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(廣東省第二人民醫(yī)院，廣東 廣州 510317)

脫落細(xì)胞學(xué)技術(shù)屬于一種病理學(xué)先進(jìn)技術(shù)，主要通過(guò)將患者病變部位的細(xì)胞采集下來(lái)制片染色，然后病理醫(yī)師對(duì)玻片進(jìn)行觀察，從而對(duì)患者病情進(jìn)行診斷[1]?，F(xiàn)階段，TCT、傳統(tǒng)涂片法是臨床通常采用的脫落細(xì)胞學(xué)制片方法[2]。本研究回顧性分析了2016年7月～2018年7月我院收治的胸腔積液標(biāo)本40份的相關(guān)資料，對(duì)胸腔積液脫落細(xì)胞的不同制片方法及其病理學(xué)進(jìn)行了研究，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1一般資料：隨機(jī)選取2016年7月～2018年7月我院收治的胸腔積液標(biāo)本40份，其中男性標(biāo)本20份，女性標(biāo)本20份，年齡17～92歲，平均(54.3±9.6)歲。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本采集與處理：將200～500 ml胸腔積液標(biāo)本采集下來(lái)送檢，至少送檢3次，從而在極大程度上提升腫瘤細(xì)胞檢出率。通常情況下，離體后30 min內(nèi)是最佳送檢時(shí)機(jī)，最好在處理與固定標(biāo)本15 min內(nèi)送檢，這時(shí)脫落細(xì)胞具有最小的退變程度。如果無(wú)法及時(shí)送檢、制片、固定或低溫保存，則可以將適量50%乙醇或40%甲醛加入固定，從而對(duì)胸腔積液變質(zhì)退變的現(xiàn)象進(jìn)行有效預(yù)防。

1.2.2不同制片方法

1.2.2.1新柏氏液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)(TCT)：在2個(gè)容積為14 ml的離心管中置入同一患者的同一瓶胸腔積液，對(duì)其進(jìn)行離心，速率為2 500～3 000 r/min，15 min左右后將上清液棄去，將沉淀物留置下來(lái)，將超薄液基波層處理液加入，2 h左右后再次離心，將上清液取出來(lái)，將上清液倒出過(guò)程中使殘留水分不對(duì)檢測(cè)造成不良影響得到切實(shí)有效的保證，然后將一個(gè)離心管底部的沉淀物吸取出來(lái)，在TCT專用玻片夾中放入，再向TCT專用制片機(jī)中放入，將細(xì)胞薄片制作出來(lái)，直徑為2 cm，制片后用95%乙醇固定15 min，最后進(jìn)行蘇木素-伊紅(HE)染色，梯度乙醇脫水二甲苯透明后用中性樹膠封片，保證濕封。

1.2.2.2傳統(tǒng)涂片法：吸取另一個(gè)離心管中的沉淀物，在載玻片上均勻涂抹，稍干燥后95%乙醇固定15 min，然后進(jìn)行蘇木素-伊紅(HE)染色，梯度乙醇脫水二甲苯透明后用中性樹膠封片，保證濕封。完成胸腔積液脫落細(xì)胞制片后在顯微鏡下放置觀察判斷。復(fù)檢陽(yáng)性載玻片，對(duì)誤診、漏診的發(fā)生進(jìn)行有效預(yù)防。

1.3判斷標(biāo)準(zhǔn)：癌癥檢出標(biāo)準(zhǔn)為觀察結(jié)果陽(yáng)性[3]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用SPSS21.0軟件進(jìn)行分析處理，計(jì)數(shù)資料用率(%)表示，用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1不同制片方法標(biāo)本細(xì)胞形態(tài)與質(zhì)量比較：TCT具有較多的細(xì)胞量、干凈的背景、適當(dāng)?shù)募?xì)胞厚薄、均勻的分布、清晰的細(xì)胞形態(tài)與結(jié)構(gòu)，偶見(jiàn)細(xì)胞退變。傳統(tǒng)涂片法具有較多的細(xì)胞量，缺乏干凈的背景，血細(xì)胞、炎細(xì)胞覆蓋細(xì)胞或細(xì)胞相互重疊，很難識(shí)別，具有模糊的細(xì)胞形態(tài)與結(jié)構(gòu)，常見(jiàn)細(xì)胞退變。

2.2不同制片方法檢查結(jié)果比較：TCT檢查陽(yáng)性率15.0%(6/40)顯著高于傳統(tǒng)涂片法7.5%(3/40)(P<0.05)，但兩者檢查可疑率、陰性率2.5%(1/40)、82.5%(33/40)VS 5.0%(2/40)、87.5%(35/40)之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1不同制片方法檢查結(jié)果比較[例(%)]

制片方法例數(shù)陽(yáng)性可疑陰性TCT406(15.0)1(2.5)33(82.5)傳統(tǒng)涂片法403(7.5)2(5.0)35(87.5)χ2值11.141.320.86P值<0.05>0.05>0.05

