趙漢寧　吳瑗　米娜

【摘要】經(jīng)典免疫學(xué)抗原抗體反應(yīng)實(shí)驗(yàn)包括凝集反應(yīng)，沉淀反應(yīng)等實(shí)驗(yàn)，是醫(yī)學(xué)本科實(shí)驗(yàn)教學(xué)中必不可少的內(nèi)容，這些經(jīng)典的免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)，如授課教師能靈活采用不同授課方法，不僅有助于學(xué)生加深對醫(yī)學(xué)免疫學(xué)基本概念和理論的理解掌握，而且也有助于培養(yǎng)學(xué)生的嚴(yán)謹(jǐn)科學(xué)思維方式，鍛煉學(xué)生的動手動腦等綜合能力。

【關(guān)鍵詞】免疫學(xué) 玻片凝聚反應(yīng) 對流免疫電泳 實(shí)驗(yàn)教學(xué)

經(jīng)典免疫學(xué)抗原抗體反應(yīng)實(shí)驗(yàn)課開展多年，授課教師如能靈活采用不同授課方法，也有助于學(xué)生加深對深奧抽象的醫(yī)學(xué)免疫學(xué)理論內(nèi)容的理解掌握，并且能加強(qiáng)學(xué)生的實(shí)驗(yàn)操作技能，提高動手能力，激發(fā)其學(xué)習(xí)興趣。

一、凝集反應(yīng)

經(jīng)典免疫學(xué)凝集反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中，玻片凝集是重點(diǎn)操作內(nèi)容之一，適合采用以教師提出問題引導(dǎo)，學(xué)生主導(dǎo)自行設(shè)計實(shí)驗(yàn)路線并開展操作。教師如何設(shè)置問題并引導(dǎo)學(xué)生開展實(shí)驗(yàn)?zāi)兀渴紫冉Y(jié)合實(shí)際情況，每班進(jìn)行分組操作，實(shí)驗(yàn)材料按照分組發(fā)放到臺面上。帶課老師首先簡要講述凝集反應(yīng)概念，然后進(jìn)入主題，圍繞如何開展玻片凝集實(shí)驗(yàn)設(shè)置如下幾個問題，通過玻片凝聚實(shí)驗(yàn)如何鑒定出斜面培養(yǎng)基上的未知細(xì)菌？如何設(shè)計好實(shí)驗(yàn)路線？應(yīng)該設(shè)立哪些對照組？操作過程要注意哪些事項？觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果除了凝集塊還注意哪些現(xiàn)象？對實(shí)驗(yàn)結(jié)果如何分析？如何判斷結(jié)果中假陽性或假陰性？提示參考實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)教材相關(guān)內(nèi)容和結(jié)合桌面上分發(fā)的試劑材料等來設(shè)計實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)操作結(jié)束后每一組派代表發(fā)言并把實(shí)驗(yàn)結(jié)果畫在黑板上，然后教師針對實(shí)驗(yàn)進(jìn)行總結(jié)，還可結(jié)合玻片凝集反應(yīng)講述抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的特點(diǎn)和討論抗原抗體反應(yīng)的影響因素。

教師作用主要是引導(dǎo)同學(xué)們提出問題，分析問題，解決問題，教師作用從臺前變成幕后，盡管角色改變，但工作量不減，教師課前必須做好充分準(zhǔn)備，對實(shí)驗(yàn)設(shè)計、操作注意事項、如何結(jié)果分析及討論做到心中有底。問題提出后，同學(xué)們就開始積極活動起來，首先是同學(xué)們組內(nèi)討論如何設(shè)計實(shí)驗(yàn)，觀察桌面上有哪些器材試劑？學(xué)生查資料的查資料，思考的思考，觀察的觀察，討論的討論，都動起來，最后大家統(tǒng)一確定實(shí)驗(yàn)方案，有些組存在疑問就跟老師及時溝通討論，對于同學(xué)們提出問題，教師耐心解答，試管凝集實(shí)驗(yàn)也可通過類似教學(xué)方法開展。

二、沉淀反應(yīng)

