表示VEGF可能在判斷結(jié)直腸癌預(yù)后方面并無(wú)意義。本研究探討ADAM17、HER-2及VEGF在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1標(biāo)本 收集錦州醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院2015～2016年的結(jié)直腸癌手術(shù)患者的新鮮標(biāo)本(癌組織和距腫瘤至少5cm的癌旁組織)及其對(duì)應(yīng)的蠟塊組織共41例，患者均為經(jīng)結(jié)腸鏡活檢病理回報(bào)為結(jié)直腸癌的原發(fā)性結(jié)直腸癌首發(fā)病例，術(shù)前均未經(jīng)過(guò)新輔助化療，其中男22例，女19例，年齡40～82歲，平均57歲，其中高-中分化26例，低分化及黏液腺癌共15例，13例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，28例無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。

1.2實(shí)驗(yàn)方法 采用免疫組化(IHC)S-ABC方法檢測(cè)結(jié)直腸癌和癌旁組織中ADAM17、HER-2及VEGF的表達(dá)水平。

1.3結(jié)果判定方法 (1) ADAM17與VEGF均表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，為棕褐色或黃色顆粒。其表達(dá)水平通過(guò)腫瘤細(xì)胞染色的比例與染色強(qiáng)度得分相乘之積來(lái)評(píng)判，染色比例評(píng)分：0分(≤5%)，1分(6%～25%)，2分(26%～50%)，3分(≥51%)；染色強(qiáng)度評(píng)分：0分(無(wú)染色)，1分(黃色)，2分(棕黃色)，3分(褐色)。兩評(píng)分相乘之積≤3認(rèn)定為低表達(dá)，否則為高表達(dá)。(2) HER-2表達(dá)于細(xì)胞膜，其結(jié)果評(píng)估標(biāo)準(zhǔn)為：無(wú)反應(yīng)或<10%的腫瘤細(xì)胞膜染色評(píng)定為0；≥10%的在腫瘤細(xì)胞微弱或隱約可見(jiàn)膜染色評(píng)定為1+；≥10%的腫瘤細(xì)胞有弱到中度的側(cè)膜、基底側(cè)膜或完全性膜染色評(píng)定為2+；≥10%腫瘤細(xì)胞側(cè)膜、基底側(cè)膜或完全性膜強(qiáng)染色則評(píng)定為3+。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)及Spearman相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1ADAM17在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系 ADAM17陽(yáng)性表達(dá)于胞質(zhì)。在正常腸黏膜組織中無(wú)表達(dá)或僅有少量表達(dá)。在41例癌旁組織中僅有3例呈弱陽(yáng)性表達(dá)，其余均為陰性。而在癌組織中，ADAM17的陽(yáng)性表達(dá)明顯增多，胞質(zhì)可見(jiàn)明顯的棕黃色顆粒(圖1)，陽(yáng)性表達(dá)率高達(dá)68.3%，與癌旁正常組織相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。ADAM17陽(yáng)性表達(dá)與患者的腫瘤浸潤(rùn)深度、TNM分期及是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)(P<0.05)，見(jiàn)表1。

2.2HER-2在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及臨床指標(biāo)的關(guān)系 HER-2陽(yáng)性表達(dá)于胞膜，在正常腸黏膜組織中無(wú)表達(dá)或呈弱陽(yáng)性表達(dá)，41例癌旁組織中40例為陰性表達(dá)，而在與其對(duì)應(yīng)的癌組織中11例胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒(圖2)，陽(yáng)性表達(dá)率為26.8%，與癌旁組織相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。腫瘤的TNM分期及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與HER-2陽(yáng)性表達(dá)率明顯相關(guān)(P<0.05)，見(jiàn)表1。

2.3VEGF在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及臨床指標(biāo)的關(guān)系 VEGF陽(yáng)性表達(dá)于胞質(zhì)，41例癌旁組織中，8例(19.5%)有一定程度的陽(yáng)性表達(dá)，余為陰性。而在41例癌組織中，31例標(biāo)本都于胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒(圖3)，陽(yáng)性率為75.6%，與癌旁組織相比，差異顯著(P<0.05)。VEGF陽(yáng)性表達(dá)率與腫瘤浸潤(rùn)深度、TNM分期及有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 ADAM17、HER-2、VEGF的表達(dá)與結(jié)直腸癌臨床病理特征的關(guān)系(n)

圖1 ADAM17在結(jié)直腸癌及癌旁組織中的表達(dá) (IHC，×400)

圖2 HER-2在結(jié)直腸癌(A)及癌旁組織(B)中的表達(dá)(IHC，×400)

圖3 VEGF在結(jié)直腸癌及癌旁組織中的表達(dá) (IHC，×400)

2.4ADAM17、HER-2及VEGF在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)的相關(guān)性 ADAM17與HER-2之間無(wú)相關(guān)性(P>0.05)，見(jiàn)表2；VEGF分別與ADAM17、HER-2明顯相關(guān)(P<0.05)，見(jiàn)表3，表4。

表2 ADAM17與HER-2表達(dá)的相關(guān)性(n)

表3 ADAM17與VEGF表達(dá)的相關(guān)性(n)

