趙林靜 張振超 劉世國

【摘要】目的：分析河南省家畜、家禽和寵物中弓形蟲感染狀況。方法：隨機(jī)提取河南省各地動物樣品，酚氯仿法提取總DNA，弓形蟲529 重復(fù)序列為靶基因，巢式PCR檢測樣品目的基因。結(jié)果：各種動物弓形蟲陽性率不同，總陽性率是14.31%。結(jié)論：貓感染率最高，豬和鴿感染率最低。

【關(guān)鍵詞】弓形蟲；家畜；家禽；寵物；巢式PCR

【中圖分類號】R249 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】B 【文章編號】2095-6851（2018）10-168-01

了解食用肉類中弓形蟲感染情況對弓形蟲預(yù)防很有意義。弓形蟲檢測包括血清學(xué)、形態(tài)學(xué)、動物接種和核酸檢測等，其中巢式PCR靈敏度高，適用于流行病學(xué)調(diào)查[1]，目前基于529片段的巢式PCR被應(yīng)用于弓形蟲檢測。

1 材料和方法

1.1 試劑 蛋白酶K購自Merck公司，Tris飽和酚和PCR擴(kuò)增試劑購自康為公司，弓形蟲RH株保存在本實(shí)驗(yàn)室，其余試劑均購自國內(nèi)。

1.2 樣品采集和處理 共計(jì)1909例組織和血樣，隨機(jī)采自省內(nèi)的8個(gè)市場、12個(gè)家禽場和434位農(nóng)戶。采樣后均置于-80℃超低溫保存。

1.3 提取樣品DNA 組織樣入液氮研粉，血樣去紅細(xì)胞離心獲取沉淀后于56°C蛋白酶K消化后次離心，留上清液提取樣品DNA和弓形蟲RH株。

1.4 巢式PCR擴(kuò)增 樣品基因組DNA為模板，引物序列如下，外套引物F： 5'-CGC TGC AGG GAG GAA GAC GAA AGTTG-3' 和R：5'-CGC TGC AGA CAC AGT GCA TCT GGA TT-3'；內(nèi)套引物F： 5'-AGA AGG GAC AGA AGT CGA AG–3' 和 R： 5'–CTC CAC TCT TCA ATT CTC TCC–3'。引物由生工公司合成，PCR條件：95℃2min； 95℃30s，68℃30s，72℃50s，共35個(gè)循環(huán)；95℃30s，58℃30，72℃50s，72℃5min，共15個(gè)循環(huán)。弓形蟲RH株DNA為陽性對照，正常血樣DNA為陰性對照，ddH2O為空白對照。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析 SPSS19.0軟件，x2檢驗(yàn)比較陽性率，P<0.05為差異有意義。

2 結(jié)果

2.1 擴(kuò)增結(jié)果 目標(biāo)條帶是260 bp，即弓形蟲529片段。RH株在260bp有明顯條帶，陰性對照和空白對照均無目標(biāo)條帶。

2.2 河南省家畜家禽中弓形蟲陽性率

2.3 河南省家畜肉類中弓形蟲陽性率

2.4 河南省家禽肉類中弓形蟲陽性率 雞肉和鴨肉x2=38.594；雞肉和鵝肉x2=7.137；雞肉和鴿肉x2=82.972；鴨肉和鵝肉x2=11.512；鴨肉和鴿肉x2=6.015；鵝肉和鴿肉x2=36.684，差異均P<0.05。

3 討論

貓是弓形蟲的終宿主，貓糞便中的卵囊容易污染環(huán)境，狗的皮毛中卵囊也容易傳染給人類[2]，寵物是人類弓形蟲感染的重要來源，另一個(gè)感染的途徑是食用被弓形蟲感染的肉類。蟲體在動物組織中形成包囊，烹飪不當(dāng)會導(dǎo)致人類弓形蟲感染。家畜和家禽的弓形蟲感染率在不同的國家和地區(qū)是不同的[3-5]。

河南省位于中國中部，淡水湖泊等水域面積小，豬肉、牛肉、羊肉和雞肉是當(dāng)?shù)鼐用竦闹饕馐硜碓?，而鴨和鵝的食用量比南方少。在河南省家畜中，豬弓形蟲感染率最低，而牛和羊的感染率最高，因?yàn)樨i是人工飼養(yǎng)，但牛和羊多是半放牧式飼養(yǎng)，牛和羊更多接觸到草和土壤中的弓形蟲卵囊。

在家禽中鵝的弓形蟲感染率最高。Maksimov 于2010年報(bào)道[6]在德國鴨和鵝的弓形蟲感染率相似。鵝的生長周期比鴨的長，因此鵝的弓形蟲感染率高于鴨。河南省雞的飼料是菜葉青草，也增加了雞的弓形蟲感染率。鴿子通常被籠養(yǎng)，飼料是谷物，所以鴿的弓形蟲感染率最低。

寵物最容易被弓形蟲感染，其次是家禽和家畜。貓和狗的特別健康婦幼天地弓形蟲感染率差別很明顯。貓是弓形蟲的終宿主并且接觸鼠類多，所以貓弓形蟲感染率高；而狗弓形蟲感染率比貓低。

參考文獻(xiàn)：

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