3 討論

液基薄層細(xì)胞制片檢查系統(tǒng)處理技術(shù)誕生于1991年美國(guó)等國(guó)家，率先應(yīng)用于婦科細(xì)胞學(xué)檢查，國(guó)內(nèi)從2001年開(kāi)始作液基細(xì)胞學(xué)篩查宮頸癌的研究，使該項(xiàng)技術(shù)得到迅速發(fā)展，被稱之為一場(chǎng)細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)的革命，從根本上解決了常規(guī)脫落細(xì)胞制片假陰性率高(15%～20%)、丟失細(xì)胞率高(80%)和涂片質(zhì)量差等技術(shù)難題，使宮頸癌的陽(yáng)性檢出率達(dá)95%以上，為脫落細(xì)胞學(xué)診斷作出了重大貢獻(xiàn)。但是過(guò)去該技術(shù)需要國(guó)外的制片機(jī)、細(xì)胞保存液等，他的價(jià)格昂貴，在國(guó)內(nèi)也只能是一些大醫(yī)院才能開(kāi)展該項(xiàng)目，在基層醫(yī)院的推廣則比較緩慢。為此，我們聯(lián)合國(guó)內(nèi)的有關(guān)廠家合作研發(fā)了半自動(dòng)的離心法制片機(jī)，并自主研發(fā)了細(xì)胞保存液，大大地降低了液基薄層細(xì)胞的制片成本，從而使該項(xiàng)技術(shù)易于被廣大基層醫(yī)院所接受且進(jìn)行推廣使用。目前，他已成為篩查宮頸癌最好的推薦方法之一，為宮頸癌的早期診斷和治療提供了非常明確的診斷依據(jù)，是一項(xiàng)非常值得推廣應(yīng)用的臨床操作技術(shù)。對(duì)胸腔積液進(jìn)行離心后，其腫瘤細(xì)胞會(huì)集中分布，絕大部分細(xì)胞呈圓形或類圓形，同時(shí)呈片狀分布，通常情況下還會(huì)呈細(xì)胞團(tuán)，形式為特定組織形態(tài)[4]。相關(guān)醫(yī)學(xué)研究表明[5]，胸腔積液脫落細(xì)胞學(xué)薄層液基制片術(shù)能夠集中載破片上的細(xì)胞，將優(yōu)質(zhì)細(xì)胞HE片制作出來(lái)，促進(jìn)腫瘤檢查陽(yáng)性率的提升，將手工涂片的各種弊端解決掉，比如，嚴(yán)重丟失細(xì)胞、缺乏良好的制片質(zhì)量、通常情況下血細(xì)胞、炎性反應(yīng)細(xì)胞覆蓋細(xì)胞或細(xì)胞相互重疊造成病理醫(yī)師很難識(shí)別、在沒(méi)有及時(shí)固定的情況下涂片細(xì)胞會(huì)干燥退變而對(duì)診斷造成不良影響等。液基細(xì)胞學(xué)制片具有多方面的優(yōu)越性，具體體現(xiàn)在：對(duì)采集與處理標(biāo)本方法進(jìn)行了變革，將細(xì)胞涂膜面積縮小，破壞大部分紅細(xì)胞或?qū)⑵湎?，溶解黏液絲，在極大程度上減少炎性反應(yīng)細(xì)胞，清晰觀察異常細(xì)胞，促進(jìn)漏診率的降低，且具有清晰的細(xì)胞圖像、分明的層次，能夠清晰觀察核膜、核仁、染色質(zhì)等細(xì)微結(jié)構(gòu)，從而促進(jìn)細(xì)胞病理學(xué)診斷價(jià)值的有效提升。當(dāng)然，臨床醫(yī)師的閱片經(jīng)驗(yàn)也對(duì)其造成了直接而深刻的影響[6]。