對流免疫電泳是沉淀反應(yīng)的重點(diǎn)內(nèi)容之一，要求同學(xué)們動手操作。與凝集反應(yīng)教學(xué)方法有所不同，沉淀反應(yīng)授課方式教師先講解示范，然后同學(xué)們再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。教師上課首先開始講解沉淀反應(yīng)概念，本次實(shí)驗(yàn)主要是凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)，對流免疫電泳為重點(diǎn)操作實(shí)驗(yàn)之一。以對流免疫電泳為例，時間安排上先講解這部分內(nèi)容。緊接著馬上進(jìn)行此實(shí)驗(yàn)操作，跑電泳期間再講解其他的沉淀反應(yīng)，如單項擴(kuò)散，火箭電泳，雙向擴(kuò)散，免疫固定電泳等示教內(nèi)容。這里特別強(qiáng)調(diào)教師講解對流免疫電泳整個過程，包括從制板、打孔、加樣、搭橋、電泳，都要演示操作給同學(xué)們看，邊演示邊講解，關(guān)鍵地方特別強(qiáng)調(diào)。比如瓊脂制板中要趁熱吸取4ml瓊脂，倒板一氣呵成。等幾分鐘膠凝固才可打孔，如何才能打好孔？首先捏緊膠頭把空氣盡量排出來，放開膠頭吸瓊脂時動作要迅速。加樣時，可用毛細(xì)吸管或微量進(jìn)樣器，保證樣品加到孔；加樣要加滿，但不能溢出，絕不能讓兩個孔之間樣品溢出串在一起，如何鑒定小孔加滿樣品呢？一方面可以從側(cè)面觀察，另一方面也可以用微量進(jìn)樣器定量10微升樣品加入，當(dāng)然前提是孔必須打好。搭橋?yàn)V紙片必須濕潤才能導(dǎo)電，可用鑷子夾濾紙片，要求盡量一次性就搭好橋。電泳前特別提醒陰陽極不能放錯，抗原放陰極端，可記諧音“原因”。特別強(qiáng)調(diào)注意用電安全，關(guān)電才能拿出玻片觀察結(jié)果。分析結(jié)果可采用提問題方式，例如出現(xiàn)和不出現(xiàn)沉淀線說明什么？沉淀線粗細(xì)又說明什么？為什么要求抗原放在陰極，抗體放在陽極？電壓、緩沖液PH值對結(jié)果有何影響？利用對流免疫電泳原理并結(jié)合操作過程來分析這些問題。特別強(qiáng)調(diào)，教師注意控制講解示范時間，要留給同學(xué)們足夠時間來操作實(shí)驗(yàn)。

三、結(jié)果

四、討論

玻片凝集反應(yīng)實(shí)驗(yàn)操作更適合采用教師提出問題引導(dǎo)，同學(xué)們自行設(shè)計實(shí)驗(yàn)路線并完成實(shí)驗(yàn)操作的教學(xué)方法。首先，無菌操作等基本實(shí)驗(yàn)技術(shù)同學(xué)們前面做微生物實(shí)驗(yàn)時已經(jīng)學(xué)過；其次，免疫學(xué)抗原抗體特異結(jié)合理論課已經(jīng)講過；最后，玻片凝集實(shí)驗(yàn)是本次實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)內(nèi)容之一，玻片凝集實(shí)驗(yàn)操作內(nèi)容是用已知診斷血清檢測未知細(xì)菌，實(shí)驗(yàn)設(shè)計不復(fù)雜，操作相對簡單，結(jié)果容易出現(xiàn)，操作時間不是太久，整個實(shí)驗(yàn)過程從設(shè)計，操作，結(jié)果，討論分析是完整的。另外，同學(xué)們?nèi)绻鍪』蜻€想重復(fù)做，還有時間再做。

對流免疫電泳實(shí)驗(yàn)為什么特別強(qiáng)調(diào)教師詳細(xì)講解示范然后同學(xué)再操作呢？理由如下。

首先，沉淀反應(yīng)實(shí)驗(yàn)原理比較抽象復(fù)雜、操作要求更精細(xì)準(zhǔn)確、對流免疫電泳注意事項比較多，相對繁瑣等；其次，對流免疫電泳過程需要40～60分鐘左右才能出現(xiàn)結(jié)果，如果實(shí)驗(yàn)失敗沒有出現(xiàn)預(yù)想結(jié)果，這堂課就沒有時間重復(fù)做了；最后，理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果不容易出現(xiàn)，稍不注意某個細(xì)節(jié)，實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象不像凝集反應(yīng)結(jié)果那么明顯，所以操作之前，教師要強(qiáng)調(diào)注意事項，那些關(guān)鍵細(xì)節(jié)特別指出，一定要先邊示教邊講解。對流免疫電泳由老師先詳細(xì)地講解實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和實(shí)驗(yàn)步驟，十分有利于學(xué)生短時間內(nèi)掌握實(shí)驗(yàn)注意事項等基礎(chǔ)知識，規(guī)定時間內(nèi)能順利完成實(shí)驗(yàn)。

五、結(jié)語

針對經(jīng)典免疫學(xué)抗原抗體反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，教學(xué)方法要因地制宜，根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容以及操作要求來采用不同的教學(xué)方法，值得一提的是，經(jīng)典免疫學(xué)內(nèi)容略顯陳舊，課時偏少等，如何深化免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革，以使學(xué)生更好地掌握相關(guān)知識并培養(yǎng)綜合能力，值得進(jìn)一步探討。

參考文獻(xiàn)：

[1]高興春，郭娜，李愛連.提高醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)課教學(xué)效果的探索及體會[J].中國免疫學(xué)雜志，2017，（02）：280.