表4 HER-2與VEGF表達(dá)的相關(guān)性(n)

3 討 論

ADAM17具有蛋白剪切酶樣作用，可水解釋放多種表皮生長(zhǎng)因子(EGFR)的配體，EGFR的膜外部分與配體結(jié)合，激活EGFR的酪氨酸激酶活性，進(jìn)而介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)，調(diào)節(jié)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移〔5〕。Wang等〔6〕還發(fā)現(xiàn)ADAM17可以調(diào)節(jié)結(jié)直腸癌干細(xì)胞的生長(zhǎng)，影響其化療敏感性。結(jié)直腸癌組織中的ADAM17表達(dá)量與EGFR的表達(dá)水平密切相關(guān)〔7〕，HER-2具有同樣的酪氨酸激酶活性，那么ADAM17是否也會(huì)通過(guò)HER-2來(lái)影響結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程目前尚無(wú)定論。ADAM17還具有顯著的基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)樣作用，有蛋白水解酶活性，可產(chǎn)生一定的降解基質(zhì)的作用。正如MMP家族(MMP2、MMP9等)在降解細(xì)胞外基質(zhì)的同時(shí)會(huì)釋放VEGF一樣，Zheng等〔8〕發(fā)現(xiàn)ADAM17也會(huì)通過(guò)調(diào)節(jié)VEGF的表達(dá)增加來(lái)促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)。相關(guān)研究亦指出HER-2的過(guò)表達(dá)也可以通過(guò)上調(diào)VEGF的表達(dá)來(lái)促進(jìn)腫瘤新生血管的生成進(jìn)而增加腫瘤細(xì)胞的侵襲力〔9〕。

在免疫組化切片上突破基底膜，浸潤(rùn)至肌層的瘤細(xì)胞其ADAM17的表達(dá)強(qiáng)于尚未突破基底膜的瘤細(xì)胞，對(duì)其參與腫瘤浸潤(rùn)提供了側(cè)面證據(jù)。ADAM17可能還參與瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移行為，Walkiewicz等〔10〕證實(shí)發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織ADAM17陽(yáng)性率遠(yuǎn)高于未發(fā)生轉(zhuǎn)移的組織，本實(shí)驗(yàn)與該研究結(jié)果一致。與Wu等〔11〕對(duì)2 867例結(jié)直腸癌患者進(jìn)行回顧性分析所得出的結(jié)論一致，存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者及TNM分期越高的患者，HER-2表達(dá)越強(qiáng)。最新研究顯示HER-2還參與了腫瘤的早期轉(zhuǎn)移過(guò)程，HER-2陽(yáng)性提示著患者更差的預(yù)后及惡性程度更高的腫瘤生物學(xué)行為〔12〕。VEGF在許多良惡性腫瘤中均有表達(dá)〔13〕，相關(guān)研究顯示結(jié)直腸癌患者血清中VEGF的表達(dá)水平顯著高于正常對(duì)照組，伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者血清VEGF水平比無(wú)轉(zhuǎn)移者高〔14，15〕，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與上述研究一致，即VEGF陽(yáng)性表達(dá)率與有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，此外還與腫瘤浸潤(rùn)深度及TNM分期有關(guān)。本研究結(jié)果提示ADAM17和HER-2可能通過(guò)不同的途徑促進(jìn)VEGF的表達(dá)增加，進(jìn)而促進(jìn)血管生成，促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)。亦有可能由于本次實(shí)驗(yàn)的樣本含量有限造成的統(tǒng)計(jì)誤差，下一步可通過(guò)免疫共沉淀的方式對(duì)ADAM17和HER-2的關(guān)系進(jìn)行進(jìn)一步的求證。

如今采用檢測(cè)HER-2來(lái)預(yù)測(cè)患者的抗HER-2治療潛質(zhì)的措施已明確納入了乳腺癌與胃癌的診治指南當(dāng)中，針對(duì)HER-2基因的靶向治療藥物——曲妥珠單抗早已廣泛應(yīng)用于臨床〔16〕，盡管在乳腺癌中應(yīng)用較早且較為成熟，大多數(shù)患者也因此獲益，但曲妥珠單抗在乳腺癌的靶向治療中單藥有效率尚不足30%，大部分患者在一年內(nèi)先后出現(xiàn)耐藥，應(yīng)用前景不容樂(lè)觀。此外對(duì)于VEGF的靶向治療藥物——貝伐單抗等藥物依然存在耐藥及禁忌證等應(yīng)用限制。靶向藥物費(fèi)用昂貴也成為其使用受限的一大原因，因此，積極尋找HER-2、VEGF的上游或下游因子，提供新的治療靶點(diǎn)，協(xié)同或替代曲妥珠單抗、貝伐單抗等靶向治療藥物，為患者提供更多的選擇，將會(huì)造福更多的患者。同時(shí)ADAM17作為HER-2及VEGF的上游因子對(duì)結(jié)直腸癌的早期診斷，預(yù)后判斷及新的靶向藥物研發(fā)等方面均存在重要意義。三者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)篩選高危轉(zhuǎn)移患者，制定個(gè)體化化療方案等方面具有重要價(jià)值。