胸腔指的是由膈肌和胸廓圍成的總腔,胸膜腔是由臟壁兩層胸膜在左右兩肺周圍圍成的一個(gè)完全封閉的潛在性腔隙,腔內(nèi)含少量漿液,起到潤(rùn)滑作用。我們常說(shuō)胸腔積液,實(shí)際上是胸膜腔積液。胸腔積液,可由多種疾病引起,治療上主要針對(duì)原發(fā)病,漏出液常在病因糾正后自行吸收,滲出性胸膜炎中以結(jié)核性多見(jiàn),其次為炎性反應(yīng)性和癌性胸膜炎,應(yīng)針對(duì)其病因,進(jìn)行抗結(jié)核,抗炎等治療,并可行胸腔穿刺抽液，其預(yù)后與原發(fā)病有關(guān),腫瘤所致者預(yù)后較差。胸腔積液具有較為復(fù)雜的情況，如果單個(gè)腫瘤細(xì)胞長(zhǎng)時(shí)間懸浮于液態(tài)環(huán)境中，那么其原有形態(tài)就可能發(fā)生改變，這樣必然會(huì)將困擾帶給臨床診斷工作。因此，在診斷過(guò)程中應(yīng)該給予成團(tuán)細(xì)胞以充分關(guān)注，如，通常情況下，癌腺細(xì)胞會(huì)呈腺泡狀，之后再結(jié)合特染等。胸腔積液是一種臨床癥狀，在臨床極為常見(jiàn)，在一些情況下甚至是唯一的臨床表現(xiàn)，尤其是肺腺癌會(huì)較早有胸腔積液出現(xiàn)，發(fā)生這一現(xiàn)象的原因?yàn)槠溆行啬まD(zhuǎn)移發(fā)生，造成臨床在胸腔積液的影響下很難對(duì)原發(fā)癌進(jìn)行影像學(xué)診斷，在這種情況下，可以將胸腔積液抽取出來(lái)，對(duì)其進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查，從而為診斷和鑒別診斷肺癌提供有效依據(jù)。而腫瘤細(xì)胞在脫落向胸腔的過(guò)程中，通常情況下，那些成團(tuán)的細(xì)胞能夠?qū)⒛[瘤組織形態(tài)保留下來(lái)。因此，在癌癥檢查手段中，胸腔積液脫落細(xì)胞學(xué)檢查已經(jīng)占有極為重要的地位[7]。相關(guān)醫(yī)學(xué)研究表明[8]，采用TCT技術(shù)將優(yōu)質(zhì)的胸腔積液脫落細(xì)胞HE片制備出來(lái)能夠促進(jìn)胸腔積液脫落細(xì)胞病理學(xué)檢查陽(yáng)性率的提升，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤診斷中脫落細(xì)胞學(xué)應(yīng)用價(jià)值的提升，將更為準(zhǔn)確的診斷結(jié)果獲取過(guò)來(lái)，因此受到了臨床的廣泛關(guān)注和普遍認(rèn)可。

液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測(cè)技術(shù)(Thin-Cytologic Test TCT)，是近年新發(fā)展起來(lái)的一種細(xì)胞學(xué)診斷新技術(shù)，改變了以往巴氏涂片檢測(cè)方法的不足，標(biāo)本取出后立即洗入細(xì)胞保存液中，經(jīng)程序化處理，制成均勻的薄層涂片，使薄片中的不正常細(xì)胞容易觀察，并且固定的細(xì)胞核結(jié)構(gòu)清楚，易于鑒別。需要做液基薄層細(xì)胞檢測(cè)者有：宮頸炎、宮頸糜爛應(yīng)作為常規(guī)檢查；從未接受子宮刮片檢查；過(guò)早開(kāi)始有性行為；自身或丈夫超過(guò)一個(gè)性伴侶；曾患和性行為有關(guān)疾病如滴蟲、梅毒等;HPV病毒感染；長(zhǎng)期慢性宮頸炎。本研究為了研究胸腔積液脫落細(xì)胞的不同制片方法及其病理學(xué)，隨機(jī)選取2016年7月～2018年7月我院收治的胸腔積液標(biāo)本40份，均分別運(yùn)用TCT、傳統(tǒng)涂片法制片，然后比較不同制片方法標(biāo)本細(xì)胞形態(tài)與質(zhì)量，并統(tǒng)計(jì)分析不同制片方法檢查結(jié)果，結(jié)果表明，TCT具有較多的細(xì)胞量、干凈的背景、適當(dāng)?shù)募?xì)胞厚薄、均勻的分布、清晰的細(xì)胞形態(tài)與結(jié)構(gòu)，偶見(jiàn)細(xì)胞退變；傳統(tǒng)涂片法具有較多的細(xì)胞量，缺乏干凈的背景，血細(xì)胞、炎細(xì)胞覆蓋細(xì)胞或細(xì)胞相互重疊，很難識(shí)別，具有模糊的細(xì)胞形態(tài)與結(jié)構(gòu)，常見(jiàn)細(xì)胞退變。TCT檢查陽(yáng)性率15.0%(6/40)顯著高于傳統(tǒng)涂片法7.5%(3/40)(P<0.05)，但兩者檢查可疑率、陰性率2.5%(1/40)、82.5%(33/40)VS 5.0%(2/40)、87.5%(35/40)之間的差異均不顯著(P>0.05)，和上述相關(guān)醫(yī)學(xué)研究結(jié)果一致。

總之，胸腔積液脫落細(xì)胞的TCT技術(shù)能夠集中載破片上的細(xì)胞，將優(yōu)質(zhì)的細(xì)胞HE片制作出來(lái)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞病理學(xué)檢查陽(yáng)性率的提升，從而促進(jìn)腫瘤診斷中脫落細(xì)胞學(xué)應(yīng)用價(jià)值的提升，值得推